岳阳市岳阳楼区疾病预防控制中心 检验科 湖南岳阳 414000
【摘 要】目的：小儿腹泻粪便标本中轮状病毒采用ELISA与PAGE检测及对两种检测方法进行比较。方法：在2014年10月至2015年12月轮状病毒肠炎的流行期间，采用ELISA与PAGE对被确诊为腹泻患儿的300例粪便标本进行轮状病毒的抗原检测，比较ELISA与PAGE两种检测方法的检测结果。结果：对300份标本进行检测，ELISA检测阳性轮状病毒有151例，阳性诊断率为50.33%；PAGE检测阳性轮状病毒有178例，阳性诊断率为59.33%，对两种检测方法的阳性诊断率进行比较，差异具有统计学意义（P<0.05）；ELISA相对于PAGE检测方法的敏感性为67.1%，特异性为73.3%，阴性符合率为60.07%，阳性符合率为79.47%，总符合率为70.33%。结论：PAGE是一种检测轮状病毒的经典方法，具有较高的特异性，ELISA操作简单，无需借助特殊仪器设备，且有试剂盒出售，是目前较为常用的检测手段。PAGE及ELISA均可作为检测小儿粪便标本中轮状病毒的诊断方法。
【关键词】小儿腹泻粪便；轮状病毒；ELISA；PAGE
[Abstract] objective：to infantile diarrhea rotavirus in stool specimens by ELISA and PAGE detection and compares two methods of testing. Methods：in October 2014 to 2015，12 month during the popularity of virus enteritis，by ELISA and the PAGE to be diagnosed with 300 cases of children with diarrhea rotavirus antigen detection，feces samples comparing ELISA and PAGE two kinds of detection methods of testing results. Results：of 300 specimens tested，ELISA detection with 151 cases positive rotavirus，positive diagnosis rate is 50.33%；Test positive for PAGE 178 cases of rotavirus，positive predictive value was 59.33%，positive predictive value of two kinds of detection methods are compared，statistically significant difference（P < 0.05）；ELISA relative to the PAGE，the sensitivity of the detection method is 67.1%，specificity of 73.3%，negative coincidence rate was 60.07%，the positive coincidence rate was 79.47%，the total coincidence rate was 70.33%. Conclusion：the PAGE is a classic method of detecting rotavirus，has high specificity，ELISA，simple operation，without using special instruments and equipment，and have kits for sale，is now more commonly used detection methods. Both PAGE and ELISA could be used as detection of rotavirus in pediatric stool specimens，diagnostic method.
[Key words] infantile diarrhea feces；Rotavirus. ELISA；PAGE
腹泻是婴幼儿中一种常见的多发疾病，是导致婴幼儿死亡的重要原因之一。轮状病毒是导致婴幼儿腹泻的重要病原体之一，常会导致水电解质及酸碱平衡紊乱，危害婴幼儿的身心健康及生命安全[1]。全世界每年约有九十万婴幼儿因轮状病毒感染导致死亡，绝大多数病例发生于发展中国家。在我国，每年秋冬季节约50%左右的小儿腹泻是由轮状病毒引发的。因此，目前临床上对小儿腹泻粪便中的病原体检测越来越重视[2]。为了解小儿腹泻粪便中的轮状病毒情况，比较ELISA（酶联免疫吸附试验）与PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）检测小儿腹泻粪便标本中轮状病毒的临床价值，在2014年10月至2015年12月轮状病毒肠炎的流行期间，采用ELISA与PAGE对被确诊为腹泻患儿的300例粪便标本进行轮状病毒的抗原检测，现详细作如下报告。
1 收集标本及检测方法
1.1 收集标本 300例粪便标本均来自于2014年10月至2015年12月期间来市一、市二、市妇幼保健院的急诊科、门诊、住院的300例腹泻患儿，其中男性患儿160例，女性患儿140例；年龄1个月至1岁患儿180例，占据60.00%；1至2岁患儿91例，占据30.33%；2至3岁患儿29例，占据9.67%。诊断依据主要为体征及临床症状，所有患儿均伴有腹泻及呕吐症状，部分患儿伴有轻中度脱水、上呼吸道感染及发热等症状；大便性状为蛋花汤状或者稀水状、糊状、黏液状；多数镜检有脂肪球，且未见明显异常现象，少数镜检可见少量的白细胞。
1.2 试剂及方法
1.2.1试剂 PAGE试剂参考《腹泻病实验诊断手册》中的方法配置；ELISA试剂盒。
1.2.2方法 PAGE实验：参考《腹泻病实验诊断手册》中的方法提取粪便中的HRV-RNA，行PAGE检测，观察硝酸银染色后的结果。ELISA实验按照试剂盒上的操作说明书操作。
1.3 统计学方法 实验数据应用SPSS18.0处理，计数资料进行x2检验，采用百分率表示。组间比较有差异以p<0.05表示。
2 结果
2.1 ELISA与PAGE检测小儿粪便标本中轮状病毒 对300份标本进行检测，ELISA检测阳性轮状病毒有151例，阳性诊断率为50.33%（151/300）；PAGE检测阳性轮状病毒有178例，阳性诊断率为59.33%（178/300）。对两种检测方法的阳性诊断率进行比较，差异具有统计学意义（x2=4.91，P<0.05）。详见表1。
2.2 由表1可知，ELISA相对于PAGE检测方法的敏感性为67.1%，特异性为73.3%，阴性符合率为60.07%，阳性符合率为79.47%，总符合率为70.33%。
3 讨论
轮状病毒是造成婴幼儿腹泻的重要病毒病原之一，是发展中国家婴幼儿死亡的主要原因。轮状病毒入侵患儿肠道后，于小肠绒毛顶端柱状上皮细胞上进行复制，导致细胞坏死及发生空泡变性，微绒毛出现肿胀，排列变短和紊乱，肠膜受累后上皮细胞脱落，不规则裸露病变遗留，导致肠黏膜回收电解质和水分能力受损，在肠腔内大量聚集肠液，最终导致腹泻[3]。有相关资料表明，秋冬季节约50%至60%的小儿腹泻是由轮状病毒引发的[4]。正确诊断病原对于疾病的预防、治疗及避免抗生素的滥用具有重要意义。国内绝大多数医院均在寻求更为简单快捷的诊断轮状病毒的检测方法[5]。目前常用的诊断轮状病毒的检测方法较多，主要有RT-PCR、ELISA、PAGE、电镜等。
诊断轮状病毒金标准为电镜，由于一般的医院不具备采取电镜诊断的条件，因此本次实验也未采用电镜检查。公认的较为可靠的诊断方法为PAGE，主要是由于轮状病毒是具有节段性的双链RNA，采用PAGE诊断方法能够将轮状病毒独特11个RNA片段检测出，且硝酸银染色法十分敏感，能够检测微量RNA，因此实验结果不易出现假阴性或假阳性结果[6]。PAGE检测方法由于需要先提取核算，制备丙烯酰胺凝胶，对技术的要求极高，且操作复杂，在实验室难以进行推广。因此，临床上应寻求更加快速、特异、敏感的病原诊断手段。
ELISA具有操作简单、无需特殊仪器等优点，同时市场上有大量试剂盒出售，受到广大人群的欢迎[7]。但本次实验结果显示，ELISA的检出率相对于PAGE检测并不十分理想，敏感性为67.1%，特异性为73.3%，阴性符合率为60.07%，阳性符合率为79.47%，总符合率仅为70.33%。但由于本次实验的ELISA试剂盒由一家公司提供，不足以表明ELISA方法检测轮状病毒的疗效，但也表明了使用ELISA方法检测轮状病毒时需慎重。综上所述，PAGE是一种检测轮状病毒的经典方法，具有较高的特异性，ELISA操作简单，无需借助特殊仪器设备，且有试剂盒出售，是目前较为常用的检测手段。PAGE及ELISA均可作为检测小儿粪便标本中轮状病毒的诊断方法。
参考文献：
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[7] 杨慧英.2596例婴幼儿腹泻轮状病毒检测及流行病学特征[J].中国初级卫生保健，2012，26（12）：63-64.
论文作者:陈力
论文发表刊物:《中国蒙医药》2016年5月第5期
论文发表时间:2016/11/7
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