梁涛 李作为 田斌强 李永辉 傅强
【摘 要】 目的 探讨ELAVL1在前列腺癌（Pca）中的表达及意义。方法 应用免疫组化SP法检测66例Pca、18例高分级前列腺上皮内瘤（HGPIN）、30例前列腺增生组织(BPH)及15例正常前列腺组织(NP)中ELAVL1的表达。结果 46例（69.70％）Pca中ELAVL1有中等或强的表达，18例HGPIN中ELAVL1都是弱或中等的表达，30例BPH和15例NP没有或只有弱的表达。前列腺癌Gleason评分（GS）8-10组中ELAVL1表达明显高于GS7组和GS5-6组（P<0.05）,GS7组中ELAVL1表达明显高于GS5-6组（P<0.05）,GS7中GS（4＋3）组中和GS（3＋4）组中ELAVL1表达没有明显区别（P=0.827）。结论 ELAVL1的表达可能与Pca的发生机制有关，其对诊断高分级前列腺上皮内瘤和判断前列腺癌的转移和患者的预后有重要意义，ELAVL1可作为前列腺癌治疗的新靶点。
【关键词】 ELAVL1； 前列腺癌； 转移
Expression and significance of ELAVL1 in prostate neoplasm. LIANG Tao，LI Zuo-wei，TIAN Bin-qiang，LI Yong-hui , FU Qiang.（Department of Urology，Shanghai Jiao Tong University Affiliated Sixth People’s Hospital，ShangHai 200233，P.R.China）
【Abstract】 Objective To study the expression and significance of ELAVL1 in prostate cancer（Pca）. Methods The expression of ELAVL1 was assayed by means of immunohistochemical technique in 66 Pca、 18 high grade prostatic intraepithelial neoplasia（HGPIN）、30 benign prostatic hyperplasia(BPH) and 15 normal prostate tissue(NP) specimens. Results ELAVL1 expression was moderate or strong in 46(69.70%) Pca and all of 18 HGPIN were moderate or weakly while negative or weakly in BPH and NP. ELAVL1 expression were higher in the Pca with Gleason score(GS)8-10 than those Pca with GS7 and GS5-6(P<0.05), ELAVL1 expression of Pca with GS7 were higher than those Pca with GS5-6(P<0.05) ,while no difference was found between GS7(4+3) and GS7(3+4) cancers(P=0.827) . Conclusions The expression of ELAVL1 may be involved in the pathogenesis of Pca, and ELAVL1 expression may be useful for the HGPIN diagnosis and the patients’ prognostic estimatation. It may be the novel target for Pca treatment.
【key word】 ELAVL1； Pca； metastasis
前列腺癌是老年男性的常见肿瘤，其发病率呈增加趋势，在世界范围内前列腺癌的发生率在男性所有恶性肿瘤中位居第二【1】。前列腺癌在我国自2008年起已经成为泌尿系统中发病率最高的肿瘤【2】。局限性前列腺癌可以通过根治性前列腺切除术和放射疗法治疗。对于晚期前列腺癌内分泌疗法依然是治疗的主要方法。但是，晚期前列腺癌内分泌治疗后往往会转变到去势抵抗性前列腺癌（CRPC）【3】，这也是这部分病人死亡的主要原因。无疑，了解前列腺癌的病因和发病机制将有助于我们的治疗。另外，对前列腺癌的早期诊断，我们已有一些比较可靠的指标，但我们也需要一个更好的预后性指标，以减少不必要的治疗。鉴于此，预测前列腺癌的发生、发展、转移以及预后对治疗前列腺癌必将是十分有效的。
ELAVL1 属于人胚胎致死异常视觉( embryonic lethal abnormal vision，ELAV) 家族的RNA 结合蛋白( RNA-binding proteins，RBPs) ，ELAVL1的重要作用是在转录后水平调控真核细胞基因表达，可以增强RNA 稳定性，参与生物发育等正常生命活动【4】，也在肿瘤发生、发展过程中发挥着重要作用【5】。ELAVL1基因定位于染色体19p13.2，此处编码众多原癌基因产物。体内外研究发现，ELAVL1 在多种人类肿瘤组织和细胞中高表达，如胆囊癌【6】、乳腺癌【7】、肺癌【8】等。另一方面，ELAVL1的免疫反应性，肿瘤细胞胞质中ELAVL1 的表达与肿瘤进展和预后关系也有报道【9】。
但是，关于ELAVL1与前列腺癌的关系却鲜有报道。这里我们用一系列人类标本来评估ELAVL1在前列腺癌中的免疫反应性以及其组织病理类型和病人预后的关系。
材料与方法
1．组织标本来源 从上海交通大学附属第六人民医院病理科标本库中获取2010年至2015年间，石蜡包埋的前列腺增生组织和前列腺癌组织标本。标本来自前列腺摘除术、前列腺穿刺活检或前列腺癌根治性切除术，并由上海市第六人民医院病理医生进行病理诊断。前列腺癌患者的年龄53～88岁,平均70.5岁，经病理确诊为前列腺癌。按照Gleason分级系统对前列腺癌进行组织学分级。Gleason评分（GS）5－6有17例，GS7有30例，其中GS7（4+3）和GS7（3+4）各15例，GS8－10有19例。患者术前未经内分泌或放射治疗。前列腺增生症患者的年龄55～76岁，平均 68.6岁，由临床和病理共同证实为前列腺增生诊断。所有30例前列腺增生症的标本表现为上皮或基质的增生而没有任何恶性的表现。正常前列腺组织15例，取自意外死亡者。
2．免疫组织化学检测
2.1 免疫组化试剂 羊抗人、鼠单克隆抗体购自美国BIOPIKE公司，SP免疫组化试剂盒、柠檬酸抗原修复液及联苯二胺（DAB）显色剂购自中国上海研卉生物科技公司。
2.2 免疫组化操作 采用vltrasensitiveTMS-P法，按照免疫组化试剂盒说明操作。石蜡切片的抗原修复采用pH6.0 10mmol/L柠檬酸抗原修复液，高压锅加帽出气后3分钟快速冷却。ELAVL1单克隆抗体稀释比为1:100，40C过夜。以已知阳性的乳腺癌切片作为阳性对照，以非免疫血清替代一抗作为阴性对照。
2.3 ELAVL1表达水平的定量分析 采用计算机图像分析系统(Leica QWin Image Processing and Analysis System , Leica Imaging System Ltd, England)对ELAVL1的免疫组化染色的强度和范围进行定量分析。根据平均染色强度和阳性染色面积百分比，将总体染色强度分为“ - ”, “ + ”,“ + + ”,“ + + + ”4个等级,分别代表无染色(强度×面积≤1) ,轻度染色(强度×面积≤10) ,中度染色(10 < 强度×面积≤20) 或重度染色(强度×面积> 20) 。由于取样区域相对稳定,故总体染色强度能够反映抗原表达的强度。每组实验均包括前列腺增生组织和前列腺癌组织以便矫正和比较两组标本的相对染色强度。
3．统计学分析 NP，BPH，HGPIN和Pca之间的整体比较，NP与BPH, NP与HGPIN, NP与Pca, HGPIN与Pca比较均用非参等级资料比较的秩和检验，根据标本染色强度将标本分组，通过R×C分类资料的相关性检验（Spearman相关）来检验 ELAVL1 表达水平与前列腺癌及其Gleason评分相关性和连续变量相关性。所有资料均在 SPSS18.0 软件下操作。P < 0. 05 认为有统计学意义。
结 果
在66例前列腺癌标本中有46例（69.70％）ELAVL1有中等或强的表达，18例HGPIN中ELAVL1都是弱或中等的表达，30例BPH和15例NP没有或只有弱的表达。NP与BPH的ELAVL1的表达无显著差异（P＝0.83），NP与HGPIN（P＝0.0009），NP与Pca（P<0.01），HGPIN与Pca（P＝0.0061）的ELAVL1表达有显著性差异。ELAVL1的表达与前列腺癌Gleason评分相关（P<0.05）。按照Gleason分级系统对前列腺癌进行组织学分级，19例GS8－10中有12例（63.16 %）显示ELAVL1强阳性染色(“+ + + ”) ，30例GS7前列腺癌标本中仅有4例（13.33 %）标本显示ELAVL1 (“ +++ ”) 表达。ELAVL1的表达与GS正相关（r=0.71），即ELAVL1表达越强，GS越高，反之越低。ELAVL1染色定位于胞浆，ELAVL1染色阳性细胞均匀分散在组织中。用非免疫血清代替一抗做阴性对照未显示免疫阳性。
染色强度分为：阴性（－），弱阳性（＋），中度阳性（＋＋），强阳性（＋＋＋）。 a NP与BPH组比较， b NP与HGPIN组比较， c HGPIN与Pca组比较。
Intensity of expression is described as – (negative),＋(weak positive), ++ (moderate positive) and +++(strong positive). a NP compare with BPH group, b NP compare with HGPIN group, c HGPIN compare with Pca group.
讨 论
HGPIN被公认为前列腺癌的癌前期病变，它的分子形成机制至今不清。但在HGPIN和前列腺癌中发现有共同的基因改变，促成他们之间的相互联系【10】。ELAVL1定位在19号染色体短臂13区2带，此处编码众多原癌基因产物。而HGPIN并不是唯一的过度表达ELAVL1的癌前病变，动物实验和体外实验表明，ELAVL1过表达与细胞增殖和移植瘤的生长呈正相关【11】。ELAVL1的siRNA 不仅可下调c-fos、cmyc和COX-2 mRNA 的表达，而且也降低了细胞周期蛋白cyclin A、cyclin B1 和cyclin D1 的表达水平，最终抑制细胞的增殖和肿瘤的生长【12】。Young 等【13】利用结肠癌模型发现，76% 的腺瘤和94%的腺癌高表达ELAVL1，由此提示，结肠癌癌前病变和癌组织具有不同于正常组织的ELAVL1表达谱，ELAVL1表达增高参与了肿瘤发生。这使得ELAVL1具有癌基因的某些特性，ELAVL1在癌前病变的过表达对肿瘤的发生可能是十分重要的。ELAVL1的表达紊乱可能与前列腺癌的发病机制有关，ELAVL1在前列腺癌发生的起始可能有触发作用，促使前列腺癌的发生，促进前列腺癌的浸润和转移。ELAVL1的表达可能对诊断高分化前列腺上皮内瘤有重要作用。ELAVL1的表达将有助于前列腺癌的早期治疗，由于HGPIN本身并不引起血清PSA浓度的升高，ELAVL1的过表达结合前列腺特异抗原（PSA）血清浓度的测定将会为前列腺癌的癌前病变提供重要的诊断价值，同时指导临床治疗，以便及早行前列腺癌根治术。
ELAVL1的表达与前列腺癌的Gleason评分呈正相关，Gleason评分与前列腺癌患者的预后密切相关，Gleason评分越高，前列腺癌患者的预后就越差。因此ELAVL1的表达可以间接的反映前列腺癌患者的预后，预测疾病的过程和发展，有效的治疗前列腺癌。临床实践证实，前列腺癌术前行穿刺活检Gleason评分≤6的患者淋巴转移的机会小于10%，即使局部淋巴结有阳性转移，根治手术也可照常进行。而Gleason评分8－10的前列腺癌患者大部分已发生转移。先前研究表明，ELAVL1的过表达与PTEN、p53缺失有关[14]，最近研究提出ELAVL1的过度表达可能影响一些肿瘤细胞的功能，促进肿瘤细胞的浸润和转移行为[11,15]。前列腺癌发生转移在临床上非常常见，且发生转移的时间较早，以骨转移较多，一般患者不能及早发现。因此ELAVL1及其相关分子可能成为未来治疗前列腺癌转移的一个新的靶点；同时，ELAVL1的表达水平可成为一种潜在的用以作为判断前列腺癌预后的标志。
总之，以上最新研究数据第一次探讨了ELAVL1在前列腺癌中的表达。ELAVL1在前列腺癌、高分化前列腺上皮内瘤、正常前列腺和前列腺增生组织中的表达差异显著，且其过表达间接的反映了前列腺癌的恶性程度及其转移性，皆说明ELAVL1表达与前列腺癌的发生、发展密切相关。鉴于此， ELAVL1对评价恶性肿瘤的发生、发展均有积极意义。通过对ELAVL1的进一步研究，将有助于我们进一步了解前列腺癌的发生机制，找到治疗前列腺癌转移的有效生物靶点，有效地治疗前列腺癌及判断前列腺癌患者的预后。ELAVL1单独检测或结合其他参数可能在未来的临床工作中得到广泛应用。
图1免疫组化方法显示ELAVL1在前列腺癌中的表达。DAB法显示抗体为棕色。细胞核在苏木素复染后现蓝色。A、B前列腺癌阳性（200×），C高分级前列腺上皮内瘤前列腺增生轻度阳性（200×），D正常前列腺阴性（200×）
Fig. 1. Visualization of ELAVL1 in prostate cancers by immunohistochemistry. Antibodies were detected by a diaminobenzidine method that produces a brown color. Counterstaining of nuclei was done with hematoxylin (blue). Prostate cancer (A,B 200×) and HGPIN(C,200×) show week immunoreactivity for ELAVL1 in cytoplasm. NP(D,200×) are negative for immunostaining.
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论文作者:梁涛,李作为,田斌强,李永辉,傅强
论文发表刊物:《中华临床医师杂志》(电子版)2016年4月第7期
论文发表时间:2016/7/18
标签：前列腺癌论文; 前列腺论文; 阳性论文; 标本论文; 免疫论文; 组织论文; 肿瘤论文; 《中华临床医师杂志》(电子版)2016年4月第7期论文;