牡丹江市肿瘤医院 黑龙江牡丹江 157011
【摘 要】目的：对慢性丙型肝炎患者的丙型肝炎病毒（HCV）基因分型情况进行分析，为HCV诊断和治疗地区提供有力的依据。方法：利用门诊及住院患者血清HCV抗体阳性标本，经荧光定量PCR检测HCV RNA阳性的62例标本用基因芯片进行不同基因分型检测。结果：检测HCV感染标本62例，共检出7种基因亚型，分别为1b、6型、2a、1b+ 2a、1b+ 3a、3a和3b，其中1b占72.6%，6型占8.8%，2a占7.8%，1b+ 2a占5.9%，1b+ 3a占2.9%，3a占1.0%，3b占1.0%。结论：HCV基因型主要为1b与中国南方地区HCV基因型分布比较一致。按照年龄分组20岁以下4例，占6.45%，20～ 30岁12例，占28.6%，30～ 40岁15例，35.7%，40～ 50岁5例，占11.9%，50～ 60岁8例，占19.5%，60岁以上18例，占42.8%。青壮年和有吸毒史、外伤手术史、输注血液制品史的人群阳性率较高。
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【关键词】丙型肝炎病毒；基因芯片；基因分型
【中图分类号】R512.6+3【文献标识码】A【文章编号】1276-7808（2017）04-146-01
Analysis of Hepatitis C Virus Genotyping in 62 Cases
Abstract：Objective：To analyze the genotype of hepatitis C virus（HCV）in patients with chronic hepatitis C，and to provide a strong basis for HCV diagnosis and treatment. Methods：62 samples of HCV RNA positive were detected by fluorescence quantitative PCR. The genotypes were detected by cDNA microarray. RESULTS：A total of 62 HBV subtypes were detected，including 1b，6，2a，1b + 2a，1b + 3a，3a and 3b，of which 1b accounted for 72.6%，type 6 accounted for 8.8%，2a 7.8%，1b + 2a 5.9%，1b + 3a 2.9%，3a 1.0%，3b 1.0%. Conclusion：HCV genotype is mainly consistent with the distribution of HCV genotype in southern China. According to the age group under the age of 20 in 4 cases，accounting for 6.45%，20 to 30 years old in 12 cases，accounting for 28.6%，30 to 40 years old in 15 cases，35.7%，40 to 50 years old in 5 cases，11.9% Cases，accounting for 19.5%，over 60 years of age in 18 cases，accounting for 42.8%. Young adults and the history of drug addiction，trauma surgery history，infusion of blood products in the history of the positive rate of high population.
Key words：hepatitis C virus；gene chip；genotyping
前言：丙型病毒性肝炎的发病率比较高，非常容易造成慢性病毒性肝炎、肝硬化等疾病，而这些病变的形成与其病原丙型肝炎病毒（HCV）的某些重要生物学特性有关。我国感染丙型肝炎病毒及新发患者数是非常多的，大部分HCV患者会逐步演变为慢性感染，并根据病程轻重发展为肝硬化或肝癌。HCV病毒基因有较强的变异性，变异位点可以发生在基因组的各个区域，根据变异位点的不同将HCV分为不同型别。由于HCV基因型别不仅与疾病严重性存在相关性，而且与抗病毒治疗和肝细胞癌的发生也密切相关。
1.资料与方法
1.1一般资料
本次研究采用的是我院2015～ 2017年门诊及住院患者血清HCV抗体阳性标本，荧光定量PCR检测HCV RNA阳性的62例标本（其中男31例，女31例，年龄8～81岁）进行基因分型检测。阴性对照为10例健康体检者血清。仪器用的是ABI7300型全自动PCR扩增仪，美国1285REL#6生物安全柜，日本三洋VIP SERIES- 86℃超低温冰箱。试剂用的是丙型肝炎病毒HCV RNA荧光定量检测试剂盒，购于中山大学达安基因股份有限公司，丙型肝炎病毒基因芯片检测技术由中科院上海微系统与信息技术研究所和瑞芯生物科技有限公司提供。
1.2方法
方法用到的是HCV RNA定量检测法，医护人员严格按照丙型肝炎病毒HCV RNA荧光定量检测试剂盒说明书进行操作，先进行RNA提取；逆转录；PCR扩增及荧光检测；然后再对检测结果进行分析，HCV基因分型检测也需要严格按照HCV基因检测芯片说明书进行操作，RNA提取与逆转录；PCR扩增；HCV芯片杂交与显色。
2.结果
62例HCV RNA荧光定量检测阳性结果与HCV基因分型检测结果相符合，10例健康体检者血清检测结果均为阴性，说明基因芯片结果可靠。检测HCV感染标本62例，共检出7种基因亚型，分别为1b、6型、2a、1b+ 2a、1b+ 3a、3a和3b，其中1b占72.5%，6型占8.8%，2a占7.8%，1b+ 2a占5.9%，1b+ 3a占2.9%，3a占1.0%，3b占1.0%，1b为主要的流行型别，基因型6型已经取代2a成为第二常见亚型，混合基因型感染较多。
3.讨论
HCV是一种全球性传染病、给人类健康带来极大威胁的病原体，HCV以血液和性传播为主要传播手段，发病隐匿，症状不典型，加之公众对其认知水平较低，因此病毒的传播不易控制，患者也容易因不能及时诊断而错过治疗的最佳时机。HCV基因型主要为1b与中国南方地区HCV基因型分布比较一致。按照年龄分组20岁以下4例，占6.45%，20～ 30岁12例，占28.6%，30～ 40岁15例，35.7%，40～ 50岁5例，占11.9%，50～ 60岁8例，占19.5%，60岁以上18例，占42.8%。青壮年和有吸毒史、外伤手术史、输注血液制品史的人群阳性率较高。国内外研究表明，HCV不同的基因型对肝脏损伤的程度不同，1b型对肝脏的损伤要比其他型严重得多。HCV对干扰素的应答率也不同，Kandi等，报道HCV 1b型感染多为慢性活动性肝炎，2a型比1b型对干扰素敏感。已证明HCV的基因型能影响抗病毒治疗的效果，感染HCV基因1型或基因4型的患者对使用干扰素和病毒唑的标准治疗反应较差，至少需延长治疗期1年，而且感染基因1型和基因4型的患者比其他基因型者能更快地发展成慢性肝病。HCV是引起人类慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要病原之一。基因分型芯片法，又称基因微矩阵，这种方法是近年来分子生物学及医学诊断技术发展的重要产物，具有非常明显的优点，比如说准确性好，灵敏度高，特异性强，而且简便快速，不需要荧光标记。由于基因芯片可以一次性对大量序列进行检测分析，具有高通量、并行、快速等特点，解决了传统核酸印迹杂交技术操作繁杂、自动化程度低、检测序列少、效率低的缺点，所以在病毒学研究特别是病毒基因表达谱研究、病毒感染的诊断、病毒流行病学研究等方面有广泛应用前景。
参考文献：
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论文作者:张威威
论文发表刊物:《世界复合医学》2017年第4期
论文发表时间:2017/7/13
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