（1云南省昆明医科大学海源学院 云南昆明 650106)
（2昆明医科大学基础医学院病理教研室 650500)
（3昆明医科大学第二附属医院病理科 650101）
【摘要】肝细胞癌（HCC）是世界常见肿瘤之一，HCC高发地区高达60%-90%的患者有乙型肝炎病毒感染。羰基还原酶1（CBR1）属于氧化还原酶类蛋白质，它在HCC中高表达，但在慢性乙型肝炎中的表达目前尚无研究。本研究中CBR1在30例慢性乙型肝炎病例中出现弱阳性-阳性表达，对慢性乙型肝炎患者后期发展成为HCC是否具有早期提示性意义；慢性乙型肝炎时出现的炎症严重程度、范围以及纤维组织增生，是否与CBR1的阳性表达有一定的关系；有待进一步研究。
【关键词】CBR1 慢性乙型肝炎 HCC
【中图分类号】R512.6+2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）34-0188-02
全世界大约有1/3的人群存在既往或现在感染乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）的血清学证据，3.5亿人为慢性乙型肝炎病毒感染者。慢性乙型肝炎的发病率和死亡率与持续的病毒复制和向肝硬化和肝癌的进展有关。研究表明，诊断慢性乙型肝炎后肝硬化五年累计发生率在8-20%不等。肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是世界最常见肿瘤之一，发病率占所有癌症患者的5%。慢性乙型肝炎患者中HBV相关性HCC的发病率较高，有报道称肝癌高发地区高达60%-90%的患者有HBV感染。肝硬化一旦诊断，HCC的年发病率可以高达2%-5%。羰基还原酶（carbonyl reductases,CBRs）由Ris and von Wartburg于1973年从人脑组织中分离出来[1]。CBRs属于一类氧化还原酶类蛋白质，它保存在蛋白质氨基酸残基中，属于短链脱氢还原酶家族成员之一，多为小分子单体[2]。据报道，CBR1在HCC中的表达水平明显高于正常组织[3]。因慢性乙型肝炎与HCC关系密切，故在本课题中收集30例慢性乙肝患者肝穿标本，进行CBR1的免疫组化显色实验，判定是否在HCC发生的早期阶段慢性乙型肝炎时就已经出现CBR1的阳性表达。
1 材料与方法
1.1 标本来源：收集昆明医科大学病理教研室2009-2013年各附属医院送检慢性乙型肝炎肝穿标本共30例。所有标本均经两位病理学专家用Metavir评分对肝脏炎症程度和纤维化进行分级与分期确诊。
1.2 方法：标本经4%中性甲醛固定，常规石蜡包埋，3μm厚切片连续切片10张备用。第一张做HE染色，进行组织形态学观察，其余切片做免疫组织化学染色。免疫组织化学采用柠檬酸pH6.0的抗原修复液微波热修复以及SP三步法染色。多克隆CBR1抗体购自abcam（Hong Kong）公司，DAB酶底物显色试剂盒、PBS粉剂、浓缩型柠檬酸组织抗体修复液（PH6.0）、多聚-L-赖氨酸均购自福州迈新生物技术开发有限公司。
1.3 免疫组织化学染色结果判定：CBR1阳性信号定位于胞浆，为黄-棕色颗粒。请两位病理学专家双盲法观察切片，采用半定量积分法判断结果。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆具体标准如下：①阳性细胞数≤5%为0分、6%-25%为1分、26%-50%为2分、51%-75%为3分、＞75%为4分；②阳性强度无色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。将①②两者积分相乘，0分为阴性（-），1-4分为弱阳性（+），5-8分为阳性（++），9-12分为强阳性（+++）。
2 结果
30例慢性乙型肝炎标本免疫组织化学染色结果均为弱阳性-阳性。
3 讨论
CBRs广泛存在于自然界中，分布于非哺乳动物和哺乳动物多种组织的胞质中，如细菌、昆虫，人、鼠的肝脏、心脏中。最初检测出其位于人体的21号染色体，后来运用高分辨率原位杂交方法检测出其定位于人体21q22.12[4]。CBRs在细胞代谢过程中，如类固醇代谢、药物代谢、药物抗性、变异发生、信号转导和肿瘤发生等过程中，都发挥着重要作用[5]。参与还原包括醌、酮和醛在内的各种羰基化合物，在解除细胞内的正常代谢产物或外源性化合物的毒性效应方面起着重要作用。Wermuth[2]报道称CBRs是人体肝脏内的一类依赖NADPH的苯醌类氧化还原酶，且能在解除苯醌类物质的毒性作用中起到一定作用。在细胞代谢过程中，如类固醇代谢、药物代谢、药物抗性、变异发生、信号转导和肿瘤发生等过程中，都发挥着重要作用[5]。目前已发现的人羰基还原酶基因共有4个，分别是CBR1、DCXR、CBR3和CBR4。CBR1与肿瘤的组织学分型、TNM分级和雌激素受体、孕激素受体有一定关系。CBR1在慢性乙型肝炎中的表达水平目前尚无研究。
根据慢性肝炎的评分标准可以看出，慢性肝炎均出现不同程度的肝纤维化，特别是慢性中-重度肝炎其肝纤维化的分期可达到S3-S4，S4即为早期肝硬化或肯定的肝硬化。慢性乙型肝炎也不同程度的与肝脏炎症严重程度、范围以及纤维组织增生相关。在本研究中选用的30例慢性乙型肝炎标本中，包括了轻度、中度-重度慢性乙型肝炎，用CBR1进行免疫组织化学染色均出现弱阳性或阳性结果。而在HCC中CBR1也出现高表达[3、6]。有资料显示，慢性乙型肝炎患者中大概有10%左右后期可以发展成为HCC。由此推断，在HCC的早期阶段，慢性乙型肝炎患者肝脏CBR1的阳性表达，对慢性乙型肝炎患者后期发展成为HCC是否具有早期提示性意义；慢性乙型肝炎时出现的炎症严重程度、范围以及纤维组织增生，是否与CBR1的阳性表达有一定的关系。这些尚需做进一步研究，以便为肝炎-肝硬化-肝癌的发生发展关系和机制提供理论依据。
参考文献：
[1] Ris MM,von Wartburg JP.Heterogeneity of NADPH-depentent aldehyde reductase from human and rat brain[J].Eur J Biochem,1973,37(1):69-77.
[2] Wermuth B.Purification and properties of an NADPH-dependent carbonyl reductase form human brain[J].J Biol Chem,1981,256(3):1206-1213.
[3] Tak E,Lee S,Lee J,et al.Human carbonyl reductase 1 upregulated by hypoxia renders resistance to apoptosis in hepatocellular carcinoma cells[J].J Hepatol,2011,54(2):328-339.
[4] Forrest GL,Gonzalez B.Carbonyl reductase[J].Chem Biol Interact,2000,129(1/2):21-40.
[5] 刘珊.人类羰基还原酶基因CBR1和DCXR的克隆及其编码蛋白的功能研究[D].上海:复旦大学生命科学学院,2004.
[6] 龙江,王华光,王宝恩.羰基还原酶1和热休克蛋白27可能是肝癌早期标志物[J].现代医学,2011,39(3):257-262.
基金项目: 云南省教育厅科研资助项目（2013Y608）
论文作者:王莹1,申丽娟2,袁志伟3,张晓坤1
论文发表刊物:《医药前沿》2013年12月第34期供稿
论文发表时间:2014-1-16
标签：乙型肝炎论文; 阳性论文; 组织论文; 羰基论文; 肝硬化论文; 标本论文; 患者论文; 《医药前沿》2013年12月第34期供稿论文;