淮安市疾病预防控制中心 江苏淮安 223001
摘要：目的 采用ELISA法和荧光RT-PCR法分别检测手足口病EV71，比较两种方法的差异性。方法 严格按ELISA法和荧光RT-PCR法的操作要求分别检测221 例临床标本手足口病EV71。结果 两种方法检测EV71的结果 221份标本，ELISA法阳性51例，荧光RT-PCR法阳性55例。两种方法比较差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 本实验结果表明，两种方法的灵敏度分别为28.2% 和30.4%，特异性均为100%，两者比较差异无统计学意义（P>0.05）。
关键词：手足口病；肠道病毒71型；柯萨奇病毒A组16型
手足口病（hand-foot and mouth disease，HFMD）常见于婴幼儿发病，临床主要表现为发热和手足口病疱疹，重症病例出现呼吸、中枢神经系统损害，病情进展迅速而致死亡。手足口病由多种肠道病毒引起，主要是肠道病毒EV71 型和柯萨奇病毒A16［1］。对手足口病尤其是重症患者的早诊断、早治疗十分重要。作者用ELISA法和荧光RT-PCR 法检测了221 例临床标本，比较两者的灵敏度和特异性，以探讨两种方法的临床应用价值。报道如下。
1.1 材料
样本来源各县、区疾控中心及各医院在2013年送检的可疑病例，聚集性感染病例和所有重症病例样本，其来源有肛拭子和咽拭子、疱疹液等，样本采集后用冰盒运送至实验室。
1.2 仪器与试剂 ELISA 法：EV71-IgM 检测试剂盒由北京万泰公司生产。荧光RT-PCR 法：EV71 核酸检测试剂盒由江苏默乐生物科技有限公司生产。
1.3 方法（1）标本采集：ELISA 法：采集静脉血2ml，37℃水浴30min 后，3000r/min 离心3min，取血清进行检测。荧光RT-PCR 法：用专用棉拭子于咽后
壁和扁桃体部位采集患儿咽拭子标本，采集后迅速放入保存液中，1h 内送检。（2）测定方法：ELISA 法：严格按试剂盒操作说明书进行操作。结果解释：吸光度A 值≥临界值者为阳性，吸光度A 值< 临界值者为阴性。荧光RT-PCR 法：采用胍盐裂解的柱式离心法提取样本中的EV71 病毒RNA，用PCR 结合Taqman荧光探针技术检测咽拭子样本中的EV71 病毒。整个实验过程严格按试剂盒操作说明书进行操作。结果解释：样品Ct<35.14 并且呈典型S 型扩增曲线，判为阳性；样品Ct>38.40 或无典型S 型扩增曲线，判为阴性。
1.4 统计学方法 采用SPSS19.0 统计软件。比较两种方法间阴阳性标本数的分布构成差异，采用χ2 检验；比较两种方法间阳性率的差异，采用两个样本率差别的假设检验。以P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两种方法检测EV71的结果 221份标本，ELISA法阳性51 例，荧光RT-PCR 法阳性55 例。两种方法比较差异无统计学意义（P>0.05）。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆
2.2 两种方法检测EV71 的灵敏度和特异性比较181例临床诊断手足口病患儿中，ELISA 法检出阳性51 例，检出率28.2%；荧光RT-PCR 法检出阳性55 例，检出率30.4%。对照组40 份标本两种方法均未检测出阳性标本。ELISA 法、荧光RT-PCR 法的灵敏度分别为28.2% 和30.4%，特异性均为100%，两种方法的灵敏度和特异性比较差异无统计学意义（P>0.05）。
2.3 两种方法的诊断符合率 两种方法的阳性符合率为96.1%，阴性符合率为96.5%，总符合率为96.4%。ELISA 法检出51 例阳性的标本中荧光RT-PCR 法检测49 例阳性，2 例阴性，经进一步检测证实，2 例标本为类风湿因子阳性。而170 例ELISA 法阴性的标本中荧光RT-PCR 法检测有6 例为阳性，荧光RTPCR法灵敏度略高于ELISA 法，但差异无统计学意义（P>0.05）。
2.4 不同性别对两种检测方法检测结果的影响 221例标本中男孩为119 例，女孩102 例，ELISA 法检测的阳性率分别为男孩28.6%（34/119）、女孩26.5%（27/102），荧光RT-PCR 法检测的阳性率分别为男孩30.3%（36/119）、女孩28.4%（29/102）；两种检测方法检测的男孩和女孩的阳性率差异无统计学意义（P>0.05）。
3 讨论
肠道病毒EV71 属小RNA 病毒科肠道病毒属，是引起手足口病的常见病毒，其传染性强，主要通过接触传播和飞沫传播，可在短期内引发大范围的流行［2］，流行暴发时重症病例增加，进展迅速和病情严重者危及生命。目前，EV71 的检测技术主要有病毒分离培养、PCR 法、ELISA 法、胶体金法等。其中，传统的病毒分离培养是检测的金标准，但操作复杂、检测周期长，对实验室基础条件要求高，并不适用于临床快速而准确的检测要求。胶体金法虽然简单快速，但受影响因素大，肉眼观察结果也容易受主观因素影响，假阳性和假阴性率稍高。荧光RT-PCR 法是近年来得到快速发展的分子生物学技术，因其简便、快速、微量的特点得以广泛应用［3］。本资料结果表明，两种方法的灵敏度分别为28.2% 和30.4%，特异性均为100%，两者比较差异无统计学意义（P>0.05）；有文献报道ELISA法检测EV71 的灵敏度可达到96.2%，明显高于本资料结果，可能与其所采用的观察对象均为住院患者及采血时间有关［4］。本资料中ELISA 法检出51例阳性的标本中用荧光RT-PCR 法检测结果为49例阳性，2例阴性，经进一步检测证实，2例标本为类风湿因子阳性，这应该与类风湿因子等自身抗体存在抗原抗体的交叉反应而导致假阳性有关，也有文献报道类似情况［5］。而169例ELISA 法阴性的标本中荧光RT-PCR 法检测有6例为阳性，由于个体差异，少数患儿免疫功能稍低，感染EV71 病毒后未及时产生IgM 抗体，导致ELISA 法检测IgM 型抗体出现阴性，总体来说，荧光RT-PCR 法灵敏度略高于ELISA 法，但差异并无统计学意义。联合两种方法以提高检测灵敏度。为排除假阴性，亦可以对ELISA 法检测血清IgM 抗体阴性的而临床症状明显的患儿取咽拭子或疱疹液等其它标本进行荧光RT-PCR 法检测。
参考文献：
[1]Wang SM，Liu CC，Tseng HW，et al.Clinical spectrum of enterovirus71 infection in children in southern Taiwan，with an emphasis onneurological complications.Lancet，1999，35（9191）：1682-1686
[2]邓莉，张艳玲.手足口病的流行与防治.北京医学，2008，30（6）：354-355.
[3]梁英，怀清杰，张炳丽，等.两种检测方法对EV71病毒监测结果的影响研究.中国卫生检验杂志，2010，20（7）：1590-1592.
[4]夏明.ELISA方法检测肠道病毒71型抗体效果分析.中国现代医生，2012，50（19）：132-133.
[5]甘超.EV71-IgM胶体金法在手足口病早期诊断的价值.内蒙古中医院，2013，7（20）：104.
作者简介：张敏会（1986-），女，本科，主管技师，主要从事卫生检验工作。单位：江苏淮安市疾病预防控制中心。
论文作者:张敏会
论文发表刊物:《健康世界》2014年24期供稿
论文发表时间:2016/4/11
标签：两种论文; 阳性论文; 荧光论文; 标本论文; 方法论文; 阴性论文; 手足论文; 《健康世界》2014年24期供稿论文;