王梅 于娜（通讯作者）
（四川大学华西第二医院病理科 四川 成都 610041）
【摘要】 免疫组织化学技术已广泛应用于病理诊断中，是病理诊断工作必不可少的一项辅助手段。早期免疫组化多采用手工操作，大量涉及手工染色的步骤，增加了系统误差的可能性，随着IHC临床应用和需求的增长，IHC实验标准化已经变得至关重要。
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【关键词】免疫组化；全自动；手工操作
【中图分类号】R197.39 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）09-0389-02
【Abstract】The immunohistochemical technique has been widely used in the pathological diagnosis, an auxiliary means is an essential part of the pathological diagnosis. Early immunohistochemical with manual operation, a large number of steps involved in manual dyeing, increase the possibility of a system error, as the growth of the IHC clinical applications and requirements, IHC experiment standardization has become crucial.
【Keywords】 Immunohistochemical;Automatic;Manual operation
1.材料和方法
1.1材料
Leica Bond-Max全自动免疫组织化学仪，制备3um防脱片。
1.2试剂
CD10，caldesmon，ki67，Bond-Max自带二抗,显色和复染试剂盒。
1.3方法
将切片装入染色架并盖上covertile，放入染色机并按下锁定键，在电脑上点击开始键即可开始程序，待染色机完成染色步骤，再按下锁定键，即可取出切片，免疫组化的所有步骤从烤片,脱蜡,抗原修复,阻断,标记一抗,标记二抗,显色直到复染都可以由Bond-Max自动完成。
2.结果
CD10棕黄色颗粒定位于细胞膜，caldesmon棕黄色颗粒定位于细胞膜，ki67棕黄色颗粒定位于细胞核。
3.注意事项
在使用Bond-Max全自动免疫组化染色仪时需注意以下几点注意事项：（1）使用前检查缓冲液，蒸馏水，酒精，修复液，脱蜡液，一抗和机器自带的二抗显色及复染试剂盒是否足量。（2）废液缸应及时倾倒。（3）covertile需严格按要求浸泡及清洗，否则会造成交叉污染。（4）染色机应定期清洗加样系统和液流系统。（5）切片上机时要特别注意玻片和covertile放在指定的凹槽内，否则操作时容易卡住，影响染色程序的正常进行。（6）标签粘贴时要注意粘贴端正，否则机器无法识别，当机器无法识别标签时，可以选择手动识别。（7）当机器处于运行状态时，如果打开机器上方的盖子，染色程序将停止。（8）当机身放试剂架的显示灯亮红色时，试剂架不能取出，亮绿灯则可取出。
4.讨论
该机器属于半开放式全自动系统，仅针对一抗完全开放，用户可根据个人的偏好使用任何品牌的一抗，独特的covertile专利技术在玻片表面增加一个塑料罩，为免疫反应提供一个封闭的孵育环境，防止试剂挥发，既确保样品的安全也进一步节省抗体的用量。Covertile会轻轻将液滴铺散到玻片的规定区域，确保试剂均匀分布到组织的表面，即可防止组织的损伤，又使抗体的作用更均匀，尤其是独特的温控技术可实现每张切片独立温控，提供最佳的反应环境，使染色结果更可靠。
全自动免疫组化染色仪与传统手工操作相比，避免了人为因素造成的假阳性和假阴性，不同抗体的孵育时间可以分别控制，缩短了染色时间，更加节约抗体，染色效果更稳定，机器的可控性减少了因人为因素造成的加错加漏试剂，但是，冰冻的机器背后人的因素永远是最根本的要素，仪器的正确使用，离不开使用者的维修和保养。
【参考文献】
［1］吴秉铨，刘彦仿.免疫组织化学病理诊断.北京：北京科学技术出版社,2007，3-6.
论文作者:王梅,于娜（通讯作者）
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第9期供稿
论文发表时间:2015/7/23
标签：免疫论文; 试剂论文; 机器论文; 棕黄论文; 抗体论文; 全自动论文; 显色论文; 《医药前沿》2015年第9期供稿论文;