（1河北省邢台市人民医院肛肠外科 河北邢台 054001）
（2河北省邢台市人民医院妇产科 河北邢台 054001）
【摘要】目的：探讨脐血间充质干细胞(HUMSCs)在大鼠小肠缺血再灌损伤(IR)时肠屏障的保护作用。方法：体外诱导分离培养大鼠的脐血间充质干细胞。60只大鼠随机分为正常对照组、IR组及HUMSCs组，每组20只。HUMSCs组实施脐血间充质干细胞悬液输注，输注位置于尾静脉进行，对照组注射等渗盐水，IR组注射TNB。于输注后6h、24h、72h检测各组血清中IL-6、TNF-α及SOD浓度。结果：运用荧光示踪法检测，发现在腺上皮细胞间以及肠粘膜组织内均有HUMSCs细胞分布。经治疗后的第6、24h进行血清检测发现IR组血清中IL-6、TNF-α含量高于对照组，而HUMSCs组血清中IL-6、TNF-α含量显著减少(P<0.05)。损伤组SOD的含量较对照组显著减少，而在HUMSCs组显著增加(P<0.05)。结论：在肠缺血-再灌注损伤时，进行脐血间充质干细胞移植，对起到保护作用。
【关键词】脐血间充质干细胞；移植；肠缺血-再灌注损伤
【中图分类号】R3 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）30-0075-02
引起缺血再灌损伤的原因是复杂多样的，会在器官缺血时对器官结构造成损害，器官在血供恢复时，器官的组织结构及细胞会出现严重的损伤性功能障碍。IR目前还没有明确的治疗手段，脐血间充质干细胞主要来自于骨髓和脐血[1]。脐血中脐血间充质干细胞的增殖分化能力更强，能多方向分化[2]，因取材方便，免疫原性低，是目前在肠IR等多种疾病治疗中常用的细胞。本研究对脐血间充质干细胞对缺血再灌损伤的影响进行了观察。
1.材料和方法
1.1 材料
清洁级SD大鼠60只，分3组，每组20只。
1.2 实验方法
1.2.1分组 大鼠分为对照组、IR组及HUMSCs组。HUMSCs治疗组进行经尾静脉脐血间充质干细胞悬液输注；对照组输等渗盐水，IR组注射TNB。
1.2.2 IR损伤大鼠模型制作 健康SD大鼠，对其麻醉并腹部切口，找到肠系膜上动脉后，用血管夹将动脉的起始部夹闭，进行45min的血流阻断。其间每1min观察肠管。45min后，松开血管夹。
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1.2.3 HUMSCs培养 将冻存管从液氮中取出，置入37℃水浴中进行解冻，后将细胞加入离心管内的培养基中，接种到培养基皿中培养。贴壁细胞融合后，向其中添加诱导剂。
1.2.4 HUMSCs示踪：将HUMSCs标记，使其有红色荧光表现，便于显微镜下观察。
1.2.5在移植后第6h、24h、72h时对各组进行动物进行标本采集。心尖部穿刺抽血，吸出血清，进行20℃低温保存，用于检测血清IL-6、SOD及TNF-α含量。
1.3 统计学方法
数据采用SPSS19.0统计软件进行分析。
2.结果
2.1 CM-Dil标记的HUMSCs形态观察
观察时应用荧光显微镜，进行CM-Dil标记的HUMSCs细胞均有红色荧光表现。把标记过的HUMSCs细胞植入到肠缺血再灌注大鼠中，移植经大鼠尾静脉进行。通过荧光显微镜观察大鼠肠粘膜的冰冻切片，发现上皮细胞及淋巴组织中均分布有大量的HUMSCs细胞，迁移向损伤区域，提示肠IR损伤的修复过程中有脐血间充质干细胞参与。
2.2 各组中IL-6、TNF-α及SOD浓度
HUMSCs移植后血清TNF-a含量水平表现趋势为先升高后降低，IL-6则持续增高，在HUMSCs组尤其明显。HUMSCs移植后6和24h，IL-6、TNF-α显著低于对照组及损伤组（P＜0.05）；72h后各组无明显差异。HUMSCs注射后血清SOD水平趋势变现为先升高后降低。
3.讨论
HUMSCs表面抗原无特异性，其具有很强的自我更新、高度增殖与多系分化潜能[3]。此次研究发现，HUMSCs植入到SD大鼠体内后，HUMSCs在腺上皮细胞间及肠黏膜淋巴组织内均可检，同时对肠道损伤有保护功能，表明HUMSCs可能参与了I/R的修复过程。
此次实验中,肠IR出现后，血液IL-6、TNF-α等炎症介质水平都出现了升高趋势。给予注射HUMSCs治疗后，IL-6、TNF-α等炎症介质含量在输注后6h、24h均低于对照组，有统计学意义72h后差异无意义，这说明HUMSCs会影响到大鼠体内的炎症介质含量水平，且其影响程度跟炎症反应程度存在一定关系。SOD起到氧自由基去除剂的作用，可反映出机体的去除能力。肠缺血再灌注损伤的大鼠进行HUMSCs治疗后，SOD水平表现较高，充分证明HUMSCs对脂质过氧化水平起到够抑制作用，同时还可以使机体清除氧自由基的能力得到增强，使氧自由基的浓度降低，对组织的再灌注损伤起保护功能。
综上所述，进行HUMSCs移植治疗，对肠道缺血再灌注损伤起到改善作用，原因可能是脐血间充质干细胞降低TNF-α、IL-6表达，增加SOD表达有关，对于肠道缺血再灌注损伤，HUMSCs的修复机制还需进行进一步探究。
【参考文献】
[1] Bieback K，Kern S，Koeamer A，eta1．Comparing mesenehymal stromal cells from different human tissues：bone marrow，adipose tissue and umbilieale cord blood[J]．Biomed Mater Eng，2008，18(Suppl 1):71-76.
[2] Shao H，Xu Q,Wu Ｑ，etal．Deffective CXCR4 expression in aged bone marrow cells impairs vascular regeneration[J］．J Cell Mol Med, 2011, 15(10):2046-2056.
[3] Lee OK，Kuo TK，Chen WM，eta1．Isolation of multipotent mesenchymal stem cells from umbilical cord blood[J]．Blood,2004,103(5):1669-1675．
论文作者:王炳杰,王钊,赵叶
论文发表刊物:《心理医生》2018年30期
论文发表时间:2018/12/7
标签：损伤论文; 干细胞论文; 大鼠论文; 血清论文; 对照组论文; 细胞论文; 含量论文; 《心理医生》2018年30期论文;