晋军[1]2002年在《血小板源生长因子-AA及其α受体在高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖肥大中的作用》文中指出背景和目的：血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells，VSMC)是血管壁的主要细胞成分之一，也是决定血管反应性和血管构型的重要因素。高血压阻力血管结构变化主要是由于VSMC增殖和肥大，这是引起外周阻力升高的主要原因。因此在临床防治高血压中，首先面临的主要问题是如何控制VSMC结构和功能的异常变化。血小板源生长因子(Platelet-derived growth factor，PDGF)是一种重要的促细胞分裂剂，可以刺激多种细胞分裂和增殖，是VSMC存活所必需的。PDGF与其跨膜性酪氨酸激酶受体(α、β)结合，引起一系列的信号传递，最终参与VSMC的增殖反应，其中α受体可与PDGF所有二聚体(AA、AB、BB)结合，而β受体只与PDGF-AB、BB结合，故其作用似较β受体更为重要。PDGF受体介导的细胞内一系列信号转导，是调控VSMC增殖、肥大及血管重构的关键环节，其中[Ca~(2+)]i编码的信息调控处于中枢地位，发挥调控细胞增殖的枢纽作用。因此，本实验应用原代培养高血压大鼠(spontaneously hypertension rats，SHR)／Wistar-VSMC模型，观察：1．PDGF-A及其α受体在不同大鼠(SHR／Wistar)来源VSMC中表达的差异性；2．PDGF-AA对不同大鼠(SHR／Wistar)来源VSMC增殖、肥大的影响；3．切除PDGF-α受体基因对大鼠VSMC增殖、肥大的影响；4．[Ca~(2+)]i信号及酪氨酸激酶途径在PDGF促SHR-VSMC增殖、肥大中的作用。不仅能对高血压血管重构的发病机理进行更深一步的探索，而且为进一步开展血管增生性疾病的基因治疗提供有益的启示。 方法和技术路线：应用原代培养SHR／Wistar-VSMC，采用Western blot、RT-PCR、流式细胞仪检测、~3H-TdR及~3H-Leu掺入率等测定方法，观察： 博士研究生论文 血小板源生长因子－AA及其Q受体在高血压大凤血叮平滑肌细胞增疤肥大中的作用 1．PDGF－AA对SHR／W i star－VSMC增殖、肥大的影响：与Wstar－VSMC相卜：①SHR－VSMC中’H－Leu、’H－TdR掺入率明显增力，在 2－20ng／ml浓度范围内随＊＊＊L＊A浓度的增加而增高，P＜0刀卜 ②S＊L＊8＊C中PCNA表达明显增高，在2上0ng／ml浓度范围内，随PDGF－AA浓度的增加而增高，P＜0刀1而Wstar－VSMC无明显变化，P＞0刀5；＠SHR－VSMC细胞生长周期发生显着变化，在5上0ng／ml浓度范围内，随PDGF－AA浓度的增加 S期细胞百分率呈剂量依赖性增高，G外GI期细胞百分率呈剂量依赖性降低，P＜0刀1，而WStar－VSMC在PDGF－AA刺激下，细胞生长周期与对照组相比无明显变化；＠SHR－VSMC 中转录调节因子 c－myb儿－myCmRNA表达明显增高，在5上0ng／ml浓度范围内，随PDGF－AA浓度的增加而增高，P＜0．01，而WStar－VSMC与对照组相比无明显变化。 2．切除PDGF－Q受体基因对Sng－VSMC 增殖、肥大的影响：在PDGF－AAO0ng／ml束檄下，切除PDGF－口受体基因后：①SHR－VSMC中’H一Leu、3H一TdR掺入率显着减少，P＜0刀1，anti一PDGFR a单克隆抗体p5ug／ml）也使3HLCll、‘H1dR掺入率明显减弱，p＜0刀1，而空载体对照组Ads上09对［’H］掺入无影响，p＞0．05；②SHRNSMC中 pCNA表达与对照组相比显着减少 P＜0．of；③SHR－VSMC中 S期细胞数明显减少，而 GO／GI期细胞数增加，P＜0刀1；④SHR－VSMC中转录调节因子 c－myc儿－myb mRNA表达显着减少，P＜0刀1；⑤在PDGF－AA刺激下，切除PDGF－口受体基因后S＊R．VS＊C胞浆内C＜卜浓度显着减少，P＜0刀1。 3．酪氨酸激酶抑制剂 gen i ste i n对 SHR－VSMC增殖、肥大的影响：在PDGF叭Ap0ng加时u激下，加入不同浓度酪氨酸激酶抑制剂后：①、1dR、’H＊eu掺入率明显降低，在 0．11／ml浓度范围内呈剂量依赖性减少，P功．of：②SHRNSMC 中 PCNA表达与对照组相比显着降低，在0．11 onmol／ml浓度范围内 PCNA表达呈剂量依赖性减少，P＜00；③SHRJSMC中 S期细胞数明显减少，在 0．1刁／ml浓度范围内抑制由G。期进入S 期的细胞数，P＜0刀1；④S＊卜＊S＊C 中转录调节因子c－myb止－myc mRNA表达与对照组相比显着减少，在 0．11 onmol／ml浓度范 ·Vlll· 博士研究生论文 血小板源生长因子叭A及其。受休在高血压大鼠血管平滑肌细胞邀疽肥大中的作用 围内 C－Cyb儿－CyC mRNA表达呈剂量依赖性降低，P＜0刀 1。 4．钙通道阻断剂 n i mod p i ne对 SHR－VSMC增殖、肥大的影响：在不 同浓度PDGF－AA刺激下，SHR－VSMC胞内K／勺i浓度显着升高，在 2【0ng／ml浓度范围内呈剂量依赖性增强o＜0刀1X 而在PDGF－AA刺激下 WistarVSMC胞内m／勺浓度无明显变化o＞0．05）；在 10”Md”‘M浓度范 围内，不同剂量的 Nimodipine＊0”‘M，10”’M，10”6M）呈剂量依赖性抑制 PD＊F．＊A介导的VS＊C胞内Ka’勺浓度升高（P＜0刀1）。 在 20ng＊l浓度的 PDGF－AA刺激下：①SHR－VSMC中 3H－Leu户H。TdR 掺入率与对?
晋军, 祝善俊, 祝之明, 杨永健, 丁钢[2]2002年在《自发性高血压大鼠中血小板源生长因子-AA及其受体表达与血管平滑肌细胞增殖的关系》文中研究说明为明确血小板源生长因子 AA(plateletderivedgrowthfactor AA ,PDGF AA)及PDGF α受体在自发性高血压大鼠 (spontaneouslyhypertensionrats,SHR)血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖中的作用 ,采用Westernblot、[3 H]TdR及 [3 H]Leu掺入率等方法 ,观察在SHR和WKY大鼠VSMC中PDGF AA及PDGF受体表达的差异 ;在PDGF AA刺激下VSMC增殖和肥大反应的变化。结果显示 ,SHR VSMC中PDGF AA、PDGF α受体蛋白表达明显高于WKY VSMC(P <0 0 1) ,而PDGF β受体蛋白表达在SHR VSMC与WKY VSMC无明显差异 ;在不同浓度PDGF AA刺激下 ,增殖细胞核抗原 (PCNA)及3 H掺入率在SHR VSMC明显增强且呈剂量依赖性增加 (P <0 0 1)。本研究表明PDGF A链及其α受体的自泌性增高 ,可能是导致SHR VSMC异常增殖和肥大 ,并导致血管构型变化的重要原因之一
参考文献：
[1]. 血小板源生长因子-AA及其α受体在高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖肥大中的作用[D]. 晋军. 第叁军医大学. 2002
[2]. 自发性高血压大鼠中血小板源生长因子-AA及其受体表达与血管平滑肌细胞增殖的关系[J]. 晋军, 祝善俊, 祝之明, 杨永健, 丁钢. 生理学报. 2002