樊晓晖, 杨海波, 何先保, 黄企光, 黎肇炎[1]2001年在《桂北五步蛇金属蛋白酶原基因800bp片段的克隆和序列分析》文中提出目的 :扩增桂北五步蛇金属蛋白酶原基因 ,并对其进行序列分析。方法 :从广西桂北山区五步蛇毒腺中抽提蛇毒总RNA,采用一步法 (RT- PCR和 PCR在同一试管内进行 )扩增金属蛋白酶原基因 ,对其进行电泳检测 ,得到 3条特异的 DNA条带 ,大小分别为 1.5 kb、 1.3kb和 80 0 bp,利用平端连接方法将 80 0 bp克隆至 p GEM- T载体 ,挑选白色菌落 ,用酶切和 PCR法对其进行鉴定。提取阳性菌落进行测序并推导编码的氨基酸序列。结果 :信号肽和前肽和已报道的皖南五步蛇金属蛋白酶很相似 ,同源性为 97.9% ,但仅含有部分金属蛋白酶成熟肽的氨基酸序列。结论 :推测此 80 0 bp片段为广西五步蛇金属蛋白酶原基因的一部分。
杨海波, 樊晓晖, 侯小琼, 黄企光, 黎肇炎[2]2004年在《桂北五步蛇金属蛋白酶原基因1137bp片段的克隆和序列分析》文中指出目的 :克隆桂北五步蛇金属蛋白酶原基因 ,并对其进行序列分析。方法 :采用一步法抽提广西桂北山区五步蛇蛇毒总RNA,经 RT- PCR扩增纤溶酶金属蛋白酶原基因 ,将扩增产物克隆至 p GEM- T Easy载体 ,挑选白色菌落 ,用酶切和 PCR法对其进行鉴定。直接利用纯化 PCR产物或提取阳性菌落进行测序并推导其编码的氨基酸序列。结果 :RT- PCR和 PCR扩增得到一约 1137bp产物 ,并将其克隆及测序。结论 :和已报道的皖南五步蛇纤溶酶金属蛋白酶氨基酸序列相比较 ,二者之间有 91%的同源性
樊晓晖, 杨海波, 何先保, 黄企光, Franc, Gubensek[3]2000年在《桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因的克隆和序列分析》文中研究说明目的 :克隆桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因 ,并对其进行序列分析。方法 :从桂北五步蛇毒腺中抽提总 RNA,采用一步法 (RT- PCR和 PCR在同一管内进行 )扩增出纤溶酶金属蛋白酶基因 ,利用平端连接的方法将 PCR扩增产物克隆至p GEM- T Easy载体 ,挑选白色菌落 ,用酶切和 PCR法对其进行鉴定 ,直接利用纯化 PCR产物进行测序或提取阳性菌落进行测序。结果 :RT- PCR和 PCR扩增得到一 6 0 0 bp产物 ,并被克隆及测序。结论 :该实验产物和已报道的皖南五步蛇纤溶酶金属蛋白酶氨基酸序列相比较 ,有 90 .6 %的同源性 ,这为进一步研究该产物的表达 ,以及表达产物的活性提供条件。
杨海波[4]2001年在《桂北五步蛇金属蛋白酶基因的克隆和序列分析》文中研究指明目的：克隆桂北五步蛇金属蛋白酶及酶原基因，并对其进行序列分析。 方法：从桂北五步蛇毒腺中抽提总RNA，利用不同的引物，采用一步法（RT-PCR和PCR在同一管内进行）扩增出不同的DNA条带，利用平端连接的方法将PCR扩增产物克隆至pGEM-T Easy 载体，转化大肠杆菌JM109，挑选白色菌落提取质粒，用PCR对其进行鉴定，直接利用纯化PCR产物或提取阳性菌落质粒进行测序。 结果：其中一对引物扩增得到一600 bp产物；另一对引物扩增得到叁条特异性的DNA条带，大小分别为1.5 Kb、1.3 Kb和800 bp，将600 bp 和800 bp DNA进行克隆及测序，并推导编码的氨基酸序列。 结论：600 bp产物和已报道的皖南五步蛇纤溶酶金属蛋白酶氨基酸序列相比较，有90.6%的同源性；800 bp产物中信号肽及前肽和已报道的皖南五步蛇金属蛋白酶很相似，同源性为97.9%，但仅含有部分金属蛋白酶成熟肽的氨基酸序列，推测此片段为广<WP=6>西五步蛇金属蛋白酶原基因的一部分。
杨海波, 樊晓晖, 侯小琼, 黄企光, 黎肇炎[5]2003年在《桂北五步蛇金属蛋白酶原基因1200 bp片段的克隆和序列分析》文中研究表明五步蛇含有丰富的与血液凝固和纤溶作用有关的蛋白水解酶,根据其结构不同,主要分为丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶,类凝血酶属于前者,后者如纤溶酶属于金属蛋白酶家族。80年代末以来,随着部分蛇毒出血毒素氨基酸序列的测定和生化性质的深入研究,发现大部分出血毒素都是含锌金属蛋白酶,其特点是含有一个结合锌离子的保守区域HEXXHXXGXXH,为金属蛋白酶的活性中心。
参考文献：
[1]. 桂北五步蛇金属蛋白酶原基因800bp片段的克隆和序列分析[J]. 樊晓晖, 杨海波, 何先保, 黄企光, 黎肇炎. 广西医科大学学报. 2001
[2]. 桂北五步蛇金属蛋白酶原基因1137bp片段的克隆和序列分析[J]. 杨海波, 樊晓晖, 侯小琼, 黄企光, 黎肇炎. 广西医科大学学报. 2004
[3]. 桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因的克隆和序列分析[J]. 樊晓晖, 杨海波, 何先保, 黄企光, Franc, Gubensek. 广西医科大学学报. 2000
[4]. 桂北五步蛇金属蛋白酶基因的克隆和序列分析[D]. 杨海波. 广西医科大学. 2001
[5]. 桂北五步蛇金属蛋白酶原基因1200 bp片段的克隆和序列分析[C]. 杨海波, 樊晓晖, 侯小琼, 黄企光, 黎肇炎. 广西微生物学会2003年学术年会论文集. 2003