黑龙江省中医研究院 黑龙江哈尔滨 150036
摘要：目的：观察针刺不同经穴对脑卒中偏瘫痉挛状态大鼠H反射的影响。方法：采用线栓法制备大鼠模型，造模成功后第3天开始治疗，连续治疗14天，每日一次；采用神经电生理H反射评价模型和治疗效果；结果：阳经针刺组显著抑制大鼠H反射的出现，和阴经针刺组、阴阳经针刺组、巴氯芬组、MCPG组比较均有显著性差异（P<0.01）。结论：阳经针刺对脑卒中偏瘫痉挛状态的效果较好。
关键词：脑卒中；痉挛；H反射
脑卒中后约有70-80%的病人遗留有不同程度的功能障碍，其中痉挛发生率最高，是影响患者生存质量的主要原因。在脑卒中恢复过程中，痉挛可出现在痉挛期和联带运动期，是脑卒中治疗中需要解决的重要问题。针刺治疗脑卒中后痉挛状态疗效显著，但疗效未见客观指标评价，本研究从不同经穴针刺对脑卒中痉挛大鼠H反射的影响进行研究和探讨，以探求不同针刺方法对痉挛的作用疗效。
1.实验材料与方法
1.1.1主要试剂及仪器Trizol试剂武汉博士德生物工程有限公司；华佗牌针灸针苏州医疗用品厂；德国Eppendorf移液器；上海维迪Keypoint4多功能肌电诱发电位仪；上海华谊仪器制造厂G6805-2Α型电针治疗仪；DGB/20-00台式干燥机上海天庆实验设备厂厦门麦克奥；高速冷冻离心机美国Beckman公司；PCR仪美国PE公司；梯度PCR仪德国Biometro公司；台式离心机5417C德国Eppendorf公司；巴氯芬武汉远程科技发展有限公司；MCPG武汉远程科技发展有限公司。
1.1.2动物 健康Wistar大鼠200只，雄性，体重250-300g，长春高新实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK-（吉）2003-0004。
1.2实验动物分组
将动物随机分为8组，每组20只，分别为：空白组、模型组、假手术组、阳经针刺组、阴经针刺组、阴阳经针刺组、GABAB激动剂组（巴氯芬组）和mG1uR1拮抗剂组（MCPG组）。
1.3模型制作方法
采用改良线栓法[1]复制大鼠大脑中动脉梗塞模型。
1.4动物入选标准与选穴
1.4.1大鼠均在再灌注3h苏醒后进行评分，评分按Zea-longa[2]报道的4分制进行。评分在1~3分的大鼠认为模型制作成功，纳入实验分组。具体评分标准见表1。
1.4.2选穴
按照李忠仁主编的《实验针灸学》附录三常用实验动物针灸穴位取穴：
阳陵泉：距后三里上外侧5mm。
足三里：膝关节后外侧，在腓骨小头下约5mm处。
太溪：内踝与跟结节之间凹陷中。
三阴交：后肢内踝尖直上10mm。
1.5治疗方法
阳经针刺组：取大鼠右侧阳陵泉、足三里。阴经针刺组：取大鼠右侧太溪、三阴交。阴阳经针刺组：取大鼠右侧阳陵泉、足三里、太溪、三阴交。空白组、假手术组和模型组只捆绑固定，不针刺。取大鼠定穴消毒后常规针刺，接电针治疗仪，调整好刺激参数（刺激频率为100Hz的连续波，波宽0.3ms），以动物右侧下肢出现有节律的收缩、颤动为度。阳经针刺组、阴经针刺组、阴阳经针刺组每日针刺30分钟；GABAB激动剂组每日腹腔注射巴氯芬；mG1uR1拮抗剂组每日腹腔注射MCPG。各组治疗均从模型复制成功后第三天开始，每天治疗一次，连续14天。
1.6观察指标及检测方法
1.6.1电生理检测记录方法
按30mg/kg剂量腹腔注射10%水合氯醛作动物麻醉，麻醉后取俯卧位固定动物。沿内踝至大转子连线切开皮肤、皮下，钝性分离臀大肌，暴露坐骨神经，以钩状保护电极悬吊坐骨神经；将钩状保护电极连接到维迪Keypoint4多功能肌电诱发电位仪刺激输出端；另以同心针电极插入腓肠肌内侧头，地线置于尾部。
1.6.2 H反射记录
采用单次（single）电刺激诱发H波，由小到大调节电刺激强度（0~2mA）直至H波出现，再逐渐增强刺激使M波出现，H波变小，通过仪器鼠标定格测得H波潜伏期。灵敏度0.5~1.0mV/Div，时间lms/Div，通频带0.01Hz~5kHz，刺激率1Hz，刺激脉宽0.1ms。
1.6.3 H反射恢复曲线描记
调节单次电刺激强度至H波与M波波幅接近，再改用成对刺激（double）诱发H波，第一次刺激为条件刺激（S1），第二次刺激为测试刺激（S2），成对刺激间隔分别为1ms、5ms、10ms、50ms、100ms、500ms、1000ms。当刺激间隔较短时，S2引起的脊髓前角运动神经元兴奋落在S1引起兴奋后的不应期内，所以S2所诱发出的H波幅度较低，H波与M波的比值（H/M）较低；随着刺激间隔延长H波逐渐增大，H/M也增大。以刺激间隔时间为横坐标，H/M为纵坐标可描记出一条曲线，称为H反射恢复曲线。当上运动神经元损害，对下运动神经元失抑制时，曲线上移。灵敏0.5~1.0mV/Div，分析时间lms/Div，通频带0.01Hz~5kHz，刺激率1Hz，刺激脉宽0.1ms。
1.7统计方法
实验所用数据采用统计软件SPSS17.0处理，以均数±标准差（ ±s）表示，组间两两比较采用t检验法。以P<0.05为差异有显著意义。
1.8逆转录-多聚酶链（RT-PCR）反应检测指标
逆转录体系参照ThermoscriptTMcDNA合成试剂盒说明书进行。SP引物：上游序列5’-TGT TGG ACT AAG GGC AA-3’，下游序列5’-GAA GTT ACA ACT AAT TTC-3’，扩增片段长320bp；NK-1R的上游引物为：5’-ATG CCC AGC AGA GTC GTG TG-3’，下游引物为：5’-CAG TGT ACG CGT AGC CGA TCA-3’，扩增片段长133bp。由上海博亚生物技术有限责任公司合成。
2.实验结果
注：与模型组比较，*P<0.05，●P<0.05，▲P<0.01，△P<0.05，◇P<0.05，◆P<0.05，□P<0.05。与阴经针刺组比较，▲P<0.05，◇P<0.05，◆P>0.05，□P>0.05。与阴阳经针刺组比较，▲P<0.05，◆P>0.05，□P>0.05。与巴氯芬组和MCPG组比较，▲P<0.05。
3.讨论
H反射（H reflex）名称来自其发现人Hoffman，故也称Hoffman反射[3]。其原理为：电刺激胫后神经直接引起其支配腓肠肌的诱发电位成为M波（直接刺激运动神经纤维的反应），此后经过一段潜伏期又出现第二个诱发电位称H波（刺激Ia类传入纤维，冲动进入脊髓后逆向激发运动神经的兴奋产生的反射性肌肉收缩）。H反射为低阈值反射[4]，因为Ia传入纤维是最粗也是兴奋性最高的纤维，故用弱电流刺激胫后神经，先出现H波，刺激量逐渐增强H波波幅特逐渐增大，达一定水平后再增加刺激量H波波幅开始减低而M波逐渐增大，达超强刺激时H波消失M波波幅达到最高。临床意义：H反射是脊髓的单突触反射，可代表脊髓前角运动神经元的兴奋性，上运动神经元病变时，H反射亢进，潜伏期缩短、波峰增高，H/M比值升高，这是上运动神经元病变时诊断的重要电生理指标之一。
一般上位运动神经元损伤之后，损伤对侧脊髓H反射亢进，表明脊髓前角运动神经元兴奋性增高，脊髓单突触反射弧增强。因此，H反射的增强可以作为判断脊髓相应节段及此节段α运动神经元功能状态的一种指标[5]。由条件刺激和测试刺激所构成的成对刺激技术，可以显示运动神经元兴奋性变化的时间过程。通过成对刺激的方法，可以获得H反射的恢复曲线[6]，即在条件刺激后，间隔不同的时间，再给予测试刺激，这样可以对运动神经元池的兴奋性进行更进一步的评价。当上运动神经元损害，对下运动神经元失抑制时，H/M比值增加，曲线上移，提示中枢运动神经元池的兴奋性增高[7]。
本实验研究成功地在偏瘫大鼠身上引出了H反射，并描记出了H反射恢复曲线。在实验中观察到模型组大鼠H反射潜伏期缩短、波幅亢进等改变。H反射恢复曲线提示模型组大鼠脊髓运动神经元池的兴奋性明显增高，与空白组、假手术组等比较，有统计学意义。这证明制作模型手术后，实验大鼠上位中枢损伤明显，对下位中枢的抑制下降，说明模型制作是成功的。同时，实验结果还发现针刺能够明显的抑制H反射的亢进和改善H反射恢复曲线，说明实验性脑梗死大鼠经过针刺治疗后，脊髓运动神经元兴奋性得到了有效地抑制，提示针刺治疗对实验动物运动神经元兴奋性过高有一定的疗效，其中针刺阳经疗效显著。
参考文献：
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[2]Relodi D，Somogyvari-vigh A，vigh S，et al．Delayed systemic administration of PACAP38 is neurprotective in transient middle cerebral artery occlusion in the rat[J]．Stroke，2000，31（6）：1411-1417
[3]辛世萌，刘远洪，聂志余．栓线长度、直径及大鼠体重与栓线法大鼠局灶性脑缺血模型关系的研究．大连医科大学学报，2000，22（6）：105-107
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[7]卢祖能，曾庆杏，李承晏，等．实用肌电图学[M]．北京：人民卫生出版社，2000：362
本文章为黑龙江省杰出青年科学基金 课题名称：不同经穴针刺对脑卒中偏瘫痉挛状态大鼠信号传导机制的研究 基金编号：JC200918
论文作者:赵佳辉,桑鹏,王顺
论文发表刊物:《健康世界》2015年2期供稿
论文发表时间:2015/11/17
标签：针刺论文; 反射论文; 神经元论文; 大鼠论文; 兴奋性论文; 脊髓论文; 模型论文; 《健康世界》2015年2期供稿论文;