轩昆[1]2001年在《犬恒牙牙根发育过程中相关调控基因表达和细胞凋亡的研究》文中进行了进一步梳理牙根发育是牙齿发育后期的重要阶段。牙根发育主要受上皮组织与间充质组织间有序的相互作用的调控，目前有关此调控的分子机制尚未十分明确，但可以肯定的是一些生物分子（如生长因子、转录因子、凋亡因子、细胞外基质蛋白和细胞膜表面成分等）在时限、空间、活性强度等方面协调作用决定其进程。由于恒牙牙根发育主要是后天性的，其发育过程有其独自的特点。同源异形盒基因的MSX-1/-2是一类特殊的转录因子，对调控胚胎发育中许多组织器官的形态发育模式有重要的生理意义。骨形成蛋白BMP-3/-4/-7在牙齿发育过程中既是生长因子又是生物信号分子。在口腔发育生物学方面，目前已经证实细胞凋亡在个体的胚胎发育、组织分化及维持机体的内环境稳定中起着重要作用。但有关牙根发育的分子调控及细胞凋亡生理作用的研究国内外未见报道，为此在本研究中我们选择处于恒牙牙根发育时期的犬为研究对象，利用原位杂交技术和TUNEL法观察同源异形盒基因的MSX-1/-2，骨形成蛋白BMP-3/-4/-7在牙根不同发育阶段犬年轻恒牙牙髓、牙周组织、牙槽骨、牙囊组织中的生理时空表达变化，以及处于不同牙髓状态下上述组织中细胞凋亡的发生，初步探讨MSX-1/-2及BMP-3/-4/-7在正常年轻恒牙牙根发育过程中的生理调控作用；及在牙髓炎症状态和治疗状态下年轻恒牙牙根发育过程中细胞凋亡的生理意义。希望能够以此为牙根生理性发育调控机制的诠释和根尖诱导成形术实施提供新的的实验依据。主要研究内容及结果如下： 1. 犬恒牙牙根发育过程中相关调控基因表达的研究 本研究采用原位杂交检测技术，观察MSX-1/-2及骨形成蛋白BMP-3/-4/-7在正常年轻恒牙牙根发育过程中的时空表达，初步探讨其在牙根发育中的生理意义。结果表明： 1.1 MSX1在根方牙乳头、成牙本质细胞、成牙骨质细胞、牙囊组织细胞、牙周膜及牙槽骨组织中有阳性表达。提示转录因子MSX1不仅调控根区成牙本质 第四军医大学硕士学位论文 细胞的分化，而且参与调控上皮根鞘细胞与牙囊细胞相互作用和牙槽骨的塑形 改建。 1．2 MSXZ在牙根发育早期上皮隔内侧附近的牙乳头细胞及上皮根鞘细胞 有表达，提示其参与牙根发育的启动信号调控和调控牙源性间充质细胞的凝聚、 分化；在牙根发育中、后期复层结构的成牙本质细胞层及上皮根鞘有阳性信号， 推测其启动多余的成牙本质细胞、前成牙本质细胞、牙乳头细胞和上皮根鞘细 胞的程序性死亡；此外在成牙骨质细胞、牙槽骨组织中也有表达，提示MSXZ 可促进牙骨质形成和牙槽骨塑形。 1．3犬恒牙牙冠基本发育完成后，作为牙根发育“生发中心” 的颈环处 上皮根鞘细胞仅有BMP－7阳性信号，故可推测BMP－7是牙根发育的启动信号分 子，另外在牙根发育中期还在分泌期的成牙骨质细胞和成牙本质细胞中表达， 可认为BMP－7促进牙骨质和牙本质基质的分泌；BMP－3阳性信号在牙根发育早 期位于包绕恒牙胚的牙囊组织中，之后其转移到无细胞性牙骨质表面的成牙骨 质细胞和牙周膜细胞中，提示BMP－3可诱导牙囊细胞分化为成牙骨质细胞和牙 周组织细胞；BMP－4阳性信号发育早期主要位于成牙本质细胞、前成牙本质细 胞、颈环上皮隔内侧的牙乳头细胞、根周牙槽骨组织的成骨细胞，提示BMP－4 可诱导牙乳头细胞分化为成牙本质细胞，对分泌期的成牙本质细胞有引导形成 牙本质基质的作用，此外通过诱导成骨细胞的分化促进牙槽骨的发育，而在牙 根发育后期根尖1／3细胞性牙骨质表面的成牙骨质细胞也有较弱BMP－4阳性表 达信号，故可推测形成细胞性牙骨质表面的成牙骨质细胞来源于骨源性前体细 胞，而洲P－4是诱导剂。 2．犬恒牙牙根发育过程中的细胞凋亡研究 本研究采用TUNEL标记法，观察牙根发育过程中生理、病理以及治疗条件 下的犬恒牙牙根各组织中凋亡细胞的分布情况，探讨细胞凋亡在牙根发育过程 中的意义。 ＋ 第四军医大学硕士学位论文 2．1正常牙髓状态下，包裹恒牙胚的牙槽骨组织表面大量发生了细胞凋亡，提示在牙槽骨改建及塑形的过程中牙槽骨内的细胞成分包括骨细胞、成骨细胞以及丧失功能的破骨细胞通过细胞凋亡途径而被机体清除掉。当牙本质形成到一定程度后，机体通过细胞凋亡途径控制分泌期的成牙本质细胞、牙乳头细胞的数量从而减慢牙本质基质的沉积速度。另外牙根开始发育后，上皮根鞘在牙骨质表面发生破裂，而后逐渐移行到牙周组织中形成上皮剩余。而细胞凋亡在其结构及附近组织中的存在，提示细胞凋亡在清除牙根发育的暂时性的生发中心－上皮根鞘中有重要的生理意义，同时调节具有分化潜力的外胚?
程敏[2]2008年在《牙发育过程中TGF-β_1、BMP-2、bFGF和E-Cadherin的表达及相关技术研究》文中提出目前国内外对牙发育调控机制的研究已由细胞水平深入到了分子水平。一些生物分子以不同的时空表达模式在分子水平对牙发育的过程进行调控,主要包括信号分子、信号分子受体和转录因子等。这些分子形成了调节牙发育的信号网络系统。学者们对该信号网络系统进行了较多的研究工作,然而迄今为止有关此调控的分子机制尚不十分清楚。对牙发育机制方面的研究,常选用动物牙胚作为研究器官发育、形态发生和细胞分化的经典模型。以往的研究多选用大鼠、小鼠和犬的牙胚作为实验模型,近年来逐渐有报道采用人牙胚作为研究对象,但报道较少。本实验分别收集了人牙胚、出生后乳鼠及犬乳恒牙替换期组织学标本,常规切片制片,对牙胚发生、发育过程作系统观察,采用免疫组织化学方法,研究TGF-β1、BMP-2、bFGF、E-Cadherin四种生物分子在牙胚发育过程中的时空表达模式及可能的调控机制。本研究结果表明;TGF-β1、BMP-2、bFGF、E-Cadherin在牙胚发育的不同时期均有不同程度的时空表达,且相互之间存在着一定的时间和空间上的一致性和种属之间的一致性。它们在牙胚发育的早期及晚期均有不同程度的表达,说明在牙冠、牙根及牙周组织的发育中均参与了牙胚组织细胞增殖、分化及硬组织的矿化,参与了牙胚发育的分子调控。同时,本文还对口腔硬组织切片和组织化学染色及其应用进行了研究。针对牙和骨骼硬脆致密,难切易碎,牙龈、牙周膜和牙髓易受损伤分离及常规切片所出现的问题,对制片技术和染色方法进行了改良。改良方法制作的牙齿、骨骼、牙及牙周组织切片和常规HE染色,镜检各种组织和细胞形态结构清晰,切片质量和染色效果优良。本研究弥补了国内目前尚无口腔硬组织切片组织化学染色的空白。目前,改良的组织化学染色法,已逐渐用于牙发育、骨折愈合、骨缺损修复、颞下颌关节损伤、腭裂、正畸、种植、口腔材料和药物等实验研究,并取得了满意结果。
陈丽萍[3]2008年在《犬乳恒牙替换期骨保护素表达的研究》文中研究指明随着恒牙胚的发育,乳牙到一定时期牙根逐渐吸收,导致牙冠脱落,由萌出的恒牙所代替的过程称为乳恒牙替换。此过程是多因素、多细胞参与的复杂又严密的生理过程,目前的研究方向主要为乳牙根吸收和恒牙胚的发育。现已证实,OC与OD是参与吸收乳牙根、牙槽骨等组织的重要功能细胞,并为恒牙胚的发育和萌出创建通道。但其作用机制尚不清楚,因此对OC的深入研究为进一步探讨乳恒牙替换机制有着重要的意义。骨保护素(OPG)是近年来骨代谢研究领域新发现的一种可溶性肿瘤坏死因子受体,具有抑制OC形成、分化和增加骨密度等功能,是抑制骨吸收的关键因子。在骨骼,OPG主要由成骨细胞和骨髓基质细胞产生。研究已证实,成骨细胞分泌OPG与其配体OPGL的结合可阻断OC发生的RANKL/RANK信号通路,从而抑制破骨细胞前体细胞的增殖、分化、融合和成熟OC的激活。另外,Hakeda等发现OPG可通过结合OC表面F-肌动蛋白而直接抑制成熟OC的骨吸收活性。目前,国内外文献中未见有OPG表达于OC的报道,而OPG在乳恒牙替换过程中所起作用的研究也未见报道。根据OC来源于造血细胞,由单个核前体细胞融合而成,而文献中OPG高表达于单核细胞,推断OC有可能表达OPG,进行自我调节,抑制其本身的分化。为了探讨OPG在乳恒牙替换期的OC和OD中有无表达,本研究一方面将犬乳恒牙替换过程分为乳牙根稳定期、乳牙根吸收期、恒牙列期叁个阶段,采用IHC和ISH的实验方法,分别从蛋白和mRNA水来检测OPG在乳牙牙根、牙槽骨中的OD、OC和恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞中的表达情况,初步探讨了OPG在犬乳恒牙替换过程中可能的作用。另一方面参考了OC体外培养的文献,用淋巴分离液从人外周血细胞中分离出PBMC进行培养,培养液中加入1,25(OH)2 D3、M-CSF、RANKL对12d后出现的OLC采用IHC和ISH实验方法,检测了OPG在体外诱导培养的OLC中的表达情况,并分析了OPG对OLC形成和功能的调节作用。主要研究内容及结果如下:第一部分犬乳恒牙替换期OPG表达的研究1.犬乳牙牙根稳定期:犬乳牙牙根尚未发生生理性根吸收,乳牙根完整,乳牙根周围牙槽骨未见吸收陷窝。恒牙胚处于牙冠发育阶段,恒牙胚牙本质、牙釉质基质开始形成。此时恒牙胚周围牙槽骨处于改建期,可见少量OC位于牙槽骨吸收陷窝内。此期牙槽骨的OC、OB OPG IHC及ISH染色阳性,提示一方面OB分泌OPG,通过结合OPGL负调节OC的分化。另一方面OC可能合成和分泌OPG,通过自我调节,直接参与抑制其自身的分化与成熟,参与犬乳牙根稳定期的骨质改建。恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞OPG IHC及ISH染色也为阳性,推测OPG可能参与恒牙胚的发育过程。2.犬乳牙牙根吸收期:犬乳牙牙根发生生理性吸收,乳牙根面可见多数吸收陷窝,呈蚕食状,陷窝中可见多核OD。牙囊周围及接近牙胚的牙槽骨骨质吸收活跃,陷窝内可见多核OC,恒牙胚冠部牙本质、牙釉质进一步形成和矿化。此时可见OPG在乳牙根吸收面的OD、牙槽骨中的OC、OB IHC染色阳性,其中OC和OB染色灰度值较稳定期显着降低(P<0.05),提示此期OPG蛋白表达增强,以防止牙槽骨和乳牙根的过度吸收;OC/OD、OBISH染色阳性,且OC染色灰度值显着低于稳定期(P<0.05),提示此期OC合成、分泌OPG的功能代偿性增强。恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞OPG IHC及ISH染色也为阳性,提示OPG参与了恒牙胚的发育。3.犬恒牙列期:乳牙脱落,恒牙萌出。牙槽骨OC和OB OPG IHC及ISH染色弱阳性,染色灰度值均显着增加(P<0.05),提示此期OC和OB OPG合成、分泌量明显减少,牙槽骨处于骨质改建较弱的时期。第二部分体外培养破骨细胞样细胞OPG表达的研究分别采用IHC及ISH方法,观察体外培养OLC OPG表达的情况。用倒置显微镜和HE染色观察,3因子诱导培养PBMC 6d即可见一些细胞体积增大,12d后可见多核细胞形成,其中个别细胞体积巨大,胞核数目3-7个。取原代培养12d后的细胞爬片进行OC特征性染色鉴定,出现抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的多核细胞,并且在与细胞共同培养的骨片上出现吸收陷窝,即为OLC。取所培养的OLC进行OPG IHC及ISH染色,结果均为阳性,证实体外培养人OLC中有OPG蛋白和mRNA的表达。总之,本研究观察到OPG表达于乳恒牙替换过程中的OC和体外培养的OLC中,可能通过间接、直接作用负调节OC和OD的分化和功能,使牙槽骨和乳牙根硬组织吸收处于严密控制之下,防止出现快速吸收的现象。
孙华[4]2007年在《犬乳恒牙替换期血管内皮生长因子的表达及意义》文中研究表明动物牙齿及颌面部生长发育的重要阶段包括乳恒牙替换,其中有乳牙根、牙槽骨的吸收,恒牙胚的发育和恒牙萌出等一系列复杂的生理过程[1]。乳恒牙替换是儿童口腔中的正常生理现象,其中萌出通道的形成,牙槽骨的改建以及乳牙根的吸收,是牙齿正常萌出和替换的先决条件,在这些过程中破骨细胞(OC)起着重要作用,它不仅参与吸收乳牙根、牙槽骨等组织,还为恒牙胚的发育和萌出开辟道路[2]。但其机制至今不明,因此研究破骨细胞的激活、分化、成熟及表达等生物学特性对了解和调控乳恒牙的萌出有重要意义。血管内皮生长因子(VEGF)是由血小板、巨核细胞、内皮细胞和成骨细胞或肿瘤细胞合成和分泌的多功能细胞素,是一种由亚基内及亚基间二硫键交联形成的同源二聚体糖蛋白。VEGF是一类高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素,具有促进内皮细胞增殖、血管生成、增加血管通透性以及血管维持等功能。VEGF既是主要的血管形成因子,又是骨生长因子,与骨代谢关系密切。VEGF能明显提高大鼠成骨细胞活性、增强其迁移、增殖、分化并加速其骨形成[3]。VEGF可促进破骨细胞分化,维持骨髓功能,且达到类似于巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的作用。许多研究表明,VEGF在骨代谢过程中协调着骨细胞的消长、细胞外基质的改建、血管增生及骨形成、骨吸收间的关系。本研究采用细胞培养、免疫组织化学、原位杂交、图像分析等方法,观察了体外培养大鼠破骨细胞中VEGF表达情况,以及犬乳恒牙替换过程中乳牙牙根稳定期、乳牙根吸收期、恒牙列期叁个阶段的乳牙牙根、牙槽骨中的破牙细胞、破骨细胞和恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞中VEGF的表达情况。初步探讨VEGF在乳恒牙替换期和体外培养破骨细胞中所起的作用。主要研究内容及结果如下:第一部分犬乳恒牙替换期VEGF表达的研究分别采用免疫组化和原位杂交方法,观察犬乳牙根稳定期、乳牙根吸收期和恒牙列期中VEGF的表达染色情况。1.犬乳牙牙根稳定期:犬乳牙牙根尚未发生生理性根吸收,乳牙根周围牙槽骨未见吸收陷窝。恒牙胚处于牙冠发育阶段,恒牙胚牙本质、牙釉质基质开始形成。此时VEGF在牙槽骨的破骨细胞、成骨细胞免疫组化及原位杂交染色阳性,提示VEGF可能参与破骨细胞的分化、成熟,参与犬乳牙牙根稳定期的骨质改建。恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞VEGF免疫组化及原位杂交染色也为阳性,推测VEGF可能参与恒牙胚的发育过程。2.犬乳牙牙根吸收期:犬乳牙牙根发生生理性吸收,乳牙根面可见多数吸收陷窝,呈蚕食状,陷窝中可见多核破牙细胞。牙囊周围及接近牙胚的牙槽骨陷窝可见多核破骨细胞。恒牙胚冠部牙本质、牙釉质进一步形成和矿化。此时可见VEGF在乳牙根吸收面的破牙细胞、牙槽骨中的破骨细胞、成骨细胞、恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞免疫组化染色阳性,其中破骨细胞染色为强阳性,提示此期VEGF蛋白表达增强,以促进牙槽骨和乳牙根的吸收。破骨/破牙细胞原位杂交结果为强阳性,成骨细胞、恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞原位杂交结果阳性,提示此期破骨细胞分泌、合成VEGF功能增强。3.犬恒牙列期:乳牙脱落,恒牙萌出。牙槽骨破骨细胞免疫组化及原位杂交染色弱阳性,染色灰度值均显着增加,提示破骨细胞VEGF分泌量明显减少,牙槽骨处于骨质改建较弱的时期。第二部分体外培养大鼠破骨细胞VEGF表达的研究分别采用免疫组化和原位杂交方法,观察体外培养大鼠破骨细胞VEGF表达的情况。实验取大鼠长骨骨髓,采用骨髓诱导培养方法,培养体系中加入1,25(OH)2D3、IL-1β诱导破骨细胞分化,进行细胞培养,倒置显微镜观察破骨细胞形成情况。细胞培养6d后可见有多核巨细胞形成。取原代培养9d后的细胞爬片进行破骨细胞特征性染色鉴定,出现抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的多核细胞,并且与细胞共同培养的骨片上出现吸收陷窝,即为破骨细胞样细胞。取所培养的破骨细胞样细胞进行VEGF免疫组化和原位杂交染色,结果均为阳性,证实体外培养大鼠破骨细胞中有VEGF蛋白和mRNA的表达,提示VEGF可能参与破骨细胞的分化与成熟。
白玉娣[5]2003年在《犬乳恒牙替换期骨保护素配体和核因子κB受体活化剂表达的研究》文中研究指明肿瘤坏死因子家族成员骨保护素配体(osteoprotegerin ligand，OPGL；又称TRANCE，RANKL，ODF)是近年发现的在动物的骨、血液及免疫系统等处分布的，促进破骨细胞分化的蛋白分子。在骨改建中，诱导破骨细胞融合、分化、成熟等一系列功能活动。核因子κB受体活化剂(receptor activator of nuclear factor-κB，RANK)是肿瘤坏死因子受体超家族成员，是OPGL在破骨细胞表面的受体，OPGL通过与其结合，将细胞分化信号传入破骨细胞前体细胞内，促进后者增殖、分化、融合和成熟破骨细胞的激活。骨保护素(osteoprotegerin，OPG；又称为OCIF)是肿瘤坏死因子家族成员，对破骨细胞生理性骨吸收起着关键的调控作用。OPG由成骨细胞和骨髓基质细胞产生，与其自然配体OPGL结合阻断了OPGL激活其同族受体RANK所产生的促破骨细胞分化、活化和存活作用，转基因小鼠过度分泌OPG可导致因破骨细胞几乎完全丧失引起的骨质硬化症。OPGL、RANK、与OPG共同构成一种细胞因子系统，调节破骨细胞的增殖、分化、激活和骨吸收功能等生物学活性，对有机体的成骨和破骨作用进行调节。目前对该叁类分子的研究主要集中于骨的改建方面，而其在乳恒牙替换过程中所起作用的研究还未见报道。乳恒牙替换是动物牙齿及颌面部生长发育的重要阶段，包含有乳牙根、牙槽骨的吸收、恒牙胚的发育和恒牙萌出等一系列复杂的生理过程。在此过程中，乳牙、牙槽骨、牙周膜、恒牙胚等组织都发生了一系列复杂的变化。本研究采用免疫组织化学染色、原位杂交、细胞培养等方法，首次观察了犬乳恒牙替换过程中，乳牙牙根稳定期、乳牙根吸收期、恒牙列期叁个阶段，乳牙牙根、牙周膜、牙槽骨和恒牙胚中OPGL及其受体RANK的表达染色情况，以及破骨细胞培养分化过程中OPGL和RANK的表达情况，试图初步探讨在乳恒牙替换期和破骨细胞体外培养中这两类因子起到怎样的作用。 第四军医大学硕士学位论文主要研究内容及结果如下： 第一部分 犬乳恒牙替换阶段OPGL表达的研究 分别采用免疫组化和原位杂交方法，观察犬乳牙根稳定期、乳牙根生理性吸收期和恒牙列期中OPGL的表达染色情况。 1．犬乳牙牙根稳定期：犬乳牙牙根尚未发生生理性根吸收，恒牙胚处于发育阶段，恒牙胚牙本质、牙釉质基质开始形成，牙槽骨处于发育塑形期，此时牙槽骨成骨细胞、骨陷窝内破骨细胞、恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞免疫组化染色阳性，同时发现恒牙胚釉基质也为阳性着色；成牙本质细胞、牙槽骨成骨细胞原位杂交结果阳性。提示成骨细胞表达OPGL，作用于破骨细胞，在根稳定期参与牙槽骨的发育塑形，成牙本质细胞表达OPGL，可能参与恒牙胚的发育过程。 2．犬乳牙牙根吸收期：犬乳牙牙根发生生理性吸收，乳牙根面蚕食状，可见多数吸收陷窝，陷窝中可见多核破牙细胞。牙囊周围及接近牙胚的牙槽骨陷窝内可见多核破骨细胞。恒牙胚冠部牙本质、牙釉质进一步形成和矿化，其成釉细胞、成牙本质细胞高柱状，胞核远离基底膜，极性倒置明显。此时可见牙槽骨成骨细胞、破骨细胞、恒牙胚的成釉细胞、成牙本质细胞和釉基质免疫组化染色阳性，并且发现多核破牙细胞也为阳性着色。其中破骨细胞、成骨细胞染色灰度值较稳定期显着降低0O刀5人提示此期 OPGL染色强度明显升高。成牙本质细胞、牙槽骨成骨细胞原位杂交结果阳性，且成骨细胞灰度值较根稳定期显着降低O川刀5L提示此期成骨细胞 OPGL分泌功能增强，参与破骨细胞和破牙细胞的分化成熟，导致牙槽骨和乳牙根的吸收。成牙本质细胞分泌OPGL，可能参与恒牙胚的发育。 3犬恒牙列期：乳牙脱落，恒牙萌出。牙槽骨破骨细胞免疫组化染色弱阳性，成骨细胞原位杂交结果阳性。两类细胞染色灰度值均显着增加0 （0刀 1），提示成骨细胞 OPGL分泌量明显减少，牙槽骨的塑形可能成骨作 ·6－ 第四军医大学硕士学位论文用占优势。 第二部分 犬乳恒牙替换阶段oWK表达的研究 本实验采用免疫组化方法，观察RAN’K在犬乳牙根稳定期、生理性吸收期和恒牙列期中的表达染色情况。 1．犬乳牙牙根稳定期：可见牙槽骨陷窝内破骨细胞免疫组化阳性，并发现恒牙胚成牙本质细胞阳性着色。提示破骨细胞表达RAN’K，参与牙槽骨的改形重建，成牙本质细胞表达RANK，可能参与恒牙胚的发育。 2犬乳牙牙根吸收期：乳牙根发生生理性吸收，牙槽骨陷窝内破骨细胞、恒牙胚成牙本质细胞染色阳性，并发现根面吸收陷窝中的破牙细胞亦为阳性着色。其中破骨／牙细胞为强阳性着色，破骨细胞灰度值较其他两组显着降低0N刀5人 表明RAN’K染色强度明显升高，提示破骨／牙细胞RAN’K分泌量显着增加，参与牙槽骨和乳牙根的吸收功能增强，恒牙胚成牙本质细胞分泌RANK，参与恒牙胚发育。 3．犬恒牙列期：乳牙脱落，恒牙萌出。牙槽骨内破骨细胞染色弱阳性，灰度值较前两期显着升高（P（0．of），提示破骨细胞RAN’K?
曲勃颖[6]2008年在《犬乳恒牙替换期间活化T细胞核因子NFATc1表达的研究》文中研究说明乳恒牙替换是一种复杂的口腔正常生理现象,在此期间乳牙牙体、牙髓、牙周膜、牙槽骨以及继承恒牙胚、牙囊等组织发生了一系列变化,但目前其机制尚不明确,破骨细胞在其中发挥了重要作用。活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Active T cells,NFAT)家族中的NFATc1是近年来发现的与破骨细胞的产生分化成熟及功发挥等过程密切相关的转录因子,本实验采用免疫组织化学等方法观察了NFATc1在犬乳恒牙替换过程中的乳牙根稳定期、乳恒牙替换期及恒牙列期叁个阶段的表达情况。NFATc1免疫组织化学染色结果显示:①破骨细胞染色在犬乳牙根稳定组呈阳性,乳恒牙替换组呈强阳性,恒牙列组呈弱阳性,乳恒牙替换组与其余两组相比都有显着的统计学意义,说明NFATc1可能参与了乳恒牙替换过程中的牙槽骨吸收过程;②在恒牙胚发育过程中成釉细胞、成牙本质细胞及周围牙囊组织染色呈阳性,提示NFATc1可能参与了恒牙胚的发育、萌出及牙齿的矿化等环节;③成骨细胞染色在乳牙根稳定组呈阴性,在乳恒牙替换组呈强阳性,在恒牙列组呈阴性,推测NFATc1可能通过与OB相互作用,一方面参与牙槽骨改建,更主要的是可能通过与成骨细胞作用间接促进破骨细胞的分化成熟和发挥功能。本实验通过NFATc1在犬的乳恒牙替换过程中的表达情况初步探讨了其在乳恒牙替换过程中的作用和意义。
刘晓辉[7]2004年在《犬乳恒牙替换期信号转导负调节分子SHIP的表达和意义》文中提出牙齿萌出和乳恒牙替换是复杂的生理过程，其机制到现在还不十分清楚。现已证实，OC和OD是参与乳牙根生理性吸收和萌出道形成的两种重要功能细胞。其中OD在组织学上与OC相似，是吸收牙体硬组织的细胞。对OC和OD的研究是乳恒牙替换机制研究的重要方面。 SHIP是一种细胞内信号转导负调节分子，特异性表达于造血细胞和精子细胞。当造血细胞受到多种细胞因子或生长因子刺激时，SHIP可发生络氨酸磷酸化，并在细胞内移位，发挥磷酸酶的作用，水解去除PI(3、4、5)P3和Ins(1、3、4、5)P4的肌醇环的5位磷酸。SHIP可抑制PI-3K、Ras—MAPK和PLCγ等多条细胞内活化性信号转导途径，从而负调节造血细胞的增殖活化。 目前，国内外文献中未见有SHIP表达于OC的报道。根据OC来源于造血细胞系，由单个核前体细胞融合而成，推断SHIP可能表达于OC。另外Takeshita等研究发现，SHIP~(-／-)小鼠的OC数目增加两倍，SHIP~(-／-)OC与Paget病的OC相似，胞体增大，胞核超过100个，吸收活性增强。提示SHIP可能表达于OC，并对OC的形成和功能有负调节作用。为了探讨SHIP在乳恒牙替换期的OC和OD中有无表达，本研究一方面将犬乳恒牙替换过程分为乳牙根稳定第四军医大学硕士学位论文期、乳牙根吸收期和恒牙列期叁个阶段，采用IHC和ISH的实验方法，分别从蛋白和mRNA水平检测SHIP在犬乳牙牙髓、牙根和根周组织，恒牙胚及周围组织中的表达情况，分析了SHIP在犬乳恒牙替换过程中可能的作用。另一方面参考了OC体外培养的资料，用淋巴细胞分离液从人外周血细胞中分离出PBMC进行培养，培养液中加入la，25(oH)2D3、DEX、M一CSF和RANKL，对14d后出现的OLC采用IHC和ISH实验方法，分别从蛋白和mRNA水平检测了SHIP在体外诱导培养的OLC中的表达，并分析了SHIP对OLC形成和功能的作用。 主要实验结果如下: 第一部分犬乳恒牙替换期SHIP表达的研究 1犬乳牙根稳定期乳牙根尚未发生生理性根吸收，乳牙根完整，牙髓内无OD，乳牙根周围牙槽骨未见吸收陷窝;继承恒牙处于牙冠发育阶段，冠部牙本质、牙釉质部分形成，成牙本质细胞和成釉细胞沿牙本质和牙釉质整齐排列;恒牙胚周围牙槽骨处于改建期，可见少量OC位于牙槽骨吸收陷窝内。此期乳牙牙髓、牙根和根周组织SHIP IHC和ISH染色均为阴性，可能是由于SHIP表达严格限制于造血细胞，而标本制作中采用血管内灌注的方法，切片中残存的血细胞很少;牙槽骨吸收陷窝中oc的sHIP IHC和ISH染色均为阳性，表明SHIP表达于犬乳牙根稳定期的0C中;恒牙胚牙乳头、牙本质、牙釉质、成牙本质细胞和成釉细胞SHIPIHC和ISH染色均为阴性。 2犬乳牙根吸收期犬乳牙根发生生理性吸收，根面有许多吸收陷窝，呈蚕食状，陷窝中可见0D，乳牙根髓靠近牙本质处也分化出多核的OD:继承恒牙牙冠的牙本质、牙釉质进一步形成;恒牙胚周围牙槽骨骨质吸收活跃，OC较多，沿牙胚周围牙槽骨的边缘排列成一排，牙槽骨内也可见oc。此期可见oC和oD的sHIP IHc和ISH染色均为阳性，表明SHIP表达于犬乳牙根吸收期的OC和 一5-第四军医大学硕士学位论文OD中;其余组织SHIP IHC和ISH染色阴性。 3犬恒牙列期乳牙脱落，恒牙萌出。恒牙牙髓、牙根和牙周组织SHIp IHe和IsH染色均为阴性。 第二部分体外培养OLC SHIP表达的研究 用倒置显微镜和HE染色观察，多因子诱导培养PBMC6d即可见一些细胞体积增大，14d后可见多核细胞形成，其中个别细胞体积巨大，胞核数目可达20多个。经TRAP染色和牙本质片吸收试验，这些多核细胞显示TRAP阳性，且具有骨吸收功能，证明是OLC。培养所获的OLC和混杂的其它血细胞SHIP IHC和ISH染色均为阳性，验证了SHIP表达于造血细胞系，同时表明SHIP表达于体外培养的OLC内。 简言之，本研究观察到SHIP表达于乳恒牙替换过程中的0C、OD和体外培养的OLC中，可能负调节OC和OD的分化和功能，使牙槽骨和乳牙根硬组织吸收处于严密控制之下，防止出现快速吸收的现象。sHIP在oC和oD中有表达的发现迄今为止未见报道。
杨秀玲[8]2012年在《CK及FGFR1在犬乳恒牙替换过程中的表达》文中进行了进一步梳理乳牙根是人体中唯一能够进行生理性吸收的硬组织，其正常吸收是恒牙萌出的关键。破骨细胞（OC）和破牙细胞（OD）在此过程中发挥了重要的调控作用，现已明确有多种调控因子参与了破骨细胞和破牙细胞的增殖、分化、激活等骨吸收过程。CK为番木瓜家族中的半胱氨酸蛋白酶成员，具有蛋白水解酶的特性，能够水解Ⅰ型胶原等骨基质蛋白，对破骨细胞、破牙细胞的形成和骨吸收有重要作用。FGFR1为成纤维细胞因子受体，能够与相应配体结合，调控成骨细胞及破骨细胞的增殖分化及骨形成。本研究利用HE染色观察犬乳恒牙替换过程中组织形态的变化，TRAP染色观察破骨细胞、破牙细胞及其前体细胞的分布及数量变化，免疫组化方法检测犬乳恒牙替换过程中CK及FGFR1的表达。结果表明：乳牙根吸收呈间断性，分静止期和活跃期，乳牙根吸收起始阶段组织形态稳定，晚期牙根及牙槽骨吸收活跃，同时骨改建明显。吸收活跃期破骨/破牙细胞及其前体细胞分布广泛，数量明显多于乳牙根稳定组、吸收早期组及恒牙列初期。吸收活跃期破骨/破牙细胞内ＣＫ免疫组化强阳性，染色强度明显高于乳牙根稳定组、吸收早期组及恒牙列初期。恒牙胚发育过程中成釉细胞、成牙本质细胞及周围牙囊组织ＣＫ免疫组化染色阳性。表明ＣＫ作用于破骨细胞、破牙细胞、成釉细胞、成牙本质细胞及周围牙囊组织参与乳牙根的生理性吸收、恒牙萌出。吸收活跃期破骨/破牙细胞、成骨细胞内FGFR1免疫组化强阳性，染色强度明显高于乳牙根稳定组、吸收早期组及恒牙列初期。恒牙胚发育过程中成釉细胞、成牙本质细胞及周围牙囊组织FGFR1免疫组化染色阳性。提示FGFR1作用破骨细胞、破牙细胞、成骨细胞、成釉细胞、成牙本质细胞及周围牙囊组织参与乳牙根的生理性吸收及恒牙的萌出。FGFR1一方面直接对破骨细胞及破牙细胞产生调控作用，另一方面通过成骨细胞间接对破骨细胞及破牙细胞产生调控作用。
参考文献：
[1]. 犬恒牙牙根发育过程中相关调控基因表达和细胞凋亡的研究[D]. 轩昆. 第四军医大学. 2001
[2]. 牙发育过程中TGF-β_1、BMP-2、bFGF和E-Cadherin的表达及相关技术研究[D]. 程敏. 吉林大学. 2008
[3]. 犬乳恒牙替换期骨保护素表达的研究[D]. 陈丽萍. 第四军医大学. 2008
[4]. 犬乳恒牙替换期血管内皮生长因子的表达及意义[D]. 孙华. 第四军医大学. 2007
[5]. 犬乳恒牙替换期骨保护素配体和核因子κB受体活化剂表达的研究[D]. 白玉娣. 中国人民解放军第四军医大学. 2003
[6]. 犬乳恒牙替换期间活化T细胞核因子NFATc1表达的研究[D]. 曲勃颖. 吉林大学. 2008
[7]. 犬乳恒牙替换期信号转导负调节分子SHIP的表达和意义[D]. 刘晓辉. 第四军医大学. 2004
[8]. CK及FGFR1在犬乳恒牙替换过程中的表达[D]. 杨秀玲. 吉林大学. 2012
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