宋书婷[1]2017年在《山羊痘病毒南疆株P32蛋白的表达及KLP2基因缺失表达载体的构建》文中认为羊痘是由羊痘病毒(Capripoxvirus,CaPV)引起的病毒性中最严重的一种,世界动物卫生组织(OIE)规定羊痘为必须通报疫情的重大动物疫病之一,我国将其列为一类动物疾病。羊群的感染率和致死率均很高,严重影响养羊业的发展。2010年,新疆南疆多地暴发羊痘,造成约1.5万只羊只死亡,致病率和病死率分别为34%和65%。本论文对此次疫情及病原特性进行了初步研究。首先,制备了胎羊皮肤原代细胞分离病毒。(1)胎羊皮肤原代细胞的制备:从本地牛羊屠宰场采取健康母羊的胎羊,分离胎羊皮肤,经充分剪碎、清洗、消化等步骤后分散细胞,加入含10%FBS的DMEM细胞培养液,在37℃,5%CO2培养箱中培养制备原代细胞,并连续传代对胎羊皮肤细胞的培养特性进行了研究。(2)病毒的分离培养:取2010年羊痘疫情中采集的病羊皮肤,剪碎研磨后取匀浆上清接到胎羊皮肤细胞中,加双抗(青霉素、链霉素),37℃,5%CO2培养箱中,加2%FBS的DMEM培养,观察出现明显的CPE后冻融收毒,并继续盲传6代,再逐代提取病毒基因组后用PCR检测。其次,进行了山羊痘病毒P32蛋白的表达:P32蛋白是羊痘病毒的膜蛋白。为了研究新疆南疆分离的山羊痘病毒P32基因的特征,通过PCR扩增得到P32基因全长、膜外区P32mw以及亲水区P3228-20,构建了表达载体pET42b-P32、pET42b-P32mw以及pET28a为载体的pET28a-P32-20并进行原核表达,并对其核苷酸序列的同源性和遗传进化关系,及其推测的氨基酸序列、蛋白二级结构进行了预测分析。再次,构建山羊痘病毒KLP2基因缺失表达载体。首先克隆两端带侧翼序列的全长2300bp的KLP2基因于pGEM-T载体中,用Hind III酶切除去KLP2中约1000bp的基因片段,然后将以融合PCR扩增的VV-7.5为启动子和GFP报告基因的融合基因片段插入以上Hind III酶切的载体中,得到重组缺失转移载体PGEM-KLP2-VV7.5-GFP。结果显示:(1)胎羊皮肤细胞贴壁生长,初期呈叁角形或梭形,随着细胞密度的增加,逐渐变为长梭形紧密排列。前期细胞生长良好,细胞界限清晰整洁,4天左右可以传代一次。从第七代开始,细胞生长周期变短,较易脱落,有死细胞漂浮。3天甚至2天即需传代。本研究传代至第13代,虽然还可以生长,但大量的死细胞脱落导致无法进一步研究。(2)接种羊痘后,48h开始出现细胞病变,96h达到90%,病毒CPE为细胞变细长,细胞间隙变大,或部分细胞浓缩变圆。所有传代病毒的细胞培养物基因组,用P32引物检测,其结果均为阳性。(3)山羊痘病毒P32基因的测序结果可看出:山羊痘病毒南疆株P32基因发生了较大的突变,相对对照在第100-105位增加了6个核苷酸,编码K、N两个氨基酸,与Gansu2009株相似。跨膜分析显示P32蛋白膜外区为1-282aa,跨膜区283-305aa,膜内区为306-324aa。蛋白二级结构分析发现其分子两端呈现明显的疏水结构,抗原性较弱,而中间区域有较强的亲水性和较强的抗原性。蛋白表达发现其全长在大肠杆菌中几乎没有表达,其膜外区可以包涵体形式进行表达,但表达量较低,难以纯化。(4)构建出山羊痘病毒KLP2基因缺失表达载体后,培养BHK-21传代细胞,将重组缺失质粒转染入BHK-21细胞中,可观察看见细胞中表达的绿色荧光,说明本研究成功构建了KLP2基因缺失表达载体。本文通过研究揭示了山羊痘病毒南疆株基因构成的特点和蛋白表达的情况,为深入了解P32蛋白,进一步研究山羊痘病毒及羊痘病毒基因工程亚单位疫苗奠定基础。并且山羊痘病毒KLP2基因缺失表达载体的构建工作的完成也为KLP2基因缺失疫苗的研究提供了很重要的帮助。
马维民, 刘湘涛, 张强, 吴国华, 颜新敏[2]2006年在《山羊痘病毒P32基因的克隆与序列分析》文中研究表明应用PCR技术,用特异性引物扩增出羊痘病毒结构蛋白P32基因,连接于pMD18-T载体,转化到JM109感受态细胞,对重组质粒双酶切、PCR鉴定与序列分析得出:P32结构蛋白基因全长969 bp,编码323个氨基酸.与山羊痘病毒和绵羊痘病毒P32基因序列同源性分别达99%和97%;与山羊痘病毒和绵羊痘病毒P32基因编码的氨基酸同源性分别达98.9%和96%.
程振涛[3]2009年在《山羊痘病毒某些生物学特性及其主要结构蛋白P32基因的研究》文中研究说明山羊痘是由羊痘病毒属(Capripoxvirus)山羊痘病毒(Goat poxvirus,GPV)引起的一种高度接触性传染病,临床上以体温升高,全身皮肤、呼吸道和消化道黏膜出现痘疹为主要特征。本病被世界动物卫生组织(OIE)列为A类重大动物传染病,我国也将其列为一类动物疫病。2002年10月以来,贵州省羊群中首次暴发疑似山羊痘病例,并迅速波及到8个养羊较为集中的地区,对我省养羊业的健康发展构成了巨大的威胁。为了防制本病,本研究对我省两株山羊痘病毒分离株进行了某些生物学特性及其主要结构蛋白P32基因进行了详细研究。将贵州省山羊痘病毒分离株GPV-LD和GPV-QL接种Vero-E6、BHK-21细胞,3～7d感染细胞显现圆缩、聚集成簇等细胞病变效应;以GPV荧光抗体对感染细胞飞片染色,在细胞浆中检测到特异性的黄绿色荧光;取感染细胞超薄切片进行电子显微镜观察,细胞浆中发现大量成熟和未成熟的痘病毒颗粒;将感染细胞培养物提取总DNA样本,采用针对P32结构蛋白基因和ITR非编码区基因的两对引物进行PCR鉴定,分别扩增出969bp和289bp的DNA片段,对目的DNA片段的测序结果证实感染细胞培养物中存在GPV特异性的病原核酸;采用2000TCID_(50)的病毒感染细胞培养物通过皮下接种3月龄健康山羊,在14～45d成功复制出与山羊痘自然病例相类似的临床症状和剖检病变,并从感染组织材料中回收到接种的病毒。对GPV结构蛋白P32基因和非编码区ITR基因的两对引物进行比较,以期开展临床山羊痘病例的定性PCR检测。研究结果表明两对引物具有羊痘病毒属特异性,不与副痘病毒属羊传染性脓疱病毒、禽痘病毒属鸡痘病毒、健康山羊皮肤样本发生交叉反应。贵州分离毒P32基因和ITR基因与国内外参考毒株的核苷酸同源性分别达99.5%～100%和100%;PCR最小检出量分别为19.06ng和24.40ng。为此,ITR基因引物更适合于临床山羊痘病例的诊断,而P32基因则有利于病毒囊膜表面蛋白的深入研究。根据GPV参考毒株的全基因序列,针对gp064基因分别设计与合成了TaqMan-MGB探针和引物,应用实时荧光PCR方法开展对山羊痘病例的定量检测。一般PCR方法只能检测患羊出现痘疹病变的皮肤和黏膜材料,而FQ-PCR方法则能够从患羊鼻腔拭子、血液样本、皮肤、肺、胃、淋巴结等组织材料中检出GPV病原核酸。按照本试验构建的标准曲线,TaqMan-MGB-FQ-PCR方法的检测极限为0.1TCID_(50)的病毒量。检测结果表明在人工复制山羊痘病例中,不同组织的含毒量呈现皮肤＞瘤胃＞肺＞淋巴结的趋势;接种山羊从第9～15d形成病毒血症,持续时间较短;鼻拭子中从第7～22d均能检测到病毒的存在,表明患羊痘疹痂皮和鼻分泌物是山羊痘蔓延扩散的主要传染源。应用FQ-PCR方法在皮肤痘疹病变出现之前3～5d即可检测病毒的增殖动态,为山羊痘的早期诊断提供了实用的技术。对山羊痘现场自然病例和人工复制病例进行病理形态学观察,患病羊群的大体病变以皮肤、呼吸道和消化道黏膜出现痘疹为特征;病变部位上皮细胞增生、变性,同时出现巨噬细胞、淋巴细胞和嗜中性白细胞等炎性细胞浸润;受害细胞胞浆内观察到线粒体肿胀、内质网扩张、高尔基复合体扩张甚至破裂。在感染细胞的胞浆中观察到大量成熟和未成熟的痘病毒颗粒,包括形态较大,被膜完整或不完整,呈C形或花瓣状的初期病毒颗粒;在中央或偏中央部位开始形成致密类核体的中期病毒颗粒;和形态较小,有囊膜包裹,中央可见两面凹陷呈哑铃形核酸芯髓的成熟期痘病毒颗粒。将GPV-QL、GPV-LD、GPV-Y和GPV-B毒株的P32基因克隆至pMD18-T载体,重组质粒测序和序列分析显示,GPV贵州分离株之间核苷酸同源性高达99.9%,与国内其它GPV分离株的核苷酸同源性达到99.7%～100%,与国外GPV分离株核苷酸同源性达到99.5%～99.6%。系统发生树分析显示羊痘病毒属中SPV与LSDV之间亲缘关系较近,聚为一类,而它们与GPV亲缘关系较远,后者聚为一类,不同毒株之间表现出明显的种间差异和地域关系。P32蛋白的跨膜结构、亲水性、抗原指数、柔韧性、表面可及性和二级结构分析结果表明,GPV P32蛋白基因在肽段227-251区域存在一个潜在的优势抗原表位。以pMD18-T-P32/LD质粒为模板,扩增P32基因不同长度的片段并克隆至表达载体,构建原核重组表达载体和真核重组表达载体,转化至相应的宿主菌中进行诱导表达。结果表明,P32基因N端1/3片段和中间1/3片段未能通过原核表达载体pET-28a、毕赤酵母真核表达载体pPICZaA在各自宿主菌BL21(DE3)、X-33中获得表达;而P32全基因在两种表达系统中均获得了良好的表达,SDS-PAGE和Western-Blotting分析显示表达蛋白分子量分别为35.5KD和64KD。表达蛋白通过Ni柱亲和层析和Sephadex G-100层析获得纯化,该纯化蛋白在琼脂扩散试验中与山羊痘阳性血清出现特异性的沉淀线,而与阴性血清不发生反应;采用纯化蛋白接种家兔制备免疫血清,该免疫血清使山羊痘病毒感染力减少50%的中和指数达到1:123.07。采用纯化的P32蛋白建立了检测山羊痘血清抗体的间接ELISA方法。应用H.E染色法、凋亡试剂盒检测法、流式细胞仪检测法和DNA Ladder检测法证实GPV能够诱导BHK-21细胞发生凋亡,结果显示,GPV能引起BHK-21细胞凋亡。
郭巍[4]2004年在《羊痘病毒P32基因的克隆与表达》文中研究说明羊痘病毒(Capripoxvirus,CPV)是山羊痘病和绵羊痘病的病原。结构蛋白P32是CPV的特异蛋白,包含病毒粒子的主要抗原决定簇,并且P32基因具有很高的保守性,对CPV具有诊断意义。 本实验根据GenBank中发表的山羊痘病毒(Goat pox virus,GTPV)P32基因序列,利用软件Primer 5.0分别设计了P32鉴定和表达用引物。从感染羊痘的山羊和绵羊痂皮以及山羊痘病毒疫苗感染的羊胎皮肤细胞培养物中提取DNA,利用PCR方法分别扩增出大约1kb的DNA片段,将其插入克隆载体pMD18-T并测序。结果表明:GTPV P32基因开放阅读框(ORF)全长969bp,编码323个氨基酸;绵羊痘病毒(Sheep pox virus,SPPV)P32基因ORF全长972bp,编码324个氨基酸;羊胎皮肤细胞分离毒(FGD-CPV)P32基因ORF全长969bp,编码323个氨基酸。将基因序列与GenBank上已公布的P32基因序列相比较,各基因间序列相似率很高,证明CPV的P32基因高度保守。 实验中构建了带有完整P32基因的Bac-to-Bac杆状病毒表达载体Bac-Bac1-P32、Bac-BacHTa-P32和大肠杆菌表达载体pPRO-P32。将Bac—Bac1-P32、Bac-BacHTa-P32转染sf9细胞,pPRO-P32转化大肠杆菌后,均未见目的蛋白的表达。 以PCR方法扩增了切去跨膜结构的P32基因片段,构建了表达部分P32基因的大肠杆菌表达载体pPRO-TRUNCP32,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达出特异的31kDa融合蛋白,蛋白以包涵体形式存在。 本试验为羊痘病快速有效诊断方法的建立和CPV的分子生物学特性的研究奠定了基础。
马维民[5]2006年在《羊痘病毒结构蛋白P32基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达》文中研究指明羊痘(Capripox)是由羊痘病毒(Capripoxvirus)引起的绵羊(Sheep)和山羊(Goat)的一种急性、热性、接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病,在我国被列为一类传染病。羊痘病毒属痘病毒科(poxvirdae)、脊椎动物痘病毒亚科(chordopoxvirnae)、羊痘病毒属(capripoxvirus)的成员。羊痘病毒P32蛋白是目前世界各地分离、鉴定的所有羊痘病毒毒株所共有的且特异性很强的羊痘病毒结构蛋白,是位于羊痘病毒膜表面的主要结构蛋白,含有中和抗原表位。本研究应用PCR技术,用特异性引物扩增出羊痘病毒结构蛋白P32基因,连接于pMD18-T载体,随后以重组质粒为模板用另一对特异性引物扩增得到目的基因(855bp),对目的基因和表达载体pET-30a,pGEX-4T-1分别以相同的限制性酶酶切后,构建成重组表达载体,经PCR、酶切鉴定和测序,证明成功构建了重组表达载体pET-P32和pGEX-P32。经IPTG诱导,该片段在大肠杆菌中均得到表达,表达蛋白分子量分别约为37.5 ku和57 ku。重组表达载体pGEX-P32表达产物能够与羊痘血清反应,说明P32具有反应原性。本实验为以后更进一步研究P32的结构与功能、建立羊痘的诊断检测方法和亚单位疫苗的研制奠定了基础。
王永志, 苏颖, 米丽娟, 付云红, 范志强[6]2011年在《山羊痘病毒p32基因的克隆、表达及单克隆抗体制备》文中指出本研究旨在表达山羊痘病毒p32蛋白、制备p32蛋白单克隆抗体。通过PCR克隆p32基因,连接到pMD18-T并测序;酶切、连接后将p32基因克隆到pET28a(+)中,将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,在IPTG诱导下成功表达p32蛋白;利用亲和层析法纯化p32蛋白,用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠后制备p32蛋白单克隆抗体,获得22株识别重组蛋白的单抗,通过间接免疫荧光鉴定,其中3株能识别病毒的p32蛋白。山羊痘病毒p32蛋白的表达和单克隆抗体的制备为山羊痘病毒抗原、抗体检测提供了生物材料。
芦晓立, 张强[7]2014年在《羊痘病毒P32基因与羊CD58基因共表达载体的构建》文中指出为了开发出一种可行的羊痘基因疫苗,尝试用羊P32基因与CD58基因建立共表达载体.试验根据GenBank中收录的羊痘病毒(GPV)P32和羊CD58基因组序列,设计了扩增GPV P32基因和CD58基因的特异性引物,运用PCR技术从GPV中扩增出P32基因,从羊的外周血中扩增出CD58基因,并将其分别克隆到pMD18-T载体,测序正确.将P32基因去掉后端疏水区一段与CD58基因先后克隆至载体pBudCE4.1,并转化大肠埃希菌JM109,提取质粒通过酶切鉴定和测序正确,且读码框正确.说明成功获得了真核共表达质粒pBudCE4.1/CD58/P32.
芦晓立[8]2010年在《羊痘病毒P32基因与羊CD58基因共表达质粒的构建及其表达产物免疫活性分析》文中研究表明羊痘是由羊痘病毒引起的羊的一种急性、热性、接触性传染病,是所有动物痘病中最为重要的一种。由该病毒引起的疾病在1997年被世界动物卫生组织(OIE)列为93种必须报告的动物疫病之一,我国也将其列为一类动物疾病。羊痘病毒P32蛋白是位于羊痘病毒囊膜表面的主要结构蛋白,含有主要的抗原表位。CD58即淋巴细胞功能相关抗原-3,与CD2结合既可使免疫系统处于激活状态。本文旨在将羊痘病毒抗原基因和CD58基因构建在同一载体上,发挥CD58的免疫佐剂作用,以增强表达P32蛋白的免疫效果,为进一步开发高效的DNA疫苗奠定基础。本实验从健康的羊的血液中分离淋巴细胞,用RT-PCR扩增羊致敏淋巴细胞中的CD58基因,将CD58基因插入pGEX-4T-1载体,构建了能够表达CD58的原核表达载体pGEX-CD58。经ITPG诱导,目的基因在大肠杆菌中得到表达,表达蛋白质分子量为53ku。经鉴定能与羊CD58的单克隆抗体发生反应,说明表达产物具有反应原性。从羊痘组织病变中扩增得到P32基因,与pBudCE4.1载体连接,构建的质粒pBudCE4.1 /P32 ,与此前获得的CD58基因共同构建重组质粒pBudCE4.1/CD58/P32。质粒提纯后,在脂质体作用下转染BHK-21细胞,通过直接免疫荧光试验和间接免疫荧光试验分别检测P32和CD58在BHK-21中的表达。结果显示,P32和CD58在BHK-21细胞中都得到表达。以BALB/c小鼠为动物模型,通过肌肉注射接种免疫BALB/c小鼠,定期采血用ELISA法检测免疫抗体水平;用MTT法检测细胞免疫情况,结果表明,共表达载体可诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。
韩若婵[9]2007年在《羊痘病毒P32基因的克隆、表达及多重PCR诊断方法的建立》文中研究表明羊痘(Capripox)是由羊痘病毒(Capripoxvirus)引起的绵羊和山羊的一种急性、热性、接触性传染病，被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病，在我国被列为一类动物疫病。羊痘病毒属痘病毒科(poxviridae)、脊椎动物痘病毒亚科(chordopoxvirinae)、羊痘病毒属(capripoxvirus)的成员。羊痘病毒P32蛋白是位于羊痘病毒膜表面的主要结构蛋白，含有中和抗原表位，是目前世界各地分离、鉴定的所有羊痘病毒毒株所共有的且特异性很强的羊痘病毒结构蛋白。针对羊痘病毒反向末端重复序列结构中的一段基因和P32蛋白基因分别设计一对引物，进行PCR扩增，扩增产物分别为289bp、969bp。通过对实验条件的优化，建立了诊断羊痘病毒的多重PCR(Multi-PCR)方法。经试验证实该法具有良好的特异性和敏感性，可用于对羊痘病毒进行快速诊断。本研究应用PCR技术扩增了羊痘病毒P32蛋白基因，连接于pMD18-T载体，再将目的基因插入到表达载体pGEX-4T-1中，经PCR、酶切及测序鉴定，成功构建了重组表达质粒pGEX-P32。经IPTG诱导，目的基因在大肠杆菌中以包涵体形式得到表达，目的蛋白的分子量为58ku，能够与羊痘血清反应。利用电洗脱方法对表达蛋白进行纯化，ELISA方法检测纯化重组表达蛋白的活性，证明纯化后的表达蛋白依然保持了与羊痘标准阳性血清的良好反应原性。
岳筠[10]2009年在《山羊痘病毒P32基因克隆、测序及表达》文中认为目的:山羊痘是由羊痘病毒属山羊痘病毒(GPV)引起的一种高度接触性传染病,呈地方性流行,对养羊业造成严重的危害和巨大经济损失。为了解山羊痘病毒贵州分离毒株与国内外毒株的序列关系和P32蛋白的抗原性,本研究开展了GPV P32基因的克隆、测序、序列分析、体外表达及表达蛋白的抗原性研究,期望获得利用该基因建立山羊痘基因工程疫苗及诊断方法的理论依据。方法:应用PCR方法扩增山羊痘病毒贵州分离株QL株、LD株和参考毒株Y株、B株P32基因,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD18-T-P32,将重组质粒转化到DH5α感受态细胞,经PCR和酶切初步鉴定为阳性的重组菌进行序列测定,并将所得序列与GenBank收录的国内GPV的P32基因进行序列分析;选择贵州代表毒株LD株P32基因的推导氨基酸序列为材料,应用计算机技术和生物学软件预测P32蛋白的跨膜结构、亲水性、抗原指数、柔韧性、表面可及性和二级结构,并综合评价P32蛋白可能存在的B细胞抗原表位;以含山羊痘病毒贵州LD株P32基因的质粒pMD18-T-P32/LD为模板,应用PCR方法扩增P32基因,将基因片段克隆至原核表达载体pET-28a和毕赤酵母菌表达载体pPICZαA,构建重组表达载体,分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导其表达,应用SDS-PAGE和Western-Blotting试验分析蛋白表达情况;通过Ni柱亲和层析和G-100层析技术对表达蛋白产物进行纯化,分别应用琼脂双扩散试验和免疫动物实验检测纯化蛋白的抗原性。结果:将GPV-QL、GPV-LD、GPV-Y和GPV-B毒株的P32基因序列分析显示,GPV贵州分离株之间核苷酸同源性高达99.9%,与国内其它GPV分离株的核苷酸同源性达到99.7%～100%,与国外GPV分离株核苷酸同源性达到99.5%～99.6%,表明P32基因高度保守;P32蛋白的跨膜结构、亲水性、抗原指数、柔韧性、表面可及性和二级结构分析结果显示,P32蛋白含有一个跨膜结构,肽段227-251区域的各种预测指数均高,推断该区域存在一个潜在的优势抗原表位。以pMD18-T-P32/LD质粒为模板,扩增P32基因并克隆至表达载体,构建原核重组表达载体和真核重组表达载体,转化至相应的宿主菌中进行诱导表达。结果表明,P32基因能通过原核表达载体pET-28a和毕赤酵母真核表达载体pPICZαA在各自宿主菌BL21(DE3)、X-33中获得表达,SDS-PAGE和Western-Blotting分析显示表达蛋白分子量分别为35.5KD和64KD;表达蛋白通过Ni柱亲和层析和SephadexG-100层析获得纯化,该纯化蛋白在琼脂扩散试验中与山羊痘阳性血清出现特异性的沉淀线,而与阴性血清不发生反应;采用纯化蛋白接种家兔制备免疫血清,该免疫血清使山羊痘病毒感染力减少50%的中和指数达到1:123.07。结论:通过对山羊痘病毒株P32基因的克隆测序及序列分析表明,P32基因序列同源性高度保守,P32蛋白含有一个跨膜结构,肽段227-251区域可能存在一个潜在的优势抗原表位,该分析结果为山羊痘病毒(GPV)P32基因工程疫苗的研究和体外表达产物的应用提供理论依据;分别应用原核表达系统和真核表达系统实现了P32基因的体外表达;琼脂扩散试验和动物试验结果表明纯化表达蛋白具有良好的抗原性;以上试验结果为山羊痘基因工程疫苗的研制及诊断方法的建立奠定了基础。
参考文献：
[1]. 山羊痘病毒南疆株P32蛋白的表达及KLP2基因缺失表达载体的构建[D]. 宋书婷. 塔里木大学. 2017
[2]. 山羊痘病毒P32基因的克隆与序列分析[J]. 马维民, 刘湘涛, 张强, 吴国华, 颜新敏. 甘肃农业大学学报. 2006
[3]. 山羊痘病毒某些生物学特性及其主要结构蛋白P32基因的研究[D]. 程振涛. 贵州大学. 2009
[4]. 羊痘病毒P32基因的克隆与表达[D]. 郭巍. 东北农业大学. 2004
[5]. 羊痘病毒结构蛋白P32基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达[D]. 马维民. 甘肃农业大学. 2006
[6]. 山羊痘病毒p32基因的克隆、表达及单克隆抗体制备[J]. 王永志, 苏颖, 米丽娟, 付云红, 范志强. 中国畜牧兽医. 2011
[7]. 羊痘病毒P32基因与羊CD58基因共表达载体的构建[J]. 芦晓立, 张强. 甘肃农业大学学报. 2014
[8]. 羊痘病毒P32基因与羊CD58基因共表达质粒的构建及其表达产物免疫活性分析[D]. 芦晓立. 甘肃农业大学. 2010
[9]. 羊痘病毒P32基因的克隆、表达及多重PCR诊断方法的建立[D]. 韩若婵. 中国农业科学院. 2007
[10]. 山羊痘病毒P32基因克隆、测序及表达[D]. 岳筠. 贵州大学. 2009
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