（1.达州市中心医院心内科 四川 达州 635003）
（2.四川大学华西医院心内科 四川 成都 610041）
【摘 要】目的：研究炎症介质IL-6、TNFα对高血压患者颈动脉内膜中层厚度(intima-media thickness, IMT)的影响，探讨其可能的调控机制。方法：以至少一侧颈动脉IMT≥0.9mm为颈动脉内膜中层增厚的标准，将60名高血压患者分为颈动脉IMT正常组（n=32）和增厚组(n=28)。采用逆转录-PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)方法测定单核细胞中IL-6、TNFα及PPARγ的mRNA表达。结果：(1)与颈动脉IMT正常组相比较，IMT增厚组的IL-6和TNFαmRNA表达升高 (二者P<0.001),而PPARγmRNA表达降低(P<0.001)。(2)随着IL-6和TNFαmRNA表达的升高，颈动脉IMT相应增加。（3）IL-6、TNFα的mRNA表达与PPARγmRNA的表达呈负相关(r1=-0.627，r2= -0.614，二者P<0.001)。结论：炎症介质IL-6、TNFα的表达水平可影响高血压患者颈动脉内膜中层的厚度，这一作用可能与PPARγ参与炎症的调控有关。
【关键词】炎症；颈动脉内膜中层厚度；高血压；PPARγ
【中图分类号】R544.1 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）6-0609-02
【Abstract】Objective: To study the effect of inflammatory markers IL-6, TNFα on carotid arterial intima-media thickness(IMT) in patients with hypertension, and explore the potential mechanisms of inflammatory regulation further. Methods: A total of 60 hypertensive patients were recruited. Carotid IMT≥0.9mm at least one side was defined thickened IMT, and thus all patients were assigned to normal IMT group(n=32) and thickened group (n=28), according to whether they had thickened carotid IMT or not. mRNA expression of IL-6, TNFα, PPARγ in peripheral blood monocytes were performed by means of reverse transcription-PCR(RT-PCR). Results: (1) compared to that in normal IMT group, both mRNA of IL-6 and TNFα in thickened group increased (both P<0.001), whereas mRNA of PPARγ decreased (P<0.001). (2) Carotid IMT increased with the elevation of IL-6 mRNA and TNFα mRNA. (3) Both mRNA of IL-6 and TNFα negatively correlated to that of PPARγ (r1= -0.627, r2= -0.614, respectively.Both P<0.001). Conclusions: Inflammatory markers IL-6, TNFα are involved in the thickening of carotid arterial intima-media in hypertensive patients, which may be mediated by down regulation of PPARγ.
【Key words】inflammation; carotid intima-media thickness; hypertension; PPAR gamma
颈动脉IMT是指颈动脉管腔-内膜界面与中膜-外膜界面之间的距离。许多研究表明，多种心血管疾病危险因素如年龄、吸烟、血脂异常、糖尿病以及高血压与颈动脉IMT增厚有关。研究颈动脉IMT的增厚有重要的临床意义，因为它不仅可预示全身多部位动脉粥样硬化的发生[1]，还可预测严重心脑血管疾病的发生如心肌梗死和脑卒中[2]。众所周知，动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病，单核-巨噬细胞作为主要的炎性细胞，通过分泌多种炎症介质和细胞因子等参与动脉粥样硬化的形成。颈动脉IMT增厚被认为是动脉粥样硬化的早期改变，推测其增厚过程有单核细胞及其分泌的炎症因子的参与，需进一步研究。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)是属于核受体超家族的转录因子，主要在脂肪细胞中表达，在单核细胞中也有表达，由配体激活后，除调节脂肪细胞的分化及增强胰岛素的敏感性外，还具有抗炎、调节粥样斑块中单核-巨噬细胞的功能[3, 4]等作用。有研究[5]证实PPARγ激动剂噻唑烷二酮类药物能够明显地降低2型糖尿病患者和冠心病患者的颈动脉IMT，其机制不清楚，可能与PPARγ的抗炎作用有关。故本研究通过测定高血压患者单核细胞中IL-6、TNFα、PPARγ的mRNA表达水平，来探讨炎症介质与颈动脉IMT增厚的关系及其可能的调控机制。
1 材料与方法
1.1 研究对象 本研究共纳入60名高血压患者，其中男性32例，女性28例，平均年龄为59±11岁。采用超声方法测定颈总动脉IMT。颈动脉IMT增厚定义为至少一侧颈总动脉IMT≥0.9mm，双侧颈总动脉IMT均小于0.9mm视为正常。据此,将患者分为颈动脉IMT正常组（n=32）和IMT增厚组（n=28）。
1.2 单核细胞的分离及PCR扩增 抽取患者外周血10ml，肝素抗凝，用淋巴细胞分离液分离出单核细胞。用Trizol（Invitrogen公司）按照说明书提取单核细胞的总RNA，提取后的RNA的OD260/OD280值在1.8-2.1之间。反转录合成cDNA第一链，反转录-PCR试剂盒购自大连宝生物公司。设计PCR引物序列IL-6：5’-TTCGGTCCAGTTGCCTTCT，GTACTCATCTGGACAGCTC-3’（ 扩增产物120bp）；TNFα：5’-ACGTCGTAGCAAACCACCAA，CTGGGAGTAGATAAGGGACA-3’（ 扩增产物140bp）；PPARγ：5’-GTCTCACAATGCCATCAGGTT，TTCAGCTGGTCGATATCACT-3’（ 扩增产物90bp）；内参GAPDH： 5’-CCTCAAGATCATCAGCAATG，CCATCCACAGTCTTCTGGGT-3’ （ 扩增产物141bp）。PPARγ的PCR反应条件：94℃预变性2min，94℃变性30s，51℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环后72℃延伸30s。IL-6、TNFα、GAPDH的退火温度分别为52℃、54℃、54℃，GAPDH的变性、退火、延伸为45个循环，三者的其余反应条件同PPARγ。扩增结束后,取PCR反应液5ul进行1.5%的琼脂糖凝胶电泳,80V电压下电泳40分钟，凝胶成像系统(Bio Rad)扫描成像。利用PD-Quest软件（Bio Rad）计算IL-6、TNFα、PPARγ/GAPDH的吸光度比值，并以吸光度比值分别作为各mRNA表达的相对水平。
(六)统计学方法
所有数据以表示，方差齐时采用成组t检验，不齐时采用t’检验。两变量相关分析采用Pearson相关分析。所有数据用统计软件SPSS18.0进行处理，双侧P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 一般临床资料
所有患者平均颈动脉IMT为0.8±0.3mm， IMT正常组为0.7±0.1mm，IMT增厚组为1.1±0.4mm。各组患者的一般临床资料见表1，各组之间无显著性差异。
2.2 IL-6、TNFα、PPARγ在单核细胞中的表达
与颈动脉IMT正常组相比较，IMT增厚组的IL-6和TNFαmRNA表达升高 (二者P<0.001),而PPARγmRNA表达降低(P<0.001)，差异有显著统计学意义(见图1)。随着IL-6和TNFαmRNA表达的升高，颈动脉IMT相应增加。
*与颈动脉IMT正常组相比较，IMT增厚组IL-6 mRNA的相对表达增加，P<0.001。
**与颈动脉IMT正常组相比较，IMT增厚组TNFαmRNA的相对表达增加，P<0.001。
***与颈动脉IMT正常组相比较，IMT增厚组PPARγmRNA的相对表达降低，P<0.001。
图1. IMT正常组及增厚组IL-6、TNFα和PPARγmRNA的相对表达
将IL-6、TNFα的mRNA表达与PPARγmRNA的表达作相关性分析，结果显示, IL-6和TNFα均与PPARγ呈明显负相关(r1=-0.627，r2= -0.614，二者P<0.001)。
将IL-6、TNFα、PPARγmRNA的表达与颈动脉IMT作相关性分析，结果表明，颈动脉IMT与IL-6、TNFα呈正相关（r1=0.608，r2= 0.569，二者P<0.001），与PPARγ呈负相关（r =-0.658， P<0.001）。
3 讨论
通常颈总动脉超声显像效果最佳，颈总动脉分叉处次之,颈内动脉显像最差，且颈内动脉较颈总动脉测量的IMT值具有更大的可变性，故本研究选用颈总动脉的IMT值作为颈动脉IMT的值。《中国高血压防治指南》将颈动脉IMT≥0.9mm定义为IMT增厚，并用来反映高血压患者有周围血管损害。因此本研究以左右颈总动脉任何一侧IMT≥0.9mm作为颈动脉IMT增厚的标准，并以此作为研究分组的依据。
如前所述，动脉粥样硬化的发生是一个慢性炎症的过程，最先由于内皮受损，导致脂质在内皮下沉积，并有单核-巨噬细胞浸润，吞噬脂质，形成泡沫细胞，早期病理改变表现为脂纹，颈动脉超声表现为IMT的增厚，随着病变进展，以后形成斑块。单核细胞及巨噬细胞活化后可分泌多种炎症细胞因子如IL-1、IL-6、TNFα等[6, 7]，在动脉粥样硬化的发生和发展中起着重要作用。本研究表明，IL-6、TNFα与颈动脉IMT呈正相关，高血压患者颈动脉IMT增厚时，其单核细胞中的炎症因子IL-6和TNFα的mRNA表达上调，提示炎症因子参与了颈动脉IMT的增厚过程。
PPARγ由配体激活后，可通过干预核因子-kB信号传导通路，抑制多种炎症因子如IL-1β、IL-6、TNFα的表达[6, 9]，从而发挥其抗炎作用。在本研究中，颈动脉IMT增厚组单核细胞中PPARγ的表达降低，IL-6和TNFα的表达升高，且IL-6、TNFα与PPARγ的表达负相关，提示单核细胞中炎症因子IL-6和TNFα表达水平的升高可能是由于PPARγ的表达水平降低所致；结合PPARγ与颈动脉IMT呈负相关，提示 PPARγ可能通过调控炎症因子的表达而参与了颈动脉IMT的增厚过程。因此，针对炎症因子或PPARγ进行干预，可能延缓高血压患者颈动脉IMT的增厚，从而延缓动脉粥样硬化的发生，这为临床早期干预高血压患者动脉内膜中层的变厚及动脉粥样硬化的发生提供了新视角。
参考文献：
[1]Holaj R, Spacil J, Petrasek J, et al. Intima-media thickness of the common carotid artery is the significant predictor of angiographically proven coronary artery disease[J]. Can J Cardiol, 2003,19(6):670-6.
[2]O'Leary DH, Polak JF, Kronmal RA, et al. Carotid-artery intima and media thickness as a risk factor for myocardial infarction and stroke in older adults. Cardiovascular Health Study Collaborative Research Group. N Engl J Med, 1999,340(1):14-22.
[3]Ricote M, Li AC, Willson TM, et al. The peroxisome proliferator- activated receptor gamma is a negative regulator of macrophage activation[J]. Nature, 1998,391(6662):79-82.
[4]Marx N, Sukhova G, Murphy C, et al. Macrophages in human atheroma contain PPARgamma: differentiation-dependent peroxisomal proliferator activated receptor gamma(PPARgamma) expression and reduction of MMP-9 activity through PPARgamma activation in mononuclear phagocytes in vitro[J]. Am J Pathol, 1998,153(1):17-23.
[5]Langenfeld MR, Forst T, Hohberg C, et al. Pioglitazone decreases carotid intima-media thickness independently of glycemic control in patients with type 2 diabetes mellitus: results from a controlled randomized study[J]. Circulation, 2005,111(19):2525-31.
[6]Jiang C, Ting AT, Seed B. PPAR-gamma agonists inhibit production of monocyte inflammatory cytokines[J]. Nature, 1998,391(6662):82-6.
[7]Chawla A, Barak Y, Nagy L, et al. PPAR-gamma dependent and independent effects on macrophage gene expression in lipid metabolism and inflammation[J]. Nat Med, 2001,7(1):48-52.
[8]Yki-Jarvinen H.Thiazolidinediones[J].N Engl J Med,2004,351(11):1106-18.
论文作者:冯达应, 陈晓平
论文发表刊物:《河南中医》2015年6月供稿
论文发表时间:2015/10/19
标签：颈动脉论文; 动脉论文; 炎症论文; 增厚论文; 细胞论文; 因子论文; 内膜论文; 《河南中医》2015年6月供稿论文;