董毅
常德市第一中医医院 湖南常德 415000
【摘 要】目的：研究核酸检测与酶免检测应用于血液筛选中的价值。方法：2012年1月~2014年1月在我院献血的志愿者3506名，回顾性分析其临床资料。结果：3506例标本使用酶免检测，检验出病毒（HBV、HIV、HCV）显阳性率总为10.58% （371/3506），显阴率总为89.41% （3135/3506）；酶免检测的标本中显阴性的有3135例，采用核酸检测对其进行复检，显阳率2.99%，p<0.05。结论：核酸检测技术在血液筛查中不仅可提升输血的安全性，且能降低风险。
【关键词】血液筛选；核酸检测；酶免检测
【Abstract 】 objective：to study the nucleic acid test and elisa detection is applied to the value of blood screening. Methods：from January 2012 to January 2012 in our hospital blood donation volunteers，3506，the clinical data were retrospectively analyzed. Results：3506 cases of specimens by using enzymes to avoid detection，check out the virus （HBV，HIV and HCV）show positive rate was 10.58% （371/3506）always，show negative rate was 89.41% （3135/3506）；Elisa test specimen show negative with 3135 cases，using nucleic acid testing for the re-inspection，show positive rate was 2.99%，p < 0.05）. Conclusion：the nucleic acid detection technology in blood screening not only can improve the safety of blood transfusion，and can reduce risk.
【Key words】 blood screening；Nucleic acid detection；Elisa detection
随血站研究室质量的加强管理，酶免检测（ELISA）试剂的质量不断提升与改进，加强实验室人员培训等，均降低了输血所致的传播病风险[1]。因ELISA的检测方法较为局限性，以窗口期进行，细胞抗原、抗体的蛋白结构易变性，纯粹的抗体、抗原血清检测准确的检查出乙肝病毒，是一种尚未成熟的方案，具有输血安全风险性。而新起的一种核酸检测（NAT），是核酸扩增技术及血液病毒筛查技术上直接检测病原体核酸的技术总称。其敏感性高，能准确检查出标本中含有的微量核酸[2]。为了保证血液质量及输血安全，我院在献血者血液筛查的酶免检测的基础上增添了核酸检测，对血液筛选的价值进行探讨，检查效果可观。报道如下。
1.资料与方法
1.1一般资料
2012年1月~2014年1月在我院献血的志愿者3506名，回顾性分析其临床资料。男1326人，女2180人；年龄于18~51岁，平均（34.5±1.2）岁。所有献血者均留3管5ml的血液标本：1管真空抗凝管（EDTA-K2）应用于血清学检测；2管无菌BD真空抗凝管（EDTA-K2）应用于核酸检测；3管分离胶真空抗凝管（EDTA-K2）应用于标本的保存。3管标本均置于冰箱保存，温度要求在2~8℃之间。其中2管（核酸管）在采血4h内需离心20min，以1760g为标准，要求48h完成检测，如不能完成则放置-20℃的冷藏室内保存。纳入符合献血者的血液标本，排除不符合者[3]。本研究经过我院医学伦理会批准同意进行，所有患者均自愿参加并签署知情同意书。
1.2血液筛查方法
1.2.1试剂
酶免检测试剂：①HBV，厂家为上海科华，批号20131011；抗-HCV，厂家上海科华，批号为201311031；抗-HIV，厂家为上海科华，批号201311021。
核酸检测试剂：检测试剂、HBV、HCV、HIV及三联合核酸提取试剂厂家均为罗氏公司，批号M12236与N00829。
1.2.2仪器
全自动核酸提取（Cobas201）、扩增检测系统、全自动混样仪（HamiltonSTAR）、核酸提取仪及核酸扩增检测仪均产自罗氏公司，酶免分析仪产自瑞士。
将所有血浆标本作为酶免检测，实验室均设有空白对照、室内质控品及阴阳性对照。依照项目与试剂的不同对其设有不同的灰区（S/CO≥灰区），即问题标本的判定标准；初检有问题的标本均需做双孔复查，灰区≤S/CO，为不合格。同时进行核酸检测，采用相同提取及检测HBV、HIV、HCV的方法，对3506份标本采用90人份的混合检测；采用逆转录PCR同步扩增，反应体中含酶混合物、探针及引物等；将反应管放于荧光PCR扩增仪中进行检测，对混检有反应、酶免检测显阳性的标本进行再次试验，试验后无反应视为合格标本，反之则为不合格标本。
1.3观察标准
酶免检测后，将其检测出的阴性采用核酸检测再次试验，无反应视为合格标本，反之则为不合格标本。
1.4统计学意义
本次研究数据在win7系统下采用spss13.0进行统计学处理，结果以P＜0.05表示有统计学意义。
2.结果
2.1酶免检测结果
检测标本共3506例，检验出病毒（HBV、HIV、HCV）显阳性率总为371（10.58%），显阴率总为3135（89.41%），p<0.05。如表1。
3.讨论
病毒抗原及抗体的蛋白结构易变异，造成窗口期漏检，而核酸检测的敏感度高，病毒感染后在数天内可检出血液中含有的微量病毒核酸，对缩短窗口期，减少酶免检测造成患者输血后的病毒感染率具有积极作用。因此可将核酸检测作为降低血清学漏检的解决办法[4]。
核酸检测分为PCR（聚合酶链反应）、逆转录依赖及其他扩增方法。目前应用于血液筛选主要以PCR、TMA两种方法为主，其中PCR属于体外模拟自然复制DNA的一种扩增技术，灵敏性较高，具有快速简单、高特异性的优势。逆转录依赖扩增方法常见于TMA，TMA可利用酶的相互作用，在等温条件下扩增DNA、RNA反应体系[5]。核酸检测能从酶免检测中阴性标本中检测出病毒携带者，是有力的补充作用。目前我国许多城市引入核酸检测多采用单人份及多标本混合的检测方案。核酸检测这项技术作为高度敏感且特异性的血液筛查，能对传播感染因子进行筛查。检查原理与前者不同，能明显缩短病毒检验期限。HBV检验减短≤36d，HCV检验减短≤60d，HIV检验减短≤15d。由此可见，酶免检测对降低血液传播病毒风险率具有意义。且能检测多种因素（窗口期感染、病毒变异等）造成漏检的污浊血液，刚好与酶免检测形成了互补[6]。
核酸检测、酶免检测在检测原理、方法上均存在不同程度的差异，均可作为血液筛选检测的重要环节。但核酸检测技术在血液筛查中不仅可提升输血的安全性，且能降低风险。
参考文献：
[1] 秦伟斐，李小红，田耘博，等. TMA技术检测HCV-RNA和ELISA法检测抗-HCV的比较[J].国际检验医学杂志，2013，34（11）：1426-1428.
[2] 郑优荣，梁浩坚，李仲平，等.核酸检测技术在广州地区献血者血液筛查中的应用[J].中国输血杂志，2013，26（12）：1211-1214.
[3] 中华人民共和国卫生部.血站质量管理规范，全血成分血质量要求[S].2001.
[4] Ismail A M，Devakumar S，Anantharam R，et al. Low Fre-quency oI Occult Hepatitis B Infection in Anti-HBc Seroposi-tive Blood Donors，Experience Irom a Tertiary Care centre inSouth India[J].Blood Translus，2012，10（2）：230-232.
[5] 赵红娜，王艺芳，葛文超，等.郑州地区无偿献血者中核酸检测的初步应用[J].中国输血杂志，2014，27 （9）：92-26.
[6] 方建华，王艺芳，李建斌，等一例抗-HCV阴性、HCV RNA阳性的献血者的追踪随访[J].中国输血杂志，2015，28 （1）：83-85.
论文作者:董毅
论文发表刊物:《航空军医》2016年第11期
论文发表时间:2016/7/21
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