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摘要：目的：建立一种同时测定唇齿清胃丸中黄芩苷和盐酸小檗碱含量的高效液相色谱分析方法。方法：以Kromasil100-5C18柱（4.6mm×150.0mm，5μm）为色谱柱；以乙腈为流动相A，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，采用梯度洗脱；检测波长278nm，柱温30℃，流速为1.0ml/min。结果：盐酸小檗碱进样量在0.0124～0.3100μg，黄芩苷进样量在0.0217～0.5425μg范围内有良好的线性关系，平均回收率分别为99.5%、99.8%，RSD分别为0.94%、0.85%（n=6）。结论：该方法准确可靠专属性强、结果稳定，重复性好。
关键词：唇齿清胃丸；盐酸小檗碱；黄芩苷；高效液相色谱法
一、仪器与试剂
1、仪器
采用岛津LC-20AT型高效液相色谱仪（包括LC-AT型紫外检测器，LCsolution色谱工作站），CPA225D电子分析天平（德国赛多利斯科学仪器有限公司），9860A型超声波清洗器（费纳米科技发展有限公司）。
2、试剂
黄芩苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110715-201318，纯度93.3%），盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110713-201212，纯度86.7%），唇齿清胃丸（长春人民药业集团有限公司，批准文号：国药准字Z22021094，批号：20130301、20130402、20130406），乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。
二、方法与结果
1、色谱条件
色谱柱：Kromasil100-5C18柱（4.6mm×150.0mm，5μm）；流动相：以乙腈为流动相A，以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，采用梯度洗脱：0～10min，A-B（21：79）；10～30min，A-B（33：67）；检测波长278nm，柱温30℃，流速1.0ml/min；在此色谱条件下，盐酸小檗碱和黄芩苷之间以及与其他相关邻杂质峰的分离度均符合要求（R＞1.5），理论板数以黄芩苷峰计应不低于6000。
2、溶液的制备
2.1 对照品溶液的制备
精密称取黄芩苷对照品21.7mg与盐酸小檗碱对照品12.4mg，分别置100ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得黄芩苷与盐酸小檗碱对照品贮备液。精密吸取黄芩苷与盐酸小檗碱对照品贮备液各1ml置同一10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml黄芩苷0.0217mg、盐酸小檗碱0.0124mg的混合对照溶液。
2.2 供试品溶液的制备
取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，精密称取0.3024g，置具塞锥形瓶中，加入70%乙醇50ml，称定质量，超声处理（功率260W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液经0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液[1]。
2.3 阴性对照液的制备
按处方比例称取黄芩苷和盐酸小檗碱以外的药材，按照处方制备工艺制备缺黄芩苷和盐酸小檗碱的阴性样品。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆按照供试品溶液的制备方法操作，得缺黄芩苷、盐酸小檗碱的阴性对照溶液。
3、方法学考察
3.1 系统适应性实验
在2.1项下的色谱条件对供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液进行分析，可以看出，阴性样品色谱图上与黄芩苷和盐酸小檗碱对照品相同保留时间处无色谱峰出现，对供试品测定无干扰。
3.2 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液1、5、10、15、20、25μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图并测定峰面积积分值，以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y）计算回归方程、相关系数和线性范围，分别得回归方程为：黄芩苷Y=80049.3X－10440.9，r=0.9996，盐酸小檗碱Y=47036.4X－14883，r=0.9999。实验结果表明，黄芩苷进样量在0.0217～0.5425μg，盐酸小檗碱进样量在0.0124～0.3100μg范围内有良好的线性关系。
3.3 精密度实验
精密吸取对照品溶液10μl，重复进样6次，记录色谱图，按峰面积计算，黄芩苷和盐酸小檗碱的RSD分别为0.46%、0.57%，表明仪器精密度良好。
3.4 重复性实验
取同一批号样品（批号为20130301）适量，按2.2项下方法平行制备6份供试品溶液，在确定的色谱条件下进行分析，黄芩苷的RSD为0.63%，盐酸小檗碱的RSD为0.72%，表明该方法重复性良好。
3.5 稳定性实验
取同一供试品溶液10μl（批号为20130301）按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24h时进行测定，以峰面积计算，结果黄芩苷与盐酸小檗碱的RSD分别为0.32%、0.45%，表明24h内供试品溶液基本稳定[2]。
3.6 加样回收率试验
取已测定黄芩苷、盐酸小檗碱的供试品（批号20130301，黄芩苷含量为5.3678mg/g，盐酸小檗碱含量为1.5114mg/g）6份，每份0.15g，置具塞锥形中，分别精密加入黄芩苷对照品贮备液4ml和盐酸小檗碱对照品贮备液2ml，按2.2项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，计算回收率。
4、样品含量测定
取3批样品，按2.2项下制备供试品溶液，进样分析，记录色谱图，采用外标峰面积法计算样品中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量。
三、讨论
1、检测波长的选择
以甲醇为溶剂，分别在200～400nm波长范围内扫描黄芩苷与盐酸小檗碱的紫外吸收光谱图，结果黄芩苷在274nm有最大吸收，盐酸小檗碱在266nm有最大吸收。但在278nm处有等吸收点，所以本实验选择278nm作为检测波长，黄芩苷与盐酸小檗碱均有较好的灵敏度，且分离度良好。
2、提取溶剂的选择
提取样品主成分时分别采用30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇与乙醇作为溶剂，对4种溶剂的提取率进行比较，研究结果表明乙醇含量无影响，故选70%乙醇作为提取溶剂。
3、提取时间的选择
样品分别超声处理10、20、30、40min，测定黄芩苷与盐酸小檗碱，结果超声30、40min含量无差异，故选择超声处理30min。3.4溶剂用量的选择取样品分别加入70%乙醇25、50、100ml，制备供试品溶液，测定黄芩苷与盐酸小檗碱，结果溶剂用量50、100ml含量无差异，故选用50ml作为提取溶剂。
参考文献：
[1]李妍，宋舒暖，李留法，王中彦，莫凤奎.高效液相色谱法同时测定清新灵微丸中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量[J].时珍国医国药，2009（11）：2773-2774.
[2]刘阿静.高效液相色谱法测定清热类制剂中有效成分含量的方法研究[D].延安大学，2013.
论文作者:李翠娟,罗杰,梁佳易
论文发表刊物:《健康世界》2015年5期供稿
论文发表时间:2015/10/23
标签：黄芩论文; 盐酸论文; 小檗论文; 溶液论文; 色谱论文; 乙醇论文; 批号论文; 《健康世界》2015年5期供稿论文;