谭玉婷[1]2016年在《急诊冠脉介入术围手术期中医证候调查及龙牙楤木总皂苷对缺血再灌注损伤心肌保护作用机制研究》文中指出研究目的1.通过收集急性心肌梗死(AMI)并行急诊冠脉介入术(PCI)患者术前、术后的四诊资料,探讨行急诊PCI术患者围手术期的中医证候规律,为临床中医诊治提供依据。2.通过建立大鼠离体心脏灌流模型,探讨具有活血益气功效的五加科植物龙牙楤木的提取物龙牙楤木总皂苷对缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用及其机制。为龙牙楤木总皂苷在临床上防治缺血再灌注损伤提供实验依据。研究方法1.基于前瞻性、观察性研究方法,选择符合标准的AMI并实施急诊PCI手术患者作为研究对象。根据研究目的和相关文献研究结论建立信息采集表,收集患者基本信息、中医四诊信息并建立数据库。采用spss18.0聚类分析方法进行分析。探讨AMI行急诊PCI术患者围手术期中医证候分布规律。2.采用随机数字表法将Wistar大鼠随机分为6组,分别为对照组、模型组、二氮嗪组(DZ组)、5-羟基癸酸组(5-HD组)、龙牙楤木总皂苷组和龙牙楤木总皂苷+5-HD组,每组10只,建立Langendorff离体心脏灌流模型。HE染色观察心肌组织,Western-blot方法检测线粒体细胞色素C表达情况,JC-1法检测线粒体膜电位,免疫组化方法检测Caspase-3、 Bax、 Bcl-2表达情况,酶联免疫法检测线粒体ATP含量、线粒体Ca2+含量、心肌组织MDA、 SOD、 ROS、 GSH-PX含量。研究结果1.AMI患者男女比例为4.09：1,男女比例有明显差异。AMI患者年龄段聚集在40-70岁之间,多为新近发病,前壁、下壁AMI占比例较大,罪犯血管以前降支最多,其次为右冠和回旋支。发生缺血再灌注损伤的患者为26例,占23.2%。AMI患者合并疾病以高血压、糖尿病居多。通过对四诊信息进行聚类分析后得到,急诊PCI术前聚为5类,急诊PCI术后聚为4类较符合临床实际,急诊PCI术前中医证型分别为痰瘀互结证、气虚血瘀证、心血瘀阻证、气阴不足证、气滞血瘀证,急诊PCI术后中医证型分别为气虚血瘀证、气虚血瘀痰阻证、气阴不足证、气滞血瘀证。急诊PCI术前中医证型中痰瘀互结证最多,其次为气虚血瘀证,急诊PCI术后多为虚实夹杂证,气虚血瘀证最多,其次为气虚血瘀痰阻证。在发生缺血再灌注损伤的病人中,急诊PCI术前、术后气虚血瘀证分别占42.31%、61.54%。2.①HE染色：假手术组：心肌细胞横纹清晰,核居中,排列规则、有序,细胞未见变性、坏死,间质血管无扩张,未见炎细胞浸润。模型组：心肌细胞中度肿胀变性,局部细胞肌浆溶解空泡变,细胞排列紊乱,局部心肌组织纤维化,间质疏松,多量炎细胞浸润,血管扩张充血。DZ组：心肌细胞横纹清晰,核居中,排列规则、有序,细胞轻度肿胀变性,间质疏松,少量炎细胞浸润。5-HD组：心肌细胞中度肿胀变性,局部细胞肌浆溶解空泡变,心肌排列紊乱,灶性纤维组织增生,分割心肌呈岛状,间质疏松,多量炎细胞浸润,血管扩张充血。龙牙组：心肌细胞横纹清晰,核居中,排列规则、有序,细胞轻度肿胀变性,肌束间隔增大,间质疏松,少量炎细胞浸润。龙牙+5HD组：心肌细胞轻度肿胀变性,局部心肌细胞断裂,细胞排列无序,心肌束间隔增大,间质疏松,多量炎细胞浸润,血管扩张充血。②线粒体细胞色素C表达：与假手术组相比,模型组细胞色素C相对量表达降低(P<0.05)。与模型组相比,DZ组和龙牙组细胞色素C相对量表达明显增加(P<0.01),5-HD组、5龙组细胞色素C相对量表达明显降低(P<0.01)。与DZ组相比,龙牙组细胞色素C相对量表达减少(P>0.05)。与5-HD组相比,5龙组细胞色素C相对量表达增加(P>0.05)。③线粒体膜电位：与假手术组相比,模型组膜电位明显降低(P<0.01)。DZ组、龙牙组膜电位明显高于模型组(P<0.01),5-HD组、5龙组膜电位明显低于模型组(P<0.01)。龙牙组膜电位高于DZ组(P>0.05)。5龙组膜电位高于5-HD组(P>0.05)。④Caspase-3、Bax、 Bcl-2表达：与假手术组相比,模型组、DZ组、5-HD组、5龙组Caspase-3表达明显增多(P<0.01),龙牙组Caspase-3表达增多(P<0.05)。与模型组相比,龙牙组、DZ组Caspase-3表达减少(P<0.05),5-HD组Caspase-3表达增多(P<0.05),5龙组Caspase-3表达增多(P>0.05)。与DZ组相比,龙牙组Caspase-3表达减少(P>0.05)。5龙组Caspase-3表达少于5-HD组(P>0.05)。与假手术组相比,模型组Bax表达增多(P<0.05),5-HD组、5龙组Bax表达均明显增多(P<0.01),DZ组、龙牙组Bax表达增多(P>0.05)。与模型组相比,DZ组、龙牙组Bax表达减少(P<0.05),5龙组Bax表达增多(P>0.05),5-HD组Bax表达增多(P<0.05)。龙牙组Bax表达少于DZ组(P>0.05)。5龙组Bax表达少于5-HD组(P>0.05)。与假手术组相比,模型组Bcl-2表达减少(P<0.05),5-HD组、5龙组Bcl-2表达明显减少(P<0.01),DZ组、龙牙组Bcl-2表达减少(P>0.05)。与模型组相比,DZ组、龙牙组Bcl-2表达增多(P<0.05),5-HD组Bcl-2表达减少(P<0.05),5龙组Bcl-2表达减少(P>0.05)。与DZ组相比,龙牙组Bcl-2表达减少(P>0.05)。与5-HD组相比,5龙组Bcl-2表达增加(P>0.05)。⑤线粒体ATP含量：与假手术组相比,各组线粒体内ATP含量均明显减少(P<0.01)。与模型组相比,DZ组、龙牙组线粒体内ATP含量明显增多(P<0.01),5龙组线粒体内ATP含量减少(P<0.05),5-HD组线粒体内ATP含量明显减少(P<0.01)。与DZ组相比,龙牙组线粒体内ATP含量明显增多(P<0.01)。与5-HD组相比,5龙组线粒体内ATP含量增多(P<0.05)。⑥线粒体Ca2+含量：与假手术组相比,各组心肌线粒体内Ca2+含量均增加(P<0.01)。与模型组相比,DZ组、龙牙组线粒体内Ca2+含量明显减少(P<0.01),5-HD组、5龙组线粒体内Ca2+含量明显增加(P<0.01)。龙牙组线粒体内Ca2+含量低于DZ组(P<0.05)。5龙组线粒体内Ca2+含量低于5-HD组(P<0.05)。⑦心肌组织MDA、 SOD、 ROS、 GSH-PX含量：与假手术组相比,各组MDA含量均显着增加(P<0.01)。与模型组相比,DZ组、龙牙组MDA含量明显减少(P<0.01),5-HD组、5龙组MDA含量明显增加(P<0.01)。龙牙组MDA含量低于DZ组(P>0.05)。与5-HD组相比,5龙组MDA含量明显减少(P<0.01)。与假手术组相比,模型组、5-HD组、5龙组、龙牙组SOD含量均明显减少(P<0.01),DZ组SOD含量减少(P<0.05)。DZ组、龙牙组SOD含量明显高于模型组(P<0.01),5-HD组SOD含量低于模型组(P<0.05),5龙组SOD含量低于模型组(P>0.05)。与DZ组相比,龙牙组SOD含量减少(P>0.05)。5龙组SOD含量高于5-HD组(P>0.05)。与假手术组相比,模型组、DZ组、5-HD组、5龙组ROS含量均明显增加(P<0.01),龙牙组ROS含量增加(P<0.05)。与模型组相比,DZ组、龙牙组ROS含量均明显减少,5-HD组、5龙组ROS含量均明显增加(P<0.01)。龙牙组ROS含量低于DZ组(P>0.05)。5龙组ROS含量低于5-HD组(P>0.05)。与假手术组相比,模型组、5-HD组、5龙组、DZ组GSH-PX含量均明显减少(P<0.01),龙牙组GSH-PX含量减少(P<0.05)。与模型组相比,DZ组、龙牙组GSH-PX含量明显增加(P<0.01),5-HD组GSH-PX含量明显减少(P<0.01),5龙组GSH-PX含量减少(P>0.05)。龙牙组GSH-PX含量高于DZ组(P>0.05)。5龙组GSH-PX含量高于5-HD组(P>0.05)。研究结论1.急诊PCI术前,患者标实症状突出,瘀血痹阻心脉因而胸痛为各证型的突出表现。急诊PCI术后,患者胸痛、胸闷症状大多得到了改善,本虚征象表现出来,但总以瘀血为标实。气虚血瘀证者在开通罪犯血管后易发生缺血再灌注损伤。2.发生MIRI后,心肌组织发生了明显的病理改变：心肌细胞发生肿胀、细胞肌浆溶解、局部心肌组织纤维化改变、炎细胞浸润、血管扩张；线粒体细胞色素C相对表达量、ATP含量、膜电位下降；Ca2+含量增加；细胞凋亡物质增多；氧化应激和抗氧化应激平衡失调。龙牙楤木总皂苷能够开放mitoKATP,稳定线粒体膜电位,降低线粒体膜通透性,改善能量代谢,促进线粒体合成高能磷酸化合物,促进线粒体呼吸功能恢复,减轻钙超载,抑制氧化应激反应,抑制心肌细胞凋亡,保护缺血再灌注损伤心肌细胞,但龙牙楤木总皂苷对心肌细胞的保护作用会被mitoKATP抑制剂5-HD减弱。
袁蓉[2]2016年在《活血安神法“双心”同调对睡眠剥夺心肌缺血再灌注损伤的影响》文中研究说明冠心病具有高发病率和高死亡率,严重威胁人类的生命健康,近年来,由于生活节奏加快,社会竞争日趋激烈,冠心病合并抑郁、焦虑、失眠等情况屡见不鲜,这些精神心理障碍影响着冠心病的发生发展和预后,“双心”疾病逐渐受到重视。现阶段,西医将心血管药和抗抑郁药、镇静催眠药等连用,暂时解决了部分精神心理症状,然而其副作用多、远期疗效差、耐药性和成瘾性等问题未得到有效的解决,且全身症状也未能有效改善。因此,寻找安全有效的补充与替代医学改善全身症状及防治“双心”异常是当前冠心病领域要重点解决的问题。目前中医药在冠心病的防治中有着特殊地位。中医中药治疗冠心病“双心”异常有良好的临床疗效,目前虽有大量中医药对冠心病影响的研究,而针对单靶点研究的药物应用于临床疗效不佳,究其原因是缺乏接近于临床的多因素复合模型的研究,而现阶段尚未出现冠心病“双心”异常的动物模型及药物干预研究。因此建立冠心病“双心”异常的动物模型有助于进一步的药物研究。在已有的基础研究中,睡眠剥夺(sleep deprivation, SD)可引起焦虑、烦躁、抑郁等精神心理障碍,心肌缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion, I/R)又是冠心病溶栓、支架术和冠脉搭桥术后涉及的重要的病理生理过程,建立睡眠剥夺心肌缺血再灌注模型,以模拟冠心病“双心”异常的表现,观察机体病理改变,在此基础上观察药物的心血管保护作用及其机制,从而为冠心病的药物研发提供基础支持。中医认为心主血脉、心主神志,冠心病发生时心之气血阴阳受损,痰浊瘀血堆积,心主血脉和心主神志功能异常,可出现“双心”异常。活血安神法为冠心病“双心”异常的重要治法,基于活血安神法形成的活血安神方由丹参、叁七、酸枣仁等药物组成,活血祛瘀、调心安神对胸闷心痛,烦躁失眠等症状有良好改善。前期研究发现,该方能有效缓解临床症状,改善心肌损伤相关指标,但尚未对冠心病合并焦虑抑郁失眠等的作用进行基础研究。因此,更进一步明确活血安神方对冠心病“双心”异常的影响有重要意义。本实验旨在探讨活血安神法“双心”同调对睡眠剥夺心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制,为活血安神法则治疗冠心病“双心”异常提供实验依据,并为开发防治冠心病“双心”异常的新药提供可参依据。1.目的观察不同睡眠剥夺时间对机体病理变化的影响,确定使机体发生病理变化最明显的时间后,建立睡眠剥夺合并心肌缺血再灌注模型以模拟临床冠心病“双心”异常,通过观察神经内分泌变化,血管内皮功能,炎症反应和心肌损伤程度判定复合模型建立成功。在此基础上探讨活血安神方对睡眠剥夺应激心肌缺血再灌注损伤的影响,从心功能、心肌酶、心梗面积、心肌组织形态和心肌细胞凋亡等多方面观察其心血管保护作用及机制,以探讨冠心病“双心”异常的基础病理变化及活血安神方的多途径、多环节保护作用,为活血安神法治疗冠心病“双心”异常提供部分实验依据。2.方法将大鼠随机分为对照组和睡眠剥夺组(SD组),睡眠剥夺造模采用“改良多平台水环境法”,观察两组大鼠SD前、SD2天、SD5天、SD7天的体重和矫正QT间期,分别眼球取血测血清褪黑素(MT)、内皮素(ET-1)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等,确定SD后各病理变化最明显的7天为进一步研究的时间。随后将大鼠随机分组：假手术组、普通模型组、SD模型组、活血安神方组,SD7天并预防性给药7天。第7天一部分大鼠留取血清、血浆和心脏,剩余大鼠麻醉后结扎冠脉左前降支50min分别再灌2h、24h建立心肌I/R模型。观察SD前后大鼠的一般状态和体重,SD后检测血浆儿茶酚胺(CA)和神经肽Y (NPY),血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、C反应蛋白(CRP)、一氧化氮(NO)、ET-1、MT、IL-6、TNF-α,心肌组织TNF-α; I/R后2h检测同样指标及肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH),心脏做HE染色观察心肌病理组织改变,TUNEL检测心肌细胞凋亡情况,免疫组织化学法分析心肌NF-κB、Bcl2、Bax和Caspase 3阳性表达情况,Western blot检测心肌组织NF-κBp65、 Bcl2、Bax和Caspase 3的蛋白表达量；I/R后24h进行TTC-伊文思蓝染色并计算梗死面积和梗死占缺血面积的百分比；I/R前、I/R后2h、24h均进行超声检测,记录心脏射血分数(EF)和心率(HR)。3.结果3.1睡眠剥夺天数确定：随SD时间延长,QTc间期逐渐延长,MT水平逐渐降低,ET-1、 IL-6、TNF-α水平逐渐升高,与对照组比,SD组7天时各指标的差异均有统计学意义(P<0.05),因此选SD7天作为后期实验基础。3.2活血安神方对神经内分泌的影响：SD7天后大鼠精神状态差,狂躁易激惹,体重明显减轻,血清MT降低,血浆CA、NPY,血清AngⅡ、ET-1、NO、IL-6、TNF-α,心肌TNF-α均升高,与普通模型组比差异均有统计学意义(P<0.05),而活血安神方可降低SD后NPY、AngⅡ、ET-1、IL6和TNF-α的水平,抑制MT的降低,与SD模型组比差异均有统计学意义(P<0.05)；迭加I/R后,SD模型组AngⅡ、ET-1、IL-6、TNF-α和CRP的浓度均比普通模型组高,活血安神方可降低SD+I/R后各指标的水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。3.3睡眠剥夺心肌缺血再灌注模型建立：与假手术组和与普通模型组(I/R)比,SD模型组(SD+I/R)血清AngⅡ、CRP、ET-1、IL-6、TNF-α、CK-MB、LDH均升高,心肌TNF-α水平升高,I/R后2h和24h的EF均明显降低,心肌梗死面积和梗死占缺血面积的百分比明显增大,心肌组织病理损伤加重,心肌细胞凋亡指数明显增加,NF-κB和Caspase 3蛋白表达水平增加,Bc2/Bax的比值降低,差异均有统计学意义(P<0.05),说明SD+I/R比单纯I/R的心肌损伤严重,证明睡眠剥夺心肌缺血再灌注模型即SD模型建立成功。3.4活血安神方对心功能和心肌酶的影响：与SD模型组比,活血安神方可明显改善I/R后2h和I/R后24h的EF,降低I/R后2h血清心肌酶CK-MB和LDH,差异均有统计学意义(P<0.05)。3.5活血安神方对心梗面积的影响：与SD模型组比,活血安神方可显着地减少I/R后24h的心肌梗死面积,降低心肌梗死占缺血面积的百分比,差异均有统计学意义(P<0.05)。3.6活血安神方对心肌组织病理的影响：活血安神方组大鼠心肌组织损伤程度比SD模型组轻,心肌细胞排列略规则,炎性细胞较少浸润。3.7活血安神方对心肌细胞凋亡及相关通路的影响：与SD模型组比,活血安神方可减少细胞凋亡指数,降低NF-κB和Caspase 3表达,升高Bcl2/Bax比值,差异均有统计学意义(P<0.05)。4.结论(1)不同SD天数对心血管病致病因子的影响有差异,SD7天时机体各种病理变化最明显,显着增加心血管病风险。(2)SD后大鼠体重明显减轻,精神状态差,神经内分泌失调,进一步引发内皮功能障碍和炎症反应,增加心血管病相关危险病理因素；活血安神方可改善SD诱导的神经内分泌紊乱,进而减轻血管内皮功能障碍和炎症反应,减少心血管病相关致病因子。(3)SD+I/R后心功能EF值下降,心肌酶升高,心肌组织病理损伤严重,心梗面积增大,心肌细胞凋亡加重,比单纯I/R损伤严重,说明SD能使I/R损伤加重,证明睡眠剥夺心肌缺血再灌注模型成功,可初步阐明冠心病“双心”异常的基础病理变化,并为中药治疗提供基础支持。(4)活血安神方不仅可改善SD引起的神经内分泌失调,减少心血管病危险病理因素,降低心血管风险,还可改善SD+I/R后的心功能,减小梗死面积,减轻病理组织损伤和细胞凋亡,这可能是通过抑制SD后NPY的释放,降低TNF-α等炎症因子的水平,进而调节炎症凋亡相关NF-κB通路,减少NF-κB活化及Caspase-3表达,升高Bcl2/Bax的比值,多途径、多环节对心肌损伤发挥保护作用。
张静[3]2009年在《内关穴位注射预处理对大鼠心肌缺血—再灌注损伤心肌细胞凋亡相关因子的影响》文中研究说明实验目的：研究内关穴位注射预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤心肌细胞凋亡相关因子的影响。为针药结合防治心肌缺血-再灌注损伤提供更加丰富的实验室依据和为临床心肌缺血-再灌注损伤的防治提供新的思路和方法。实验方法：通过穴位注射内关穴预处理2周,然后结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD),造成心肌缺血-再灌注损伤模型,取心脏进行心肌病理学观察,免疫组化法检测Caspase-3, p53, IGF-1的表达。实验结果1.心肌缺血-再灌注后心肌细胞数量明显减少,细胞核浓缩。内关穴位注射香丹注射液预处理后细胞数量增多,与复方丹参滴丸灌胃预处理和内关穴位注射生理盐水预处理比较,其作用较好。内关穴位注射生理盐水预处理组和复方丹参滴丸灌胃预处理组比较无明显差异。2.凋亡标志因子Caspase-3在心肌缺血-再灌注损伤后表达增高,内关穴位注射香丹注射液、内关穴位注射生理盐水及复方丹参滴丸灌胃预处理可降低其表达。3.促凋亡因子p53在心肌缺血-再灌注损伤后表达增高,内关穴位注射香丹注射液、内关穴位注射生理盐水及复方丹参滴丸灌胃预处理可降低其表达。4.凋亡保护因子IGF-1在心肌缺血-再灌注损伤后表达增高,内关穴位注射香丹注射液、内关穴位注射生理盐水及复方丹参滴丸灌胃预处理可增高其表达。5.与复方丹参滴丸灌胃预处理、内关穴位注射生理盐水预处理比较,内关穴位注射香丹注射液预处理疗效在降低Caspase-3, p53蛋白的表达,增高凋亡保护因子IGF-1的表达作用上优于复方丹参滴丸灌胃组和内关穴位注射生理盐水组。实验结论：内关穴位注射香丹注射液预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤心肌细胞凋亡起抑制作用。其作用可能是通过降低Caspase-3, p53的表达,增高IGF-1的表达来实现的。
谢文娟[4]2013年在《电针和艾灸预处理对不同时相兔心肌缺血/再灌注损伤保护效应的比较研究》文中提出目的：通过观察比较针灸预处理对不同时间兔心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的心肌细胞超微结构、CK、ET、PKC、HSP70表达的影响,探讨针灸预处理对MIRI的预防保护机制,为进一步深入地研究针灸预处理对MIRI的保护机制提供重要的线索和可能的思路,也将为临床合理应用针灸预防本病的发生发展以及扩大针灸的适用范围提供重要的参考依据。方法：将96只新西兰大耳白兔随机分为假手术组(n=24)、模型组(n=24)、电针预处理组(n=24)和艾灸预处理组(n=24),每组再分为3个亚组,每个亚组8只动物。假手术各小组分别于预处理后0h、24h、48h行假手术,模型组、电针预处理组和艾灸预处理组各小组分别于预处理后0h、24h、48h行缺血再灌注造模。采用冠脉结扎法复制兔心肌缺血/再灌注损伤模型,局部缺血40min,恢复灌注60min后取材。采用电镜观察各组左心室缺血区组织超微结构,ELISA法检测血清CK和血浆ET含量,免疫组化方法检测心肌组织的PKC和HSP70含量。结果：1.模型组心肌细胞超微结构病变严重,结构模糊,排列紊乱,肌纤维萎缩,肌丝溶解、坏死,间质水肿,线粒体水肿、空泡化；与模型组比较,电针预处理组和艾灸预处理组病变程度较轻,心肌纤维排列较规整,坏死、溶解范围较局限,线粒体结构较正常。2.与假手术组各时间组比较,模型组各时间组CK值显着升高(P<0.05或P<0.01)；与模型组比较,电针24h、48h组CK值明显降低(P<0.05)。3与假手术组各时间组比较,模型组各时间组ET值显着升高(P<0.01)；与模型组比较,电针24h、48h及艾灸48h组ET值明显降低(P<0.01)。4.与模型组比较,电针和艾灸各时间组PKC的平均光密度均有所增强,但只在电针48h、艾灸24h和48h升高最为显着(P<0.05或P<0.01)；与电针组比较,艾灸24h组的平均光密度升高明显(P<0.01)。5.与模型组比较,电针各时间组HSP70的平均光密度虽有增强,但只在48h表达最为明显(P<0.01),而艾灸各时间组平均光密度升高均很明显,尤以24、48h差异最为显着(P<0.01)；与电针组比较,艾灸24h组的平均光密度升高明显(P<0.01)。结论：1.针灸预处理对MIRI具有预防保护作用。2.电针预处理和艾灸预处理对不同心肌保护效应指标的影响可能存在差异,并且也会随时间的不同而有所变化。3.针灸预处理在不同时相对血清CK、血浆ET、心肌PKC、HSP70的作用效果有所不同,在48h相电针和艾灸这两种干预手段均显示出良好的调控作用。
李俊平[5]2016年在《益气活血安神法通过抑制钙超载减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验研究》文中认为研究背景再灌注治疗是冠心病急性心肌梗死(AMI)治疗史上里程碑式的进展,其手段主要有叁种：静脉溶栓、经皮冠状动脉腔内成形及支架植入术(PTCA+PCI).冠脉旁路移植术(CABG),随着介入器械和技术的日臻成熟,PCI已成为治疗冠心病AMI的主要手段。但是,再灌注治疗只是一种局部治疗手段,并不能终止冠心病的病理发展进程,加之治疗后出现的一系列心肌缺血再灌注损伤(MIRI),严重制约了冠心病的治疗效果。在MIRI过程中炎症反应、氧化损伤、钙超载及能量利用障碍等都发挥着重要作用,其中钙超载是造成心肌细胞损伤和死亡的共同通路,故防治钙超载是减轻MIRI的重要举措。目前针对MIRI的西医干预多限于实验研究,很多药物尚未应用于临床,只有苯磺酸氨氯地平防治其他器官(如肝脏、卵巢)再灌注治疗后钙超载的实验报道。但由于苯磺酸氨氯地平是通过作用于血管平滑肌的L型Ca通道从而抑制钙超载,存在作用靶点单一、可明显抑制心肌细胞收缩功能,副作用较大,故临床应用有一定局限性。中药也有钙拮抗作用,但其具体作用特点及机制与临床常用有效西药钙通道阻滞剂苯磺酸氨氯地平(络活喜)的异同未见报道。基于心肌缺血再灌注损伤的中医病因病机,结合多年临床经验导师创制出益气活血复方(以下简称复方),功在益气活血,凉血安神,其主要组成为黄芪、丹参、叁七、银杏、酸枣仁等提取物。围绕“防治钙超载”和“保护心功能抑制心室重构”这两大目标,进行益气活血复方对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤保护作用及机制的研究,拟为益气活血复方防治MIRI特色和优势分析提供实验依据。目的观察益气活血复方对心肌缺血再灌注损伤大鼠心室早期重构、心脏射血分数、和心肌梗死区／缺血区比例的影响；并从1miRNA-133调控钙超载及细胞凋亡角度探讨益气活血复方的作用机制。方法225只雄性Wistar大鼠,体重为300±20g,随机分为假手术组、模型组、络活喜组、益气活血复方高、中、低剂量6组,预防性给药7天后,结扎大鼠心脏冠脉左前降支,50min后复灌,制作大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。分别于造模前、造模后及复灌48h行心脏射血分数及心室内径检测,后处死大鼠,取血,离心取血清,剪取心脏,以依文思蓝-TIC双染色评估心肌梗死区与缺血区面积百分比,据此选择益气活血复方最优剂量进行后续机制探讨。每组取6只大鼠,行HE染色及TUNEL染色,取缺血区心肌组织,比色法检测心肌钙离子含量,Western blot法检测左心室缺血区心肌组织SERCA、CasR、MAPK通路、CytC、Caspase-3及Bcl-2蛋白的表达,Real-Time PCR法检测大鼠左心室缺血区心肌组织miRNA-133的表达。结果(1)心脏EF值：①造模术后：与假手术组相比,其余5组EF值均有不同程度的降低,差异具有统计学意义(P<0.05)；余各组间无差异。②复灌48h：模型组较造模术后EF值明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),余各组均有不同程度升高,但较造模术后无差异。③复灌48h：与假手术组相比,各组心脏EF值均有显着下降,差异具有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,益气活血复方高、中、低剂量组均能显着提高EF值,差异具有显着统计学意义(P<0.05),但叁者之间无差异；络活喜组与模型组无明显差异。(2) LVIDd及LVIDs: ①LVIDd:与假手术组相比,模型与低剂量组LVIDd明显增大,差异具有统计学意义(P<0.05)；余各组与假手术无明显差异。与模型组相比,高剂量组LVIDd显着降低,差异具有统计学意义(P<0.05)；余络活喜、中剂量及低剂量与模型组无差异。②LVIDs:与假手术组相比,模型组LVIDs显着增大,差异具有统计学意义(P<0.01);余各组间无明显差异。与模型组相比,高剂量及中剂量组LVIDs显着降低,差异具有统计学意义(P<0.01),但二者之间无差异。(3)心肌梗死／缺血区比率(梗死区／缺血区比率大于30%小于60%)：与模型组相比,络活喜及高剂量组均能显着减小心肌梗死／缺血区比率,差异具有统计学意义(P<0.05)；但络活喜及高剂量两组间无明显差异。(4)心肌组织钙含量：与假手术组相比,模型组钙离子显着升高,差异具有统计学意义(P<0.01)；络活喜及高剂量组含量显着降低,差异具有统计学意义(P<0.05),但络活喜及高剂量二者组间无明显差异。(5)对SERCA2A及CasR表达的影响：①SERCA2A与假手术相比,模型组心肌SERCA2A表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)：与模型组相比,络活喜和高剂量组表达水平均显着升高,差异具有统计学意义(P<0.01),但络活喜和高剂量组间无明显差异。②CasR:与假手术组相比,模型、络活喜及高剂量组CasR表达水平显着升高,差异具有显着统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,高剂量组显着降低,差异具有统计学意义(P<0.01);高剂量与络活喜组相比,心肌CasR表达水平显着降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。(6)心肌细胞凋亡检测：与假手术相比,各组心肌凋亡指数均有显着升高,差异具有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,络活喜及高剂量均能显着降低心肌凋亡指数,差异具有统计学意义(P<0.01),但二者组间无明显差异。(7)对CytC、Caspase-3及Bcl-2表达的影响：①CytC:与假手术相比,模型及高剂量组心肌CytC表达均有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)；络活喜与假手术之间无明显差异：与模型组相比,络活喜及高剂量组均有明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),但络活喜与高剂量组间无明显差异。②CasPase-3:与假手术相比,模型、络活喜及高剂量组CasPase-3表达均有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,络活喜及高剂量组均有明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01),但络活喜与高剂量组间无明显差异。③Bcl-2：与假手术相比,模型和络活喜组均有明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01),高剂量与假手术组间无差异；与模型组相比,络活喜和高剂量组均有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)：与络活喜组相比,高剂量组显着升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。(8)对P38、JNK、ERK1/2表达的影响：①P38：与假手术相比,模型、络活喜及高剂量组P38表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,络活喜和高剂量组显明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);络活喜与高剂量组间无明显差异。②.JNK：与假手术组相比,模型组表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)；余各组间无明显差异。③ERK1/2：与假手术相比,模型、络活喜及高剂量组ERK1/2表达水平均有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)；与模型组相比,络活喜组显着降低,差异具有统计学意义(P<0.01)；与络活喜组相比,高剂量组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。(9)对miRNA-133表达的影响：与模型组相比,假手术、络活喜及高剂量组miRNA-133表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)；与假手术相比,络活喜及高剂量组无明显差异;络活喜与高剂量组之间无明显差异。结论(1)益气活血复方和络活喜均可减小大鼠心肌缺血再灌注损伤时心肌梗死面积；此外益气活血复方还能提高再灌注引起的心脏EF值降低、抑制LVIDd、LVIDs的增大,从而抑制MIRI早期左心室的恶性重构,改善心功能,其综合效应明显优于络活喜。(2)益气活血复方能抑制心肌缺血再灌注损伤钙超载,并减轻钙超载引起的线粒体途径的心肌细胞凋亡。(3)益气活血复方可能通过上调miRNA-133水平、调节p38MAPK通路来发挥保护受损心肌的作用。
刘晓丹[6]2017年在《大株红景天注射液对缺氧/复氧心肌细胞线粒体功能及动力学的影响》文中进行了进一步梳理目的:本实验用大鼠原代心肌细胞建立心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤模型,探讨大株红景天注射液对线粒体功能及线粒体动力学相关蛋白表达的影响,明确其抗心肌细胞H/R损伤的作用及其可能的机制。方法:分离并培养新生SD大鼠原代心肌细胞,选取生长状态良好的心肌细胞,随机分为五组:①空白对照组;②缺氧/复氧组(H/R组);③后干预组(H/R组+大株红景天注射液);④前干预组(大株红景天注射液+H/R组);⑤前后干预组(大株红景天注射液+H/R组+大株红景天注射液)。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)测定大株红景天注射液对心肌细胞活力的影响,确定最佳给药浓度;用多功能酶标仪测定反映线粒体功能的指标变化,包括细胞内活性氧(ROS)含量、叁磷酸腺苷(ATP)水平、线粒体膜电位(MMP);免疫印迹法(Westernblotting)测定线粒体动力学相关蛋白OPA1、Drp1以及p-Drp1的表达水平。结果:1.大株红景天对H/R损伤的原代心肌细胞ATP、ROS含量的影响与空白对照组相比,H/R组心肌细胞内ATP含量明显降低、ROS含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R组相比,后干预组、前干预组及前后干预组心肌细胞中ATP含量升高、ROS含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。前后干预组心肌细胞内ATP含量升高、ROS含量降低,与前干预组、后干预组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。前干预组与后干预组比较ATP、ROS含量变化无统计学意义(P>0.05)。2.大株红景天对H/R损伤的原代心肌细胞MMP的影响与空白对照组相比,H/R组心肌细胞内MMP下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R组相比,后干预组、前干预组及前后干预组心肌细胞中MMP升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。前后干预组心肌细胞内MMP升高,与前干预组、后干预组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。前干预组与后干预组比较MMP变化无统计学意义(P>0.05)。3.大株红景天对H/R损伤的原代心肌细胞OPA1蛋白表达的影响与空白对照组相比,H/R组OPA1蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组相比,后干预组、前干预组及前后干预组OPA1蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。前干预组、后干预组、前后干预组之间两两比较,OPA1蛋白的表达无明显差异(P>0.05)。4.大株红景天对H/R损伤的原代心肌细胞Drp1、p-Drp1蛋白表达的影响各实验组Drp1蛋白表达量无差异(P>0.05),p-Drp1的表达有差异。与空白对照组相比,H/R组p-Drp1蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组相比,后干预组、前干预组及前后干预组p-Drp1蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。前后干预组与前干预组、后干预组相比,p-Drp1蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。前干预组与后干预组比较p-Drp1蛋白表达无差异(P>0.05)。结论:大株红景天注射液对H/R损伤的心肌细胞有明显保护作用,其机制可能是通过抑制受损心肌细胞内线粒体动力学的失衡,维持线粒体结构稳态,改善线粒体功能障碍,进而减轻MIRI,发挥一定的心肌保护作用。
黄烨[7]2008年在《芪丹通脉片对大鼠缺血/再灌注损伤心肌保护作用及其机制研究》文中研究表明研究背景随着冠状动脉介入术及冠脉搭桥术等治疗手段的广泛应用,伴随发生的心肌再灌注损伤日益受到心脏病学家的高度关注。近年来,在应用各种西药和基因治疗等手段预防再灌注损伤的同时,应用益气、活血、化瘀的中药防治再灌注损伤逐渐受到重视。探讨其在心肌缺血/再灌注损伤中可能的机制成为研究热点。目前认为,能量代谢障碍是心肌缺血/再灌注损伤的发生基础,再灌注后由于恢复供氧产生自由基增多,且钙超载及炎症反应等因素都是引发的原因。近年来研究发现,炎症反应在心肌缺血/再灌注损伤中至关重要。中医药可通过抑制炎症细胞的趋化及浸润、调节细胞因子的合成及分泌、恢复炎症抑制因子和促炎因子的平衡等多种途径干预心肌缺血/再灌注损伤后炎症反应,发挥心肌保护作用。芪丹通脉片是益气活血的中药复方,以往我们的实验研究结果表明,其作用机制可能是:通过增加缺血心肌对葡萄糖的摄取及利用,以改善能量代谢障碍;有效地消除或抑制氧自由基的损伤;抑制心肌细胞线粒体中钙超载;下调促炎因子白介素-6 (IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。那么,芪丹通脉片在抑制炎性因子释放的同时,是否会上调炎症抑制因子的释放以发挥防治心肌缺血/再灌注损伤的作用尚不清楚。研究目的1、观察芪丹通脉片对缺血/再灌注损伤所致大鼠心电图、心肌梗死面积、心肌病理形态学和心肌超微结构的影响。2、研究炎症抑制因子白细胞介素-10 (IL-10)是否参与芪丹通脉片对心肌缺血/再灌注损伤的防治。实验方法1、动物分组:SD大鼠随机分为假手术组(阴性对照)、模型组、恬尔心组(5 mg/kg?d,阳性对照)及芪丹通脉片高、中、低剂量组(芪丹通脉片浸膏干粉剂量分别为3.24、1.08和0.36 g/kg?d,药物用蒸馏水配制成等体积混悬液),除假手术组6只外,其余每组11只。每只大鼠按照10 ml/kg?d灌胃,假手术组和模型组灌以等量蒸馏水,连续灌胃7 d后制备心肌缺血/再灌注模型。2、制备SD大鼠心肌缺血/再灌注(I30 min, R2 h)模型:大鼠经腹腔注射3%戊巴比妥钠(45 mg/kg)麻醉后,固定,暴露气管、插管,分离右颈总动脉、插管,给予正压人工呼吸。打开胸腔,分离胸腺,暴露心脏,剪开心包,结扎左冠状动脉前降支,缺血30 min后,再灌注2 h。3、观察指标:冠脉结扎前、缺血即刻、缺血5、10、20和30 min,再灌注即刻以及再灌注5、10和20 min时间点的心率(heart rate, HR);再灌注20 min内的心律失常发生情况;伊文氏蓝-TTC染色测定心肌梗死面积(infarct size, IS)与心肌缺血面积(area at risk, AAR)比值;HE染色观察心肌病理形态;醋酸铀-枸橼酸铅双染色观察心肌超微结构;再灌注2 h经右颈总动脉取全血4 ml,分离血清,ELISA法检测血清IL-10含量。实验结果1、心率:冠状动脉结扎前,各组大鼠心率无差异(P均> 0.05)。与模型组比较,芪丹通脉片高剂量组和恬尔心组均能显着减慢缺血/再灌注过程中各时间点的心率(P < 0.05或P < 0.01),而芪丹通脉片中剂量组仅于缺血30 min时心率显着减慢,与模型组比较差异有统计学意义(P < 0.05);芪丹通脉片低剂量组在各时间点虽能减慢心率,但与模型组比较差异无统计学意义(P均> 0.05)。2、心律失常:在观察期间,模型组大鼠频发出现室性早搏(PVC)、室性心动过速(VT)和室颤(VF)等心律失常,且心律失常首发时间多出现在再灌注即刻至5 min之间,VT、VF的发生率分别是87.5%和62.5%,且VT、VF的持续时间分别为31.67 s和153.85 s。在此期间,芪丹通脉片高剂量组大鼠虽也出现PVC、VT和VF等心律失常,但与模型组相比,心律失常首发时间延迟,VT、VF持续时间缩短(P < 0.05或P < 0.01)且发生率亦有所下降,心律失常类型以偶发性PVC和VT多见。恬尔心组亦能缩短VT、VF持续时间(P均< 0.01) ,同时也可减低VT、VF的发生率(P均< 0.05),与模型组相比,其心律失常评分明显降低(P < 0.01)。3、心肌梗死面积:给予心肌缺血30 min,再灌注2 h后,模型组大鼠缺血心肌出现明显的心肌梗死现象;与模型组大鼠心肌梗死面积相比较,芪丹通脉片高剂量组和恬尔心组大鼠心肌梗死面积明显缩小(P < 0.05或P< 0.01)。4、心肌病理改变:正常心肌细胞排列整齐,肌纤维清晰,胞膜完整,无变性坏死;缺血/再灌注损伤后心肌细胞排列紊乱,心肌纤维横纹不清或消失,有中性粒细胞浸润;与模型组相比,芪丹通脉片高剂量组心肌细胞排列较整齐,水肿减轻,心肌纤维横纹较清晰,无中性粒细胞浸润。5、心肌超微结构改变:模型组心肌细胞坏死,局灶性肌丝液化;线粒体肿胀,局部膜破裂,基质密度降低,呈空泡状,嵴断裂;细胞核肿胀,异染色质增多,细胞膜下可见大量炎性细胞浸润,间质水肿明显。芪丹通脉片高剂量组及恬尔心组心肌超微结构破坏明显减轻,心肌细胞完整,排列整齐,Z线清晰可见;线粒体轻度肿胀,包膜完整,形态规则,少有嵴降解;细胞核膜完整,染色质较均匀。6、缺血/再灌注后血清IL-10含量:造模后各组血清IL-10水平均较假手术组显着升高(P均< 0.01);芪丹通脉片叁个剂量组和恬尔心组的升高水平较模型组更明显,其中以芪丹通脉片高剂量组和恬尔心组作用尤为显着(P < 0.05或P < 0.01)。结论1、芪丹通脉片对缺血/再灌注损伤大鼠心肌具有明显的保护作用。2、芪丹通脉片能够促进内源性IL-10大量释放,抑制炎症反应。这可能是该药发挥心肌保护作用的机制之一。本研究进一步在动物模型的水平上证实了益气活血中药复方防治缺血性心脏病的可行性,为阐明缺血/再灌注损伤的发病机制、研究及开发防治缺血性心脏病的新型安全的中药制剂提供了一定的实验依据。
李荣[8]2007年在《延胡索碱及延胡索复方抗冠心病室性心律失常的实验与临床研究》文中指出研究背景当今，冠心病已成为人类叁大死亡原因之一，我国冠心病的发病率正逐年上升。冠心病的基本病理生理就是心肌缺血，要挽救缺血心肌就必须及时、有效地恢复缺血心肌的再灌注。但是缺血心肌在恢复血流灌注后，往往引起缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion iniury，IRI)。如何防治心肌缺血再灌注损伤已成为心脏病学基础应用研究中的一个重要领域。1986年Murry等发现缺血预处理可减轻IRI，但由于缺血预处理本身是一种损伤性因素，很难在临床推广应用，因此寻找安全有效的药物作为药物预处理手段防治IRI具有重要的现实意义。1988年，美国着名的CAST试验结果表明：抗心律失常药物有潜在致心律失常作用的危险性。这种危险性给发展中药预处理防治IRI，特别是抗再灌注心律失常带来了机遇和挑战。近来在心血管疾病的防治研究中，特别是在治疗缺血性心脏病和抗心律失常方面，许多复方都选用了延胡索。延胡索是一种活血化瘀中药，现代药理研究表明，其具有增加冠脉流量、扩张血管、改善心肌营养性血流量及抗心律失常等作用。但是应用延胡索碱预处理抗心肌缺血再灌注损伤的实验研究及运用延胡索复方桃仁红花煎治疗冠心病室性心律失常的临床研究却未见报道。本课题即打算在此领域作些有益的探索。实验研究【目的】通过动物实验，比较药物预处理与缺血预处理对心肌缺血再灌注损伤的作用效果，评价延胡索碱预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其药理作用机制。【方法与内容】采用SD大鼠，随机分为6组：假手术组、模型组、缺血预处理组、延胡索碱低、中、高剂量组。建立大鼠心肌缺血再灌注模型，运用膜片钳技术、流式细胞仪技术、免疫组化、电镜酶细胞化学和分子生物学等方法，从整体、细胞乃至分子基因水平探讨延胡索碱预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其药理作用机制。实验共分为六个部分。实验一：观察延胡索碱预处理对大鼠心肌缺血再灌注心律失常的影响。实验二：观察延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响。实验叁：观察延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌Ca~(2+)-ATPase及Na~+-K~+-ATPase活性的影响。实验四：观察延胡索碱预处理对单个心肌细胞膜上L-型钙通道动力学的影响。实验五：观察延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌细胞内游离Ca~(2+)浓度的影响。实验六：观察延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌梗死范围的影响。【结果】1．室性心律失常发生率比较：延胡索碱中、高剂量组的室速(VT)和室颤(VF)的发生率显着降低，与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)，延胡索碱低剂量组上述指标变化无统计学意义(P＞0.05)；与缺血预处理组比较，延胡索碱中、高剂量组的VT和VF的发生率变化无统计学意义(P＞0.05)。各组对室性早博(VPB)发生率的影响，差异无统计学意义(P＞0.05)。2．心律失常发生时间比较：延胡索碱低、中、高剂量组的心律失常出现时间明显推迟、持续时间明显缩短，与模型组比较差异有显着性(P＜0.01)。与缺血预处理组比较，延胡索碱预处理虽也能推迟心律失常出现时间、缩短心律失常持续时间，但作用较之减弱(P＜0.01)。3．ST段抬高程度比较：在心肌缺血30min，再灌注20min和60min时间点时，假手术组ST段抬高程度无明显改变，模型组ST段则明显抬高；与模型组比较，缺血预处理组和延胡索碱预处理各剂量组ST段抬高幅度虽有所降低，但差异无显着性(P＞0.05)。心率变化比较：与模型组比较，延胡索碱低、中、高剂量组，以及缺血预处理组均能明显减慢心率，差异有显着性(P＜0.01)；与缺血预处理组比较，延胡索低、中剂量组减慢心率的作用较之减弱(P＜0.01)，延胡索碱高剂量组则较之增强(P＜0.05)。4．原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠心肌细胞凋亡结果：假手术组心肌仅偶见细胞凋亡发生，模型组可见大量胞核呈深浅不一棕褐色的凋亡心肌细胞，心肌细胞凋亡指数明显高于假手术组(P＜0.01)；缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组凋亡心肌细胞和心肌细胞凋亡指数均较模型组明显减少(P＜0.01)；而缺血预处理组和延胡索碱高剂量组间差异无显着性(P＞0.05)。5．心肌细胞bcl-2基因蛋白表达变化：与假手术组比较，抑凋亡基因bcl-2在缺血再灌注后表达明显减少，心肌细胞bcl-2蛋白阳性表达指数(PEI)明显低于假手术组(P＜0.01)；缺血预处理及用药后bcl-2表达增高，缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组bcl-2蛋白阳性表达指数(PEI)均较模型组组明显增高(P＜0.05)。而缺血预处理组和延胡索碱高剂量组比较，差异无显着性(P＞0.05)。6．心肌细胞Fas基因蛋白表达变化：假手术组极少数心肌细胞Fas基因蛋白表达阳性；与假手术组比较，缺血再灌注后Fas基因蛋白表达明显加强，心肌细胞Fas蛋白阳性表达指数(PEI)明显高于假手术组(P＜0.01)；缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组Fas蛋白阳性表达指数(PEI)均较模型组明显减少(P＜0.05)；而缺血预处理组和延胡索碱高剂量组比较，差异无显着性(P＞0.05)。7．心肌细胞Na~+，K~+-ATP酶活力分析：与假手术组比较，心肌缺血再灌注损伤后，心肌细胞Na~+，K~+-ATP酶活力显着下降(P＜0.01)。与模型组比较，除低剂量组(P＞0.05)外，缺血预处理组和延胡索碱中、高剂量组的心肌细胞Na~+-K~+-ATP酶活力都明显升高，差异有统计学意义(P＜0.01)；与缺血预处理组比较，延胡索碱中、高剂量组心肌细胞Na~+-K~+-ATP酶活力差异无显着性(P＞0.05)。8．心肌细胞Ca~(2+)-ATP酶活力分析：与假手术组比较，心肌缺血再灌注损伤后，心肌细胞Ca~(2+)-ATP酶活力显着下降(P＜0.01)。与模型组比较，除低、中剂量组(P＞0.05)外，缺血预处理组和延胡索碱高剂量组的心肌细胞Ca~(2+)-ATP酶活力都明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与缺血预处理组比较，延胡索碱高剂量组心肌细胞Ca~(2+)-ATP酶活力差异无显着性(P＞0.05)。9．单个心肌细胞膜上L-型钙通道动力学变化(1)L-型钙离子通道平均开放概率比较：与假手术组比较，模型组L-型钙离子通道平均开放概率明显提高(P＜0.01)；与模型组比较，缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组心肌细胞的L-型钙离子通道平均开放概率明显降低(P＜0.01)；而且缺血预处理组与延胡索碱高、中、低剂量组比较，无统计学差异(P＜0.05)。(2)L-型钙离子通道平均开放时间比较：与假手术组比较，模型组心肌细胞L-型钙离子通道平均开放时间明显缩短(P＜0.05)；与模型组比较，缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组平均开放时间无显着性差异(P＞0.05)。(3)L-型钙离子通道平均电流幅值比较：与假手术组比较，模型组平均电流幅值明显增高(P＜0.05)；与模型组比较，延胡索碱低、中剂量组可减弱L-型钙通道平均电流幅度值(P＜0.05)，但缺血预处理组和延胡索碱高剂量组反而增强L-型钙通道电流幅度值(P＜0.05)。10．心肌细胞内钙离子浓度比较：与假手术组比较，模型组心肌细胞内平均钙离子荧光强度明显增强(P＜0.01)；与模型组比较，缺血预处理组与延胡索碱高、中、低剂量组平均钙离子荧光强度减弱，差异有统计学意义(P＜0.01)；缺血预处理与延胡索碱高剂量组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。11．心肌缺血、梗死面积比较(1)心肌缺血面积比较：与模型组比较，除低剂量组(P＞0.05)外，其余各组心肌缺血面积均有减少(P＜0.01或P＜0.05)；与缺血预处理组比较，除低剂量组(P＜0.05)外，延胡索碱高、中剂量组心肌缺血面积与其相当，差异无显着性(P＞0.05)。(2)心肌梗死面积比较：与模型组比较，缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组梗死面积均缩小(P＜0.05)；与缺血预处理组比较，除低剂量组(P＜0.01)外，延胡索碱高、中剂量组心肌梗死面积与其相当，差异无显着性(P＞0.05)。【结论】1．对大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常而言，延胡索碱预处理不仅可推迟其出现时间，缩短其持续时间，而且还可降低室速(VT)和室颤(VF)的发生率，减慢大鼠心肌缺血再灌注损伤后心率的增快。说明延胡索碱预处理具有抗大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的作用。2．延胡索碱预处理可通过上调缺血再灌注心肌抑凋亡基因bcl-2的蛋白表达和下调促凋亡基因Fas的蛋白表达，从而抑制心肌细胞凋亡的发生，保护心肌细胞免受缺血及缺血再灌注的损伤，从而保护心脏功能，具有类似于缺血预处理的内源性抗凋亡保护机制。3．延胡索碱预处理能显着提高心肌细胞Na~+-K~+-ATPase、Ca~(2+)-ATPase活性，通过肌浆网Ca~(2+)-ATP酶(肌浆网钙泵)、Na~+-Ca~(2+)交换体系、肌膜Ca~(2+)-ATPas等途径将细胞内Ca~(2+)运出细胞外，从而减轻心肌细胞内钙离子浓度和钙超载，起到保护心肌细胞的作用。4．延胡索碱预处理可降低心肌细胞膜上L-型钙通道平均开放概率，并显着减弱心肌细胞膜上L-型钙通道平均电流幅度值，从而阻断心肌细胞膜L-型钙通道开放，减少“外钙内流”、“内钙释放”，降低心肌细胞内游离钙离子的浓度，避免了细胞内钙离子超载，发挥保护心肌细胞的作用。5．延胡索碱预处理与经典缺血预处理一样，可显着缩小大鼠心肌缺血再灌注的心肌梗死面积，对缺血再灌注心肌损伤有保护作用。临床研究【目的】观察延胡索复方桃仁红花煎对冠心病频发室性早博患者的临床疗效。【方法与内容】采用前瞻性试验性设计方案。遵循随机、对照、单盲原则进行研究。将60例冠心病频发室性早博患者按为1∶1随机分为试验组与对照组。试验组采用冠心病西医基础治疗加上延胡索复方桃仁红花煎治疗，对照组仅采用单纯西医基础治疗，不用中医中药治疗。通过观察治疗前后室性早博次数的变化以及中医证候、症状的改变，比较试验组与对照组二者间的临床疗效。【结果】1．治疗后两组患者室性早搏疗效比较：试验组总有效率85％，对照组75％，P＞0.05，差异无统计学意义，说明两组患者的疗效相当。2．两组患者治疗前后24h室性早博次数的比较：试验组和对照组治疗前后自身比较，P＜0.01，差异有显着统计学意义。两组患者治疗前后24h室性早博次数差值比较，P＞0.05，差异无统计学意义。3．两组患者中医证候疗效比较：试验组总有效率90％，对照组70％，经X~2检验P＜0.05，差异有统计学意义。4．两组患者中医症状积分比较：治疗前后自身比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。试验组患者治疗前后症状积分差值明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。5．两组患者中医症状疗效比较：试验组心悸中医症状总有效率为89.7％，对照组为66.7％，两组差异有统计学意义(P＜0.05)；试验组胸闷中医症状总有效率为76.9％％，对照组为45.8％，两组差异有统计学意义(P＜0.05)；余各中医症状疗效差异无统计学意义(P＞0.05)。【结论】通过临床小样本观察，我们发现西医基础治疗结合中药延胡索复方(桃仁红花煎)治疗，在减少冠心病频发室性早搏次数方面与单纯西药治疗疗效相当；但是在改善冠心病频发室性早搏的中医证候及中医症状特别是心悸、胸闷等方面疗效优于单纯西药治疗，而且副作用少，没发现有任何致心律失常作用，值得在临床上推广应用。结语1．延胡索碱预处理不仅可推迟大鼠心肌缺血再灌注室性心律失出现时间，缩短其持续时间，而且还可降低室速(VT)和室颤(VF)的发生率，减慢大鼠再灌注损伤后心率的增快。说明延胡索碱预处理有抗大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的作用。2．延胡索碱预处理可通过上调缺血再灌注心肌抑凋亡基因bcl-2的蛋白表达和下调促凋亡基因Fas的蛋白表达，从而抑制心肌细胞凋亡的发生，保护心肌细胞免受缺血及缺血再灌注的损伤，具有类似于缺血预处理的内源性抗凋亡保护机制。3．延胡索碱预处理能显着提高心肌细胞Na~+-K~(+-)ATPase、Ca~(2+)-ATPase活性，通过肌浆网Ca~(2+)-ATP酶(肌浆网钙泵)、Na~+-Ca~(2+)交换体系、肌膜Ca~(2+)-ATPas等途径将细胞内Ca~(2+)运出细胞外，从而减轻心肌细胞内钙浓度和钙超载，起到保护心肌细胞的作用。4．延胡索碱预处理可降低心肌细胞膜上L-型钙通道平均开放概率和平均电流幅值，从而阻断心肌细胞膜L-型钙通道，减少“外钙内流”、“内钙释放”，降低心肌细胞内钙离子的浓度，避免了细胞内钙离子超载，起到保护心肌细胞的作用。5．延胡索碱预处理与经典缺血预处理一样，可显着缩小心肌缺血再灌注损伤大鼠的心肌梗死面积，对缺血再灌注损伤心肌有保护作用。6．通过临床观察，我们发现西医基础治疗结合延胡索复方(桃仁红花煎)治疗，在减少冠心病频发室性早搏次数、抗冠心病心律失常方面与单纯西药治疗疗效相当；但是在改善冠心病频发室性早搏的中医证候及中医症状特别是心悸、胸闷等方面疗效优于单纯西药治疗，而且副作用少，没发现有任何致心律失常作用，值得在临床上推广应用。
王梓宁[9]2013年在《中医药治疗心血管病的文献计量分析》文中认为心血管疾病已经成为影响人类健康的一大重要危险因素,已成为全球头号死因。建国60年以来,随着人民生活条件逐渐改善,心血管疾病在我国逐渐成为一种常见疾病,并且心血管疾病的死亡率高于日本和欧美发达国家。千百年来,中医药在防护治疗我国人民身心健康中,发挥了巨大作用。进入21世纪,随着现代化技术在中医药研究中的广泛应用,中医药在各项疾病的预防和治疗方面,均获得了重大突破。中医药在治疗心血管疾病方面的研究,也获得多方面进展,产生了大量的科技文献。而文献计量学,则是利用统计手段对文献进行定量或半定量分析的,以揭示文献分布规律,预测学科发展方向的一个重要方法。本研究拟从文献计量学的角度,对中外文数据库中关于中医药治疗心血管疾病的相关科技文献进行总结提炼,描述目前国内外对中医药治疗心血管疾病的现有成果,从宏观角度揭示当前中医药治疗心血管疾病的研究现状,对以后的相关研究提供参考。1.研究目的从文献角度总结中医药治疗冠心病、高血压、心律失常、心力衰竭以及心肌缺血再灌注损伤的研究现状,发现此领域中的关键作者、热门期刊、核心机构以及研究热点等。对目前的研究现状进行总结,为日后相关研究工作的开展提供参考。2.研究方法经过几十年的研究与发展,文献计量学中产生了许多研究方法,如频次分析法、共现分析法、互相关分析法等。根据研究目的,本文主要使用了频次分析法和共现分析法,来对中医药治疗心血管病的相关科技文献进行分析。频次分析法,是在相关字段中,对数据进行计次排序,从中发现在某方面的学科带头人、高产机构等信息；可以在一定程度上反映科研实力,让科研工作者快速找出研究重点;同时结合分析科研文献的具体内容,可以找出科学研究中隐含的“无形”学术团队及科学研究领域。本文主要使用Excel软件中的宏功能以及Bicomb软件进行频次分析。共现分析法,是将各种信息载体中的共现信息定量化的一种分析方法,以揭示信息的内容关联和特征项所隐含的意义。科技论文中的共现是指相同或不同类型特征项共同出现的现象,在文献计量研究中,共同出现的特征项之间一定存在着某种关联,其关联程度可用共现频次来测度。本文主要使用Bicomb,以及Spss19.0软件进行共现分析。3.研究步骤3.1确定疾病经过文献初筛,以及结合临床实际,选取冠心病、高血压、心律失常、心力衰竭以及心肌缺血再灌注损伤五种心血管疾病文献作为研究对象。3.2获取文献(1)中文文献：在CBM数据库中,使用主题检索,以五种心血管疾病的中文主题词作为检索入口,并选择相应的副主题词：按摩疗法、穴位疗法、中医病机、中药疗法、中医药疗法、中西医结合疗法、针灸疗法和中医疗法。进行检索下载全部题录信息。(2)外文文献：以PubMed作为外文数据来源,以"Coronary Disease"、"Hypertension"、"Arrhythmias, Cardiac"、"Heart Failure"、"Myocardial Reperfusion Injury"、"Drugs, Chinese Herbal"、"Acupuncture Therapy"、"Medicine, Chinese Traditional"、"Tai Ji"等作为检索词。检索策略为(以"Coronary Disease"+" Medicine, Chinese Traditional"为例)：("coronary disease"[MeSH Terms] OR ("coronary"[All Fields] AND "disease"[All Fields]) OR "coronary disease"[All Fields]) AND (("medicine"[MeSHTerms] OR "medicine"[All Fields]) AND ("asian continental ancestry group"[MeSH Terms] OR ("asian"[All Fields] AND "continental"[All Fields] AND"ancestry"[All Fields] AND "group"[All Fields]) OR "asian continental ancestry group"[All Fields] OR "chinese"[All Fields]) AND traditional[All Fields])。进行检索下载全部题录信息。3.3文献处理及统计方法(1)中文文献：对下载得到的文献经过转换后,导入Excel进行去重处理,建立五种心血管疾病的数据集。提取相关字段进行频次统计。将主题词字段进行提取,删除副主题词后,对主题词进行合并,提取高频主题词,利用MySQL语句进行词频统计,并利用Spss19.0进行聚类分析。(2)外文文献：将下载得到的文献导入TDA进行去重处理,五种心血管疾病的数据集。提取相关字段进行频次统计。将主题词字段进行提取,删除副主题词后,对主题词进行合并,提取高频主题词,利用Bicomb软件进行词频统计,并利用Spss19.0进行聚类分析。4.研究结果在CBM数据库中检出文献16548篇,PubMed数据库中检出文献2987篇,经过去重后,共获得中文文献16154篇,外文文献2480篇。(1)冠心病冠心病的研究热点主要集中在活血化瘀思想在治疗中的应用体现,使用的中药以人参、丹参、麦冬等为主;治法治则以活血补气,滋阴祛痰为纲；形成了以陈可冀及其所在的中国中医科学院西苑医院为首的研究团队。外文文献的研究热点与中文文献的研究结果类似,集中在研究中药药理成分,以及针刺对冠心病的辅助治疗作用。(2)高血压高血压的研究热点主要集中在天麻、钩藤等中药在治疗肝阳上亢型高血压的疗效；从血瘀、痰湿等角度阐释左心室肥厚与高血压之间的病理生理关系;以及葛根在调节血浆中内皮血管肽类、一氧化氮等物质水平,以起到控制血压的功效等诸方面。外文文献的研究热点与中文文献研究结果类似,集中在苄异喹啉类和吡嗪类药物在控制血压方面的作用,以及太极在控制血压方面的作用。(3)心律失常心律失常的研究热点主要体现在参麦注射液、炙甘草汤以及麻黄附子细辛汤在治疗心律失常方面的疗效机制。外文文献的研究结果显示,生物碱类物质是治疗心律失常的有效成分,并且通过针刺相关穴位,可以起到改善心律失常,预防心肌缺血再灌注损伤的发生。(4)心力衰竭心力衰竭的研究热点主要体现在人参、麦冬、黄芪、丹参等中药在治疗心力衰竭方面的作用机制,以及揭示了心力衰竭的病因病机是以气虚、阳虚为本,血瘀、水停为标,治法当从活血补气、利水祛湿等入手。外文文献研究结果主要有叁：一、地高辛是治疗心力衰竭的常用药物。二、通过针刺相关穴位,可以起到改变心脏中血液流变,改善心肌缺血的作用。叁、太极作为一种有效的补充替代医学的治疗方式,可以有效提高冠心病心力衰竭患者的生存质量。(5)心肌缺血再灌注损伤心肌缺血再灌注损伤的研究热点主要体现在以下四点：一、对心肌缺血再灌注损伤的研究,使用的中药主要有人参、麦冬、川芎、黄芪等中药,研究方法主要是通过建立心肌梗死或心律失常模型,通过外科手术对受损的心肌细胞进行取样观察。二、治疗心肌缺血再灌注损伤主要从活血化瘀的思想入手。叁、电针刺激心包经中的相关穴位(主要是内关穴),可以刺激心肌细胞释放超氧化物歧化酶,调节血浆中一氧化氮的水平,改善心肌缺血后心肌细胞的受损情况。四、心电描记术作为一种诊断方法,对心肌缺血的确诊有很大帮助,常用的中药以丹参为主。外文文献的研究结果与中文文献基本一致。5.结论(1)发文国家方面,中国仍是主要的研究国家,美国、英国等西方发达国家也开始日益关注并逐渐参加到本领域中。(2)发文数量方面,本领域的文章数量较多,并且每年均有稳定增长,在2000年后呈现快速增长趋势。(3)文章使用语种以中文和英文两种为主,兼有日、德、法、俄等多国语言。说明此方面的相关研究在世界范围内已取得一定的学术关注度。(3)发文期刊方面,由于本领域中国是主要的研究大国,因此大多数文章发表在中国的期刊杂志；发表文章较多的杂志主要有《中国中西医结合杂志》、《中国中药杂志》、《中医杂志》等,发表在国外的期刊主要是《美洲中国医学杂志》。发表的文章,不论是数量还是质量,均尚有较大的提升空间。并且,目前文章的发表期刊,期刊因子指数均比较低,在质量方面还有待提高,鲜见发表在《Lancet》.《Science》、《Circle》等顶级医学杂志上的文章。(4)研究热点方面,中文文献中,中医药治疗心血管疾病的治疗思想仍以活血化瘀、滋阴补气等为主；常见中药有丹参、人参、黄芪、麦冬,复方有丹参注射液、炙甘草汤、麻黄附子细辛汤等；研究文章多是对药物疗效的研究,对药物的药理机制方面的研究仍不多见。外文文献方面,对中医药治疗心血管疾病的关注点与中文文献基本一致,常见药物以人参、丹参为主,但是与中文文献略有不同的是,出现了针灸疗法对治疗心血管疾病方面的相关研究,以及太极对心血管疾病的补充治疗作用研究。这与针灸和太极作为补充替代医学中的重要组成部分,已被西方国家所接受认可有关。
曹凤华[10]2014年在《枳实薤白桂枝汤预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用》文中进行了进一步梳理目的：观察枳实薤白桂枝汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其保护作用机制，为中医药治疗心肌缺血再灌注损伤性疾病的提供临床应用的实验依据。方法：建立大鼠急性心肌缺血再灌注模型，观察心肌缺血再灌注损伤后的心肌梗死范围、检测血清LDH含量、血清NOS活性、心肌组织HE染色病理改变，并进一步研究枳实薤白桂枝汤预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护的作用机制。结果：1、枳实薤白桂枝汤可明显减小缺血再灌注损伤心肌梗死的范围，对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。与模型组比较P<0.001。2、枳实薤白桂枝汤可明显提高心肌缺血再灌注损伤血清LDH的含量，对心肌具有保护作用。与模型组比较P<0.01。3、枳实薤白桂枝汤可明显提高心肌缺血再灌注损伤血清NOS的含量，对心肌具有保护作用。与模型组比较P<0.01。4、大鼠心肌组织HE染色，病理切片HE染色，显微镜下观察显示，假手术组的心肌无明显组织形态的改变，心肌纤维排列整齐，未见明显的炎性细胞浸润与心肌肿胀坏死；模型组的动物的心肌组织，可见大片肿胀，肌纤维明显断裂，心肌发生变性坏死，有大量的炎性细胞浸润、渗出；枳实薤白桂枝汤组的心肌组织肿胀明显比模型组减轻，炎性细胞浸润较少。结论：枳实薤白桂枝汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用，可明显缩小动物载体急性心肌缺血再灌注损伤的心肌梗死面积，减少炎性细胞浸润与心肌的肿胀坏死，对心肌具有保护作用；而其保护作用可能是通过增强心肌细胞的乳酸脱氢酶及一氧化氮合酶的表达及活性来实现的。
参考文献：
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[10]. 枳实薤白桂枝汤预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[D]. 曹凤华. 长春中医药大学. 2014
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