河北北方学院附属第一医院 075000
【摘 要】提取于姜黄属植物的姜黄素具有抗癌谱较广，而且毒副作用小的特点，其对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的抑制作用非常明显，本文通过试验对此进行研讨。具体地，本文首先对试验相关资料和研究方法进行简介，而后对试验结果进行分析，最后进行分析讨论。
【关键词】姜黄素；乳腺癌细胞株MCF-7细胞；细胞凋亡
姜黄素，提取于姜黄属植物的根茎，是中药姜黄的主要活性成分，是一种酚类色素。姜黄素用于肿瘤的预防和治疗是业界一个重要的研究课题，本文主要针对姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡进行研究。文中实验依托于体外培养的人乳腺癌细胞株MCF-7细胞，实验目的为研究姜黄素对该细胞株的抑制作用，和它诱导细胞凋亡的机制。
一、资料和研究方法的简介
（一）资料
1.姜黄素：由Sigma公司提供。
2.人乳腺癌细胞株MCF-7细胞：由中科院上海细胞生物学研究所细胞库。
3.培养基：ＲＰＭＩ－１６４０培养粉。采用三蒸水配制，并添加百分之十的小牛血清、同时加入青、链霉素各１００μｌ/ｍｌ，采取无菌过滤，４℃备用。
4.ＭＴＴ：由Sigma公司提供。
5.其他：ＴｒｉＰｕｒｅ试剂盒；ＤＮａｓｅ－ｆｒｅｅ ＲＮａｓｅ；ＲＴ－ＰＣＲ ｋｉｔ；ａｎｔｉ－Ｂａｘ/Ｂｃｌ－２ 抗体。
（二）研究方法
第一，采用四甲基偶氮唑盐MTT比色法来对姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的增殖作用进行研究。首先，取对数生长期的细胞，并采用百分之零点零二的ＥＤＴＡ消化，制备２×１０４/μｌ细胞悬液。在９６孔板上进行接种，１００μｌ孔，置放于三十七摄氏度，在百分之五二氧化碳培养箱中孵育过夜。制备两组溶液进行对照：姜黄素组别每一份加入不同浓度的姜黄素，浓度分别是２５；５０；１００；２００；４００μM。对照组中，放入体积相同的培养基。采用酶标仪在５７０纳米处对OD值进行检测。抑制率的计算公式表示为：抑制率＝（１－加药组细胞平均吸光组/对照组细胞平均吸光组）×１００％。
第二，姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞凋亡率和细胞周期变化的影响的研讨。利用处在对数生长期的细胞，调制成１×１０６/ｍｌ，等待细胞出现贴壁，将２０μM的姜黄素加入溶液，对对照组不进行任何处理。定时对细胞进行收集，时间分别是２４小时、４８小时、７２小时。采用PI对细胞的DNA染色，并对DNA的含量和细胞周期进行总结归纳。
第三，检测姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF－７细胞的诱导凋亡作用。依照Aｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ Ｋｉｔ对细胞进行处理，并通过FCM对早期的细胞调往情况进行检测。
第四，检测姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF－７细胞Ｂａｘ/Ｂｃｌ－２蛋白水平的作用。采用ＢＣＡ法进行人乳腺癌细胞株MCF－７细胞Ｂａｘ/Ｂｃｌ－２蛋白的测定。具体方法是取总蛋白相等的样品行百分之十SDS－PAGE电泳，之后，电转移到PV DF膜上，采用百分之十的脱脂牛奶进行封闭，而后加入一抗，在室温条件下进行孵育，孵育时间为两个小时。用ＴＢＳ溶液进行洗涤，洗涤三次，每次持续十分钟，而后加入二抗，在室温条件下进行孵育，孵育时间为两个小时。加入ECL显色，将β－ａｃｔｉｎ作为内参考，对光密度积分值进行分析。
（三）对实验数据的统计学处理
采用ｔ检验，Ｐ小于零点零五有显著差异。
二、试验结果分析
（一）姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF－７细胞生长的抑制作用分析
试验获取结果如下图：
同浓度不同时间姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF－７细胞抑制率（％）如下：
（四）姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF－７细胞Bax、Ｂｃｌ－２基因蛋白表达的影响
通过试验可知，姜黄素（１５μM）对于Bax的基因表达起到加强作用，同时，可以对Ｂｃｌ－２基因蛋白进行抑制。此外，蛋白表达和ｍＲＮＡ的水平是相符的。
三、有关讨论
通过试验可知，姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF－７细胞存在比较明显的增殖抑制作用，经姜黄素作用，人乳腺癌细胞株MCF－７细胞出现了非常明显的凋亡峰，这种现象对姜黄素可以抑制人乳腺癌细胞株MCF－７细胞，进而引起肿瘤细胞的凋亡的研究目标是一致的，因此，可以作为一种抗肿瘤药物进行广泛推广运用。
参考文献：
[1]王雪莉，钱翔，谢振华等.基于微流控芯片的姜黄素诱导MCF-7细胞凋亡的研究[J].北京生物医学工程，2011，30（6）：557-561.
[2]杨光，杨宇，曾宪阳等.姜黄素协同阿霉素抑制乳腺癌细胞生长的作用及其机制[J].武警医学，2013，24（6）：474-476，479.
作者简介：
1赵轶峰 河北北方学院附属第一医院 075000。
2王晓元，男，1983年，8月汉族，研究生，河北张家口，主治医师，河北北方学院附属第一医院胃肠肿瘤外科。
3黄迪，男，1985.11。汉族。研究生河北张家口。主治医师，河北北方学院附属第一医院胃肠肿瘤外科。
4李曙光，男，1968.10.汉族，籍贯唐山。博士研究生。主任医师。河北北方学院附属第一医院胃肠肿瘤外科。
5高晓斌，男。1982年5月。汉族，籍贯河北张家口。硕士研究生。主治医师。河北北方学院附属第一医院肝胆外科。
基金项目：河北省卫生厅科研，项目代码：20150468，项目名称：姜黄素作用Wnt信号通路诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡研究。
论文作者:赵轶峰,王晓元,黄迪,李曙光,高晓斌
论文发表刊物:《航空军医》2016年第19期
论文发表时间:2016/10/21
标签：姜黄论文; 细胞株论文; 细胞论文; 乳腺癌论文; 河北论文; 对人论文; 抑制论文; 《航空军医》2016年第19期论文;