一、三种药物对体外培养子宫肌瘤细胞增殖凋亡及调控因子影响（论文文献综述）
谢卓庭[1]（2021）在《基于WNT/NF-κB双信号通路探讨橘荔散结丸对子宫肌瘤细胞的作用机制》文中提出目的:本研究深入挖掘橘荔散结丸的化学成分,以人子宫肌瘤细胞为载体,探讨WNT/β-catenin与NF-κB双信号通路在人子宫肌瘤细胞中的作用。在此基础上,研究橘荔散结丸对人子宫肌瘤细胞的药效作用,并探讨橘荔散结丸通过WNT/β-catenin与NF-κB双信号通路干预人子宫肌瘤细胞的分子机制及作用机理。方法:首先基于UHPLC-QE-MS技术对橘荔散结丸化学成分分析。培养人原代子宫肌瘤细胞并进行免疫组化鉴定。采用Wnt通路抑制剂KYA1797K和NF-κB通路抑制剂PDTC干预人子宫肌瘤细胞,通过Western blotting及RT-qPCR技术检测WNT/NF-κB双信号通路信号分子及下游靶基因的表达水平。采取CCK8、流式细胞术检测橘荔散结丸干预人子宫肌瘤细胞的细胞增殖抑制率、凋亡率和细胞周期。通过Western blotting及RT-qPCR技术检测橘荔散结丸干预人子宫肌瘤细胞后WNT/NF-κB双信号通路信号分子及下游靶基因的表达水平。结果:1.基于UHPLC-QE-MS技术,建立了橘荔散结丸化学成分总离子流图和指纹图谱。共分离出663个化合物,包含195个萜类,105个黄酮类,79个生物碱类,69个苯丙素类,43个酚类及其他类型等。2.KYA1797K干预子宫肌瘤细胞,与空白组对比,Wnt 5b、IKK α、p-IKB α、P65、TNF α、IL-6 蛋白表达升高（P<0.05）,p-GSK-3β、β-catenin、EGFR、MMP2蛋白表达降低（P<0.05）,GSK-3 β、IKB α蛋白无显着差异（P>0.05）;子宫肌瘤细胞β-catenin、EGFR、MMP2 mRNA 表达降低（P<0.05）,IKK α、IKBα、P65、TNF α、IL-6 mRNA 表达升高（P<0.05）,Wnt 5b、GSK-3 β mRNA 无显着差异（P>0.05）。3.PDTC干预子宫肌瘤细胞,与空白组对比,Wnt 5b、p-GSK-3 β、β-catenin、EGFR、MMP2蛋白表达升高（P<0.05）,IKK α、p-IKB α、P65、TNF α、IL-6 蛋白表达降低（P<0.05）,GSK-3 β、IKBα蛋白无显着差异（P>0.05）;子宫肌瘤细胞 β-catenin、EGFR、MMP2 mRNA 表达升高（P<0.05）,IKKα、IKB α、P65、TNF α、IL-6 mRNA 表达降低（P<0.05）,Wnt 5b、GSK-3 β mRNA 无显着差异（P>0.05）。4.子宫肌瘤细胞加药培养12H、24H、48H,橘荔散结丸各药物浓度组与0mg/mL组对比细胞增殖抑制率均有显着差异（P<0.05）。早期凋亡率和晚期凋亡率,橘荔散结丸高低浓度组、米非司酮组与空白组相比,均有显着差异（P<0.05）;且橘荔散结丸高浓度组和米非司酮组大于橘荔散结丸低浓度组（P<0.05）。G0/G1期和G2/M期细胞数,与空白组相比,橘荔散结丸高低浓度组、米非司酮组均有显着差异（P<0.05）;且橘荔散结丸高浓度组和米非司酮组大于橘荔散结丸低浓度组（P<0.05）;橘荔散结丸高浓度组与米非司酮组之间无显着差异（P>0.05）。5.橘荔散结丸高低浓度组、米非司酮组与空白组对比Wnt 5b、p-GSK-3 β、β-catenin、EGFR、MMP2蛋白表达降低（P<0.05）,GSK-3 β蛋白表达无显着差异（P>0.05）。橘荔散结丸高浓度组、米非司酮组与低浓度组对比Wnt 5b、p-GSK-3β、β-catenin、EGFR、MMP2 蛋白表达降低（P<0.05）,GSK-3 β 蛋白表达无显着差异（P>0.05）。橘荔散结丸高浓度组与米非司酮组对比Wnt 5b蛋白表达较低（P<0.05）,p-GSK-3 β、GSK-3β、β-catenin、EGFR、MMP2 蛋白表达无显着差异（P>0.05）。6.橘荔散结丸高浓度组、米非司酮组分别与空白组和低浓度组对比IKKα,p-IKB α,P65、TNF α蛋白表达升高（P<0.05）,IKB α蛋白表达无显着差异（P>0.05）。橘荔散结丸低浓度组与空白组对比IKK α,P65蛋白表达升高（P<0.05）,p-IKB α、IKB α蛋白表达无显着差异（P>0.05）。米非司酮组与橘荔散结丸高浓度组对比p-IKBα,P65蛋白表达升高（P<0.05）,IKK α、IKB α、TNFα蛋白表达无显着差异（P>0.05）。米非司酮组IL-6蛋白表达高于橘荔散结丸低浓度组（P<0.05）,橘荔散结丸高低浓度组间无显着差异（P>0.05）。7.与空白组对比,橘荔散结丸高低浓度组、米非司酮组Wnt 5b、GSK-3 β、β-catenin、EGFR、MMP2 mRNA表达降低（P<0.05）,IKK α、IKB α、P65、IL-6 mRNA表达升高（P<0.05）;TNF α mRNA在橘荔散结丸高浓度组、米非司酮组中表达升高（P<0.05）,橘荔散结丸低浓度组中无显着差异（P>0.05）。与低浓度组对比,橘荔散结丸高浓度组、米非司酮组Wnt 5b、GSK-3 β、β-catenin、EGFR、MMP2 mRNA 表达降低（P<0.05）,IKB α、P65、IL-6 mRNA 表达升高（P<0.05）,IKKαmRNA表达无显着差异（P>0.05）。米非司酮组TNFα mRNA表达高于橘荔散结丸低浓度组（P<0.05）,而橘荔散结丸高低浓度组间无显着差异（P>0.05）。橘荔散结丸高浓度组与米非司酮组相比各蛋白mRNA表达无统计学差异（P>0.05）。结论:1.UHPLC-QE-MS技术可以对橘荔散结丸化学成分进行快速高效鉴定,为橘荔散结丸的药效物质研究提供基础。橘荔散结丸化学成分众多,包含萜类、黄酮类、生物碱类、苯丙素类、酚类等。2.Wnt/β-catenin通路抑制剂KYA1797K和NF-κB通路抑制剂PDTC均可影响子宫肌瘤细胞Wnt/β-catenin信号通路和NF-κB信号通路分子及下游靶基因的表达水平,说明子宫肌瘤细胞中两条信号通路之间可能存在交联作用。3.橘荔散结丸可以显着抑制子宫肌瘤细胞增殖,提高早期凋亡率和晚期凋亡率,阻滞细胞周期,证实了橘荔散结丸对子宫肌瘤细胞的药效作用。4.橘荔散结丸影响子宫肌瘤细胞Wnt/β-catenin通路和NF-κB信号通路分子及下游靶基因的表达水平,说明橘荔散结丸通过Wnt/NF-κB双信号通路干预子宫肌瘤细胞增殖凋亡。
司红红[2]（2021）在《基于“虚损生积”探讨益气消症方治疗子宫肌瘤大鼠的作用机制》文中研究指明目的:通过观察益气消症方对子宫肌瘤模型大鼠子宫病理学、T淋巴细胞亚群、血液流变学、肌瘤细胞的凋亡与周期分布、子宫组织内ER、PR及Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的影响,探讨益气消症方治疗子宫肌瘤的作用机制,进而为临床治疗子宫肌瘤提供新思路和理论基础。方法:1.50只SPF级Wistar雌性大鼠,适应性饲养1周后,随机分为空白组（K,8只）和造模组（42只）。造模组腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液0.5mg/kg,1次/日+黄体酮注射液4mg/kg,1次/周,25天后,两种激素每日同用5天,剂量不变;空白组大鼠腹腔注射等体积生理盐水。造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组（M）、桂枝茯苓胶囊组（F）、益气消症方高、中、低剂量组（G、Z、D）。2.各组大鼠造模成功2天后,固定时间灌胃,每日一次,持续4周。实验过程中观察大鼠一般状态,并于造模前、造模后2、4周、药物干预后2、4周时称重。3.给药4周后,各组大鼠心脏采血,分别检测血液流变学和T淋巴细胞亚群水平。摘取子宫,测量子宫重量,计算子宫系数;取部分子宫组织固定于4%组织细胞固定液中,制作组织切片,分别用于HE染色和免疫荧光染色;部分组织于0.9%生理盐水中常温保存,2h内用流式细胞仪检测组织细胞的凋亡与周期分布情况;部分存于﹣80℃冰箱,Western-blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达水平。结果:1.一般状态:空白组大鼠实验全程未见异常。模型组大鼠在造模过程中逐渐出现食欲减退、毛色苍黄无光泽、脱毛、易惹激、相互撕咬等情况,个别大鼠出现乳房红肿、坏死。药物干预过程中,模型组大鼠上述症状逐渐加重;各治疗组大鼠较模型组精神状态好转,性情趋于平和,毛色渐有光泽,脱毛减轻,乳房红肿消退,且与给药时间、浓度呈正相关。2.体重及子宫系数:雌孕激素负荷后大鼠体重明显降低、子宫系数升高,差异显着（P<0.01）;药物对恢复大鼠体重和子宫系数疗效明显（P<0.05）。但桂枝茯苓胶囊与益气消症方在升高大鼠体重、降低子宫系数上,作用相当,差异无统计学意义。3.子宫病理形态改变:光镜下空白组大鼠子宫平滑肌细胞形态正常,排列整齐,肌层未见增生及炎性细胞浸润;模型组子宫平滑肌明显增厚,肌组织排列紊乱,出现空泡,细胞大小不等,腺体增生活跃,增厚的肌层中有丰富的毛细血管及炎性细胞浸润;各治疗组子宫病理形态的改变介于空白组与模型组之间。4.血液流变学变化:子宫肌瘤模型大鼠的血黏度及红细胞压积均明显升高,差异有统计学意义（P<0.01）。药物对改善大鼠血液流变学指标疗效显着（P<0.01）;G组与Z、D组比较,效果更优,差异有统计学意义（P<0.05）;G组与F组在改善大鼠血液流变学方面作用相当。5.免疫功能:模型组大鼠T细胞免疫特异性标志物CD3+,特别是CD4+水平明显降低,而CD8+水平明显高于正常,差异有统计学意义（P<0.01）。各治疗组均能明显改善大鼠的免疫功能,可有效调节T细胞亚群变化,与模型组相比,差异有显着性（P<0.05）;且益气消症方高剂量组效果更优。6.子宫组织中雌、孕激素受体表达的变化:子宫肌瘤大鼠靶器官内ER、PR呈高表达,与空白组差异显着（P<0.05）;各治疗组中,G组抑制ER、PR表达更显着,差异具有显着性（P<0.05）,而D组作用不明显。7.肌瘤细胞凋亡与周期的变化:与模型组相比,各治疗组大鼠肌瘤组织细胞凋亡率明显升高,差异有统计学意义（P<0.01）,但G组促凋亡效果更显着（P<0.05）。桂枝茯苓胶囊和益气消症方均能抑制细胞从静息期进入活跃期,明显调节了处于G1/0期和S、G2M期的细胞比例,差异有统计学意义（P<0.05）,且G组较其他各组更能明显阻滞肌瘤组织细胞周期。8.子宫组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达:模型组大鼠子宫组织中Bcl-2蛋白呈高表达,而Bax、Caspase-3蛋白与之相反（P<0.01）。各治疗组对Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平均有所改善,但益气消症方的调控作用优于桂枝茯苓胶囊（P<0.05）。结论:1.益气消症方能够改善子宫肌瘤大鼠的一般生存状况。2.益气消症方能够改善子宫肌瘤大鼠的子宫病理状态。3.益气消症方可以调节机体免疫功能,促进血液循环,降低子宫组织内高雌孕激素水平,抑制靶细胞对性激素的反应性,阻滞细胞周期,促进子宫平滑肌细胞的凋亡,维持平滑肌细胞增殖和凋亡的动态平衡,这可能是其治疗子宫肌瘤的机制之一。
董艳北[3]（2019）在《金雀异黄酮对子宫肌瘤的影响》文中认为研究背景子宫肌瘤是一种常见的妇科疾病,虽然它是一种良性肿瘤,但是却影响了约25%妇女的生活。据估计,77%的妇女在一生中发生过子宫肌瘤,其中15-30%的女性会出现明显的症状,包括骨盆不适、痛经、月经过多、贫血、尿失禁、继发性不孕、早产等。子宫肌瘤的发病原因及机制尚不明确,但大量研究表明雌激素的表达水平与子宫肌瘤的发生密切相关,育龄妇女子宫肌瘤的发病率高,绝经期后由于雌激素撤退子宫肌瘤发病率下降,原有子宫肌瘤也会变小或痊愈。植物雌激素是存在于植物中的雌激素类化合物,在人类和动物饮食中普遍存在,具有极弱的雌激素活性。由于植物雌激素与内源性雌激素有相似的分子结构和生物活性,食用富含植物雌激素的大豆制品会不会促进子宫肌瘤的发生和发展以及子宫肌瘤患者是否能够食用大豆制品成为人们关注的热点。目的本实验的目的是通过体内研究金雀异黄酮对去卵巢大鼠子宫的作用、体外研究金雀异黄酮对人子宫肌瘤细胞增殖与凋亡的作用,阐明植物雌激素对子宫肌瘤发生和发展的影响,为使用植物雌激素进行子宫肌瘤的防治提供依据。方法24只3月龄的雌性SD大鼠,随机分为金雀异黄酮组、苯甲酸雌二醇组、假手术组和去卵巢对照组,每组6只,去卵巢术后第二天开始给药,用药8周后收集子宫标本做石蜡切片并染色。测量子宫内膜和子宫平滑肌厚度、子宫腺体数目;应用组织块法获得子宫肌瘤细胞,用免疫细胞化学法鉴定细胞,用不同浓度的金雀异黄酮（0.01μg/ml,0.1μg/ml,1μg/ml,10μg/ml,25μg/ml,50μg/ml）进行干预,分别在24、48、72小时后用CCK-8法检测细胞增殖活性;用流式细胞术检测金雀异黄酮对细胞凋亡的影响。结果金雀异黄酮干预后去卵巢大鼠子宫内膜和平滑肌厚度明显增加、子宫腺体数增多。但3项指标均低于苯甲酸雌二醇组及假手术组,未见子宫平滑肌出现瘤性增生。在使用CCK-8检测子宫肌瘤细胞增殖的实验中,与空白对照组相比,低浓度金雀异黄酮组（0.01-1μg/ml）时细胞吸光度值显着升高,而高浓度的金雀异黄酮组（10-50μg/ml）细胞吸光度值显着下降。说明低浓度的金雀异黄酮可促进子宫肌瘤细胞的增殖、高浓度的金雀异黄酮抑制细胞的增殖;凋亡实验显示,与空白对照组相比,低浓度金雀异黄酮组（1μg/ml）凋亡细胞比例无显着差异（P>0.05）;但高浓度金雀异黄酮组（10-50μg/ml）子宫肌瘤细胞凋亡比例显着增加（P<0.05）,提示高浓度的金雀异黄酮可以促进子宫肌瘤细胞的凋亡。结论1.金雀异黄酮能使去卵巢大鼠子宫内膜和子宫平滑肌增厚、腺体增多,对于雌激素撤退引起的子宫改变有治疗作用。2.雌激素剥夺后使用金雀异黄酮不会引起子宫内膜和子宫肌层的过度增生。3.金雀异黄酮可抑制子宫肌瘤细胞增殖,促进子宫肌瘤细胞凋亡,对防治子宫肌瘤有作用。
王雪雁[4]（2019）在《民族医药防治肿瘤潜力与优势分析及基于P53-GADD45α通路研究土家药蜚蠊对肝癌细胞凋亡的调控机制》文中提出21世纪是生命科学与传统民族医药共同发展的世纪。寻找民族医药中能够增强人体免疫、诱导肿瘤细胞凋亡和抗肿瘤转移的药物和方剂,是21世纪肿瘤防治方面新的战略目标。目前,在肿瘤疾病防治研究领域,大量的文献研究、药理实验和临床研究向我们证明,民族医药正在起着积极作用。但既往的研究多针对某一个民族的防治肿瘤医药进行纵向阐述,尚未有文章从整体上论述我国民族医药防治肿瘤的潜力与优势。本课题组在文献研究过程中,通过收集、整理、归纳和总结我国民族医药的抗癌理论、临床应用、药理研究等,目的是找到存在的共通点,为民族医学预防和治疗癌症提供理论和科学依据。本研究内容主要分为五点:前言介绍了研究背景、研究意义和所选用的研究方法;第一章通过介绍四大民族医学及壮族、土家族医学对于肿瘤病名及病因病机的独特见解,初步阐述民族医学防治肿瘤理论认识;第二章主要通过未病先防-扶正御邪、既病防变-预防恶化及瘥后防复-减毒增效三个部分,阐述了民族医药预防肿瘤的潜力与优势;第三章从现代药理研究和临床应用两个部分,分析民族医药治疗肿瘤的潜力与优势;小结部分总结了我国民族医药防治肿瘤的潜力与优势,并指出本文存在的不足之处。目的:建立蜚蠊提取物含药血清大鼠模型,提取含药血清,再通过细胞实验,对比观察不同药物浓度含药血清及常规西药含药血清对肝癌BEL-7402细胞增殖和凋亡的影响,最后通过CCK8、流式细胞仪、Western blot法、免疫组织化学法等现代医学检测手段,以P53-GADD45α轴及其相关因子ATM、CDC2、Cyclin B1、CDK1为切入点,探讨土家药蜚蠊对肝癌细胞增殖和凋亡产生的影响及其可能的作用机制,以期使之成为预防和治疗肝癌的一个重要药物,同时也佐证了民族医药在肿瘤防治领域确有潜力与优势。方法:将50只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为正常组（Normal）、5-FU阳性对照组（5-FU）、蜚蠊含药血清高剂量组（Fei Lian High,FLH）、蜚蠊含药血清中剂量组（Fei Lian Medium,FLM）、蜚蠊含药血清低剂量组（Fei Lian Low,FLL）,每组10只。Normal组予以生理盐水10ml/kg灌胃;5-FU组予以0.005g/ml纯水稀释后的5-FU注射液10ml/kg腹腔注射;FLH、FLM、FLL组分别予以0.5g/ml、0.25g/ml、0.125g/ml的蜚蠊提取物溶液10ml/kg灌胃。2次/d,连续5天,建立蜚蠊提取物含药血清大鼠模型。最后一次给药后1h,通过腹腔注射3%戊巴比妥麻醉,腹主动脉取血7-8ml/只,静置1h后,3500r/min离心10min、取上清56℃水浴30min灭活补体,0.22μm滤膜过滤除菌分装,获得含药血清,冰箱-20℃保存,需要时解冻,采用细胞培养液配制比例制成所需浓度的各组含药血清培养肝癌BEL-7402细胞。实验动物尸体、废弃物按伦理要求进行无害化处理。病理学观察:1、CCK8检测肝癌细胞增殖情况;2、流式细胞术检测肝癌细胞周期分布情况;3、流式细胞术检测肝癌细胞凋亡情况;4、免疫组织化学法检测肝癌细胞中P53、GADD45α、CyclinB1蛋白表达情况;5、Western blot法检测肝癌细胞中ATM、P53、GADD45α、CyclinB1 及 CDK1 的蛋白表达情况。结果:1、CCK8检测肝癌细胞增殖结果显示,与Normal组相比,5-FU组对肝癌细胞增殖抑制作用最为明显（P<0.01）,FLH组作用效果次之（P<0.01）。FLM组对肝癌细胞增殖抑制作用72h时较为显着（P<0.01）。2、流式细胞术检测肝癌细胞周期分布结果显示,与Normal组相比,5-FU组和FLH组G2/M、G1/G0期细胞比重增多（P<0.01）,S期细胞比重减少（P<0.01）。3、流式细胞术检测肝癌细胞凋亡结果显示,与Normal组相比,5-FU组促进肝癌细胞凋亡作用最为明显（P<0.01）,FLH、FLM、FLL组均表现为促进肝癌细胞凋亡（P<0.01）,其中高剂量组作用较为明显。4、免疫组织化学法检测结果显示,突变型P53及Cyclin B1在Normal组呈强阳性表达,5-FU组抑制作用最明显（P<0.05）,FLH 组次之（P<0.05）;GADD45α 在 Normal 组低表达,5-FU 组高表达（P<0.01）,FLH组次之（P<0.05）。5、Western blot法检测结果显示,与Normal组相比,5-FU、FLH、FLM组肝癌细胞中ATM、P53、CyclinB1及CDK1的蛋白表达水平显着降低（P<0.01）,FLL组P53、CyclinB1及CDK1的蛋白表达水平降低（P<0.05）;与Normal组相比,5-FU、FLH、FLM组肝癌细胞中GADD45α蛋白表达水平显着升高（P<0.01）,FLL组蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论:1、土家药蜚蠊提取物具有促进肝癌细胞凋亡的作用,而该作用可能是通过抑制肝癌细胞增殖和介导肝癌细胞周期阻滞实现的。2、土家药蜚蠊提取物含药血清可以下调肝癌BEL-7402细胞中ATM、P53、CyclinB1及CDK1的蛋白表达水平,上调GADD45α蛋白的表达水平,说明蜚蠊提取物可能通过调控P53-GADD45α通路及其相关信号因子,促进肝癌细胞凋亡。
胡光云[5]（2017）在《基于经典Wnt/β-catenin信号通路探讨EGCG对人子宫肌瘤细胞作用的研究》文中指出目的:1.改良人子宫肌瘤原代细胞的培养方法,提高人子宫肌瘤原代细胞的贴壁率,缩短首次传代的时间。2.探讨EGCG对人子宫肌瘤细胞增殖凋亡的影响,以及对经典Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt5b、β-catenin、EGFR的表达影响,以期阐明绿茶多酚治疗子宫肌瘤的作用机制,从而丰富中医食疗临床适用范围。方法:1.在手术取下肌瘤组织后放入4℃Hanks液中,延长细胞消化时间,组织块二次消化等改良方法获取原代子宫肌瘤细胞。2.绿茶多酚OuM、50uM、100uM、200uM干预子宫肌瘤细胞24h、48h、72h后,采用CCK8法检测ECGC对人子宫肌瘤细胞生长的影响,FCM检测细胞增殖抑制率;倒置显微镜下观察EGCG（0、50、100、200uM）处理24h、48h、72h后细胞的形态学变化。免疫组织化学法检测Wnt5b、β-catenin在各组子宫肌瘤细胞表达情况;采用Western-blot检测法检测细胞Wntb、β-catenin、EGFR的表达。成果:1.人子宫肌瘤有限细胞系培养成功.2.改良方法优于常规组:细胞获取量（2.33±0.48 VS 1.16±0.29）×108个/L,细胞贴壁率（41.33±7.43VS 22.07±6.82）%;首次传代时间（10.27±1.67VS14.67±1.18）天,P值均小于0.05;传代次数（6.60±0.83VS6.33±0.72）次,P>0.05;冻存后复苏成功率均为100%,无明显差异。显微镜下细胞显典型的"峰-谷"状生长,胞浆内表达SMα-actin),细胞纯度达98%以上。3.各组子宫肌瘤细胞的体外生长曲线形态良好,倒置显微镜下可见对照组的人子宫肌瘤细胞呈梭形或多边形贴壁生长,数量密集,轮廓清楚,细胞间连接紧密。CCK-8结果显示,与对照组相比,EGCG以剂量-时间依赖性的方式抑制子宫肌瘤细胞的增殖。加药组作用24小时即出现抑制率（P<0.05）,随着作用时间的延长,抑制率增加。4.FCM结果显示,人子宫肌瘤细胞的凋亡率随着EGCG浓度的增加而升高。5..组织免疫化学法、Western-blot检测结果显示:EGCG能降低人子宫肌瘤细胞中Wnt5b蛋白、β-catenin蛋白的表达,且呈浓度依赖关系。结论:1.改良后的细胞培养技术可以较快获得较多数量的人原代子宫肌瘤细胞。2.EGCG可抑制经典Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt5b、β-catenin、EGFR的表达促使人子宫肌瘤细胞的凋亡。
朱澄漪[6]（2008）在《消瘤颗粒治疗子宫肌瘤的临床研究及对模型大鼠影响的实验研究》文中研究指明目的:观察消瘤颗粒治疗子宫肌瘤的临床疗效及研究其对大鼠模型子宫肌瘤的影响,从而探讨消瘤颗粒治疗子宫肌瘤的作用机理。方法:临床部分:选取41例确诊为子宫肌瘤的患者,口服消瘤颗粒一个疗程,观察且记录患者治疗前后的中医临床症状和体征的变化,并于治疗前后均用B超监测子宫及肌瘤大小,比较治疗前后症状变化及子宫和肌瘤大小的变化,并按照相关标准判定其中医征候疗效,肌瘤疗效和综合疗效;实验部分:对105只SD大鼠,随机分组,雌孕激素负荷法建立大鼠模型,对造模大鼠分别给予消瘤颗粒和桂枝茯苓胶囊,实验结束计算各组大鼠的子宫系数及观察病理组织学变化,并用免疫组化法测定各组大鼠的雌孕激素受体及bcl-2蛋白水平。结果:临床部分:消瘤颗粒对改善中医症候疗效显着（P＜0.001）,而对于子宫肌瘤瘤体的大小无明显缩小作用（P＞0.05）,临床治疗子宫肌瘤中医症状总疗效为78.0%,肌瘤体积总疗效为53.7%,综合总有效率为80.5%;实验部分:1子宫大体指标及病理观察结果显示,与空白组比较,模型组大鼠子宫重量增加（P＜0.5）,子宫平滑肌层病理组织学改变为出现不规则增厚,肌细胞增生明显,排列紊乱（P＜0.001）,表明局部平滑肌增殖活跃,和临床子宫肌瘤病理组织学很相似,说明雌、孕激素负荷法成功地建立了大鼠实验性子宫肌瘤动物模型;2消瘤颗粒可明显减轻雌、孕激素负荷大鼠子宫重量,减小子宫系数（P＜0.05）,抑制大鼠的子宫肌瘤样病变（P＜0.05）;3子宫肌瘤局部ER、PR的含量增高（P＜0.05）,消瘤颗粒可抑制子宫平滑肌细胞ER、PR的表达（P＜0.05）;4子宫肌瘤局部bcl-2蛋白过表达（P＜0.05）,消瘤颗粒可使bcl-2蛋白表达下调（P＜0.05）。结论:消瘤颗粒临床治疗子宫肌瘤有效;实验研究显示子宫肌瘤的产生与雌孕激素及受体,及bcl-2蛋白过表达有关系,消瘤颗粒治疗子宫肌瘤的机制与降低ER、PR,拮抗雌孕激素及调节bcl-2蛋白,恢复细胞凋亡有关。
仇黎丽[7]（2008）在《左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞体外增殖与凋亡的影响及机理研究》文中研究指明子宫肌瘤是女性生殖器官的常见肿瘤,其发生与细胞增殖及细胞凋亡的失衡有关。近年来,随着对子宫肌瘤病因学研究的进展,局部应用孕激素类药物的治疗方法备受关注。左炔诺孕酮宫内缓释系统（LNG-IUS）是当前国际公认性能优良的宫内抗生育系统。国外一项前瞻性自身对照研究发现使用LNG-IUS能使肌瘤患者的子宫肌瘤变小,经量减少,其对子宫肌瘤的治疗作用可能与抑制内膜生长有关。然而LNG-IUS所形成的局部高效孕激素环境,是否还存在其它治疗作用靶点和机制尚不清楚。本研究首先构建纯度高、稳定性好的人子宫平滑肌瘤原代培养细胞,并在此基础上,直接以其为作用靶标,从增殖与凋亡的角度探讨左炔诺孕酮对子宫肌瘤的作用及其相关机制。研究共分三部分:一、人子宫平滑肌瘤细胞的原代培养与鉴定采用贴块法和酶消化法均成功获得肌瘤细胞。采用贴块法的第7～10 d始见单个细胞从组织块边缘游出,半月左右细胞长满并可传代;应用酶消化法时,不同肌瘤所需的消化时间稍有差异,消化所得的细胞经台盼蓝染色,活率可达90%。光镜下肌瘤细胞呈梭形,核椭圆形,可呈典型“峰-谷”样生长。原代与第3、9代细胞的倍增时间之间无统计学差异。免疫组化检测α-SMA阳性细胞达95%以上。以上结果表明,贴块法和酶消化法均能获得大量高纯度,功能良好,性状稳定的肌瘤细胞。二、左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞体外增殖与凋亡的影响MTT结果显示,10μg/mL LNG开始抑制肌瘤细胞的生长,随浓度增加及时间延长,抑制作用加强;电镜观察20μg/mL LNG组细胞,胞质空泡化、内质网扩张、线粒体固缩、染色质浓缩边聚;流式细胞术分析,加药组细胞凋亡率随LNG浓度的增加而逐渐升高;AO/EB双染在荧光显微镜下观察,对照组无明显凋亡细胞,10μg/mL LNG组开始出现早期凋亡细胞,15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL LNG组晚期凋亡细胞逐渐增多,核浓聚、偏位、被染成桔红色,可见明显的凋亡小体。这说明,10μg/mL LNG开始于体外发挥抑制肌瘤细胞增殖并诱导其凋亡的效应。三、左炔诺孕酮抑制体外培养人子宫肌瘤细胞增殖及诱导凋亡的机制研究RT-PCR结果显示,10μg/mL以上LNG作用后,肌瘤细胞中IGF-Ⅰ、Survivin mRNA表达显着下降（P＜0.05,）;Western blot证实,10μg/mL和20μg/mL LNG作用后,Survivin蛋白表达量显着下降,p38磷酸化水平升高,Caspase 3被明显激活。由此可以推测,高浓度LNG对子宫肌瘤的治疗机制可能与降调IGF-Ⅰ表达,抑制Survivin抗凋亡活性,并直接激活p38 MAPK信号通路,诱导Caspase 3活化有关。综上所述,本文以原代培养的人子宫肌瘤细胞为研究对象,通过多种实验手段,证明高浓度LNG能够借助于IGF-Ⅰ表达的下调有效抑制肌瘤细胞增殖,并通过激活p38 MAPK信号通路、活化Caspase3及抑制Survivin、IGF-Ⅰ表达而诱导肌瘤细胞的凋亡。
张春华[8]（2007）在《过氧化物酶体增殖体激活受体γ激动剂对人子宫肌瘤影响的实验研究及临床观察》文中提出目的：本研究对比了体外培养的人子宫肌瘤细胞和同源子宫肌瘤组织以及子宫正常平滑肌组织的ER、PR、PPAR—γ及TGF—β3的表达，以期说明它们在子宫肌瘤发病机制中的意义，并验证体外培养的子宫肌瘤细胞具有和人体内子宫肌瘤细胞相似的生物学特性。方法：应用胶原酶消化法分离获得子宫肌瘤细胞并体外培养。通过免疫组化的方法鉴定培养的细胞为子宫肌瘤细胞。同时应用RT—PCR法和免疫荧光的方法分别检测肌瘤组织、正常平滑肌组织和体外培养的子宫肌瘤细胞的ER、PR、PPAR—γ及TGF—β3的mRNA和蛋白的表达情况。结果：应用胶原酶消化法可以获得大量纯度较高的子宫肌瘤细胞，RT—PCR检测发现培养4代的子宫肌瘤细胞与子宫肌瘤组织的ER、PR、PPAR—γ和TGF—β3的mRAN的表达无明显差异（P＞0.05），但是二者较子宫正常平滑肌组织的表达均明显增强（P＜0.05）。免疫荧光检测显示体外培养的子宫肌瘤细胞与子宫肌瘤组织的ER、PR、PPAR—γ、TGF—β3蛋白表达无明显差异（P＞0.05），但是二者较子宫正常平滑肌组织的表达均明显增强（P＜0.05）。结论：应用胶原酶消化法获得的体外子宫肌瘤细胞具有和人体内子宫肌瘤细胞相似的生物学特性，此外ER、PR、PPAR—γ和TGF—β3在子宫肌瘤的发生机制中发挥重要作用。目的：观察PPAR-γ特异性激动剂罗格列酮对体外培养的人子宫肌瘤细胞增殖、凋亡以及PPAR-γ、TGF-β3、Bcl—2和Bax表达的影响，明确罗格列酮对体外人子宫肌瘤细胞生长的作用。方法：应用胶原酶消化法分离、获得子宫肌瘤细胞，将体外培养的肌瘤细胞分为5组：不同罗格列酮浓度(10-7mol／l，10-8mol／l，10-9mol／l，10-10mol／l)的4个实验组和不加任何药物的对照组。分别于加药后36h和72h：应用MTT观察各组细胞的增殖率：应用RT—PCR检测各组子宫肌瘤的P（?）AR-γ、TGF-β3、Bcl—2和Bax mRNA表达情况；应用免疫荧光法分析PPAR-γ、TGF-β3的蛋白表达情况：应用TUNEL法检测各组肌瘤细胞凋亡情况。结果：加药36h，各组之间子宫肌瘤细胞的增殖率差异无统计学意义（P＞0.05）。加药72h，各实验组子宫肌瘤细胞的增殖率明显降低，与相同药物浓度实验组作用36h的子宫肌瘤细胞增殖率相比较具有明显的差异（P＜0.05）。最大抑制作用发生在加药72h的10-7mol／l实验组（P＜0.05）：RT—PCR结果显示：加药36h，10-7mol／l实验组肌瘤细胞PPAR-γmRNA的表达明显提高，与其他相同作用时间的各组相比较有明显差异（P＜0.05）；其他各组在加药36h后与对照组相比较PPAR-γmRNA的表达无明显差异（P＞0.05）。在加药72h各实验组肌瘤细胞的PPAR-γmRNA表达伴随药物浓度的提高而增加，10-7mol／l实验组肌瘤细胞在加药72h PPAR-γmRNA表达提高最明显（P＜0.01）。罗格列酮作用36h对子宫肌瘤细胞TGF-β3 mRNA表达的影响不明显（P＞0.05）。不同浓度的罗格列酮在作用72h对各实验组子宫肌瘤细胞的TGF-β3 mRNA表达水平有显着的影响，伴随药物浓度的提高，肌瘤细胞的TGF-B3 mRNA表达降低（P＜0.05），10-7mol／l实验组的肌瘤细胞在加药72h TGF-β3 mRNA表达降低最明显（P＜0.01）。在罗格列酮作用36h，10-7mol／l实验组与其他4组比较细胞Bcl-2 mRNA的表达明显降低（P＜0.05），其余各组差异不明显（P＞0.05）。在罗格列酮作用72h时，各实验组子宫肌瘤细胞的Bcl-2 mRNA表达明显降低，差别有统计学意义（P＜0.05）。在10-7mol／l实验组在加药72h时，Bcl-2 mRNA表达降低最明显（P＜0.01）。在罗格列酮作用36h，各实验组Bax mRNA的表达改变不明显（P＞0.05）。罗格列酮作用72h时可以明显提高肌瘤细胞Bax mRNA的表达，与其他3个实验组相比较，10-7mol／l实验组Bax mRNA的表达上调最明显（P＜0.05）。伴随药物浓度的提高和作用时间的延长，Bax mRNA的表达增加（P＜0.05）。免疫荧光检测分析显示：只有10-7mol／l实验组在加药36h时肌瘤细胞PPAR-γ蛋白表达有所增加（P＜0.05），其他组别PPAR-γ蛋白表达增加不明显（P＞0.05）。各实验组在加药72h后，肌瘤细胞PPAR-γ的表达伴随罗格列酮浓度的增加而明显增加（P＜0.05）。各实验组TGF—β3蛋白表达在加药36h时降低不明显（P＞0.05）。加药72h，各实验组肌瘤细胞的TGF-β3的表达伴随药物浓度的升高而降低，与相同药物浓度实验组加药36h有明显差异（P＜0.05）。TUNEL分析结果显示，在加药36h各实验组肌瘤细胞的凋亡率有不同程度的增加，但是相互之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。在加药72h子宫肌瘤细胞的凋亡率增加明显，10-7mol／l实验组与其他3个实验组以及对照组相比较细胞凋亡率最高（P＜0.01）。10-8mol／l实验组与10-9mol／l和10-10mol／l实验组之间的细胞凋亡率也存在明显差异（P＜0.05）。以上罗格列酮的作用均存在在时间和浓度依赖性。结论：PPAR-γ激动剂罗格列酮可以抑制体外培养的人子宫肌瘤细胞的增殖和促进肌瘤细胞的凋亡，这种作用可能是通过调控PPAR-γ、TGF—β3、Bcl—2和Bax的表达来发挥作用的；罗格列酮有治疗子宫肌瘤的潜能。目的：观察PPAR-γ激动剂罗格列酮对子宫肌瘤病人的血清雌孕激素水平、肌瘤体积的影响以及对人体子宫肌瘤细胞PPAR-γ、TGF-β3、Bcl—2、Bax表达和细胞凋亡的影响，明确罗格列酮对于子宫肌瘤的治疗作用，以期为子宫肌瘤的临床用药提供新的选择。方法：将纳入的需要手术治疗的子宫肌瘤病人分成治疗组和对照组。治疗组的子宫肌瘤病人手术前应用罗格列酮（商品名：文迪雅）治疗一个月，对照组不给予任何处理。分别检测治疗组病人治疗前后以及对照组病人术前的肝肾功能、空腹血糖、血清雌孕激素水平。B超检测治疗组病人治疗前后的子宫肌瘤体积变化，应用RT—PCR分别检测治疗组和对照组肌瘤组织的的PPAR-γ、TGF-β3、Bcl—2以及Bax mRNA表达情况；应用免疫荧光法分析治疗组和对照组子宫肌瘤组织PPAR-γ、TGF-β3蛋白表达情况；应用TUNEL法检测治疗组和对照组子宫肌瘤组织细胞凋亡情况。结果：治疗组病人治疗前与对照组相比较，肝肾功能、空腹血糖、血清雌孕激素水平无明显差异（P＞0.05）。治疗组病人治疗前后肝肾功能、空腹血糖、血清雌孕激素水平无明显差异（P＞0.05）。B超检测显示治疗组病人治疗后肌瘤体积较治疗前减小，但是差异无统计学意义（P＞0.05）。RT—PCR分析显示治疗组肌瘤细胞PPAR-γmRNA的表达较对照组高（P＜0.05）：治疗组肌瘤细胞TGF-β3 mRNA的表达较对照组明显降低（P＜0.05）；治疗组肌瘤细胞Bcl—2 mRNA的表达较对照组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗组肌瘤细胞Bax mRNA的表达较对照组高，差异有统计学意义（P＜0.05）。TUNEL凋亡检测显示治疗组肌瘤细胞的凋亡率较对照组明显提高（P＜0.01）结论：应用文迪雅治疗一个月，对子宫肌瘤病人的肝肾功能、空腹血糖、的影响不明显；不影响肌瘤病人的月经周期：可以增加子宫肌瘤细胞凋亡，不失为子宫肌瘤药物治疗的新选择。
朱焰[9]（2007）在《孕三烯酮微球治疗子宫肌瘤药效学研究及作用机制探讨》文中指出目的：研究孕三烯酮微球对实验性豚鼠子宫肌瘤的治疗效果及对体外培养子宫肌瘤细胞的影响，探讨孕三烯酮治疗子宫肌瘤可能涉及的相关机制。方法：1．单次给予孕三烯酮微球注射液后，考察食蟹猴体内孕三烯酮血药浓度的变化。2．选用动情周期规则的大鼠，单次皮下注射孕三烯酮微球后，阴道涂片，观察孕三烯酮对SD大鼠性周期的影响，确定孕三烯酮是否具有长效作用。3．采用去势雌性豚鼠，外源性给予雌激素（E2）(50或100μg／只，每周2或3次，分别于第8、12和16周时解剖动物，观察子宫形态变化，计算子宫脏器系数，子宫组织切片，HE染色，进行病理组织学检查，建立适宜的豚鼠子宫肌瘤模型。4．利用外源性E2诱导的子宫肌瘤模型，于第7～16周皮下注射孕三烯酮微球2、4和8mg／kg，每10天一次，给药10周后处死动物，解剖观察子宫形态变化，计算子宫脏器系数；子宫组织切片，HE染色，进行病理组织学检查，观察孕三烯酮微球对豚鼠子宫肌瘤模型的影响；测定动物体内雌激素（E2）和孕激素（P）水平。5．利用人子宫肌瘤组织和瘤旁肌层组织，采用胶原酶消化，体外培养人子宫肌瘤和肌层细胞，并建立子宫肌瘤有限细胞系，考察孕三烯酮对剥夺E2子宫肌瘤细胞的影响。6．利用外源性E2诱导的子宫肌瘤模型和剥夺E2子宫肌瘤细胞，运用免疫组化、Westernblot和实时荧光定量RT-PCR，考察正常子宫和肌瘤中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、磷酸化雌激素受体(Phospho-167ER)以及磷酸化孕激素受体(Phospho-190PR)的表达差异，并研究孕三烯酮在外源性E2存在和不存在情况下对ER、PR、Phospho-167ER以及Phospho-190PR表达的影响。7．研究孕三烯酮对外源性E2诱导的子宫肌瘤和剥夺E2子宫肌瘤细胞周期和凋亡的影响。8．采用人肿瘤信号转导通路基因芯片测定子宫肌层和肌瘤细胞中的基因表达，比较子宫肌层和肌瘤细胞中差异表达的基因，筛选影响肌瘤形成的信号传导通路，考察孕三烯酮对子宫肌瘤细胞信号转导通路基因芯片中基因表达的影响。9．利用外源性E2诱导的子宫肌瘤模型和剥夺E2子宫肌瘤细胞，运用免疫组化、Westernblot和实时荧光定量RT-PCR方法，考察正常子宫和肌瘤中酪氨酸激酶（c-Src）以及磷酸化酪氨酸激酶(Phospho-416Src)的表达差异，研究孕三烯酮在外源性雌激素存在和不存在情况下对c-Src以及Phospho-416Src表达的影响。10．运用免疫沉淀方法初步考察ER／c-Src的相互作用，初步探讨孕三烯酮对ER／c-Src的相互作用的影响。结果：1．食蟹猴单次皮下注射给予孕三烯酮微球注射液0.6、2和6mg／kg，给药30分钟后即可达血药浓度高峰，释放时间为约490小时，有效浓度可维持约350小时。2．SD大鼠单次皮下注射孕三烯酮微球3.5、7.0和14.0mg／kg后，动情间期持续时间延长，连续2周抑制排卵。3．双侧摘除卵巢、性成熟的雌性豚鼠，皮下注射E2 100μg／只，2次／周，连续12周后，豚鼠子宫增生、膨大，形态明显改变，部分动物子宫有肉眼可见的肌壁间瘤和浆膜下肌瘤形成；并伴有继发性改变。病理组织学检查可见，增生的子宫肌细胞呈长梭形，编织状或栅状排列，细胞核呈短棒状或卵圆形，显示明显的子宫肌瘤特征，与人子宫肌瘤病理组织学特征相似。4．利用E2诱导的豚鼠子宫肌瘤模型，皮下注射给予孕三烯酮微球注射液2、4和8mg／kg，1次／10天，连续10周后，可见子宫增殖程度较轻，肉眼未见肌瘤形成；与模型组相比，子宫重量和脏器系数显着降低（P＜0.05），病理检查显示肌细胞排列接近正常对照组。在4和8mg／kg时，孕三烯酮微球以剂量依赖性方式抑制血清E2浓度。5．孕三烯酮可明显抑制剥夺E2的子宫肌瘤细胞的生长。IC50值为26.7μmol／L。6．剥夺E2的肌瘤细胞中ERmRNA和PR mRNA水平低于瘤旁子宫肌层细胞，但二者的蛋白水平和磷酸化蛋白水平高于瘤旁子宫肌层细胞。肌瘤细胞中ER和PR的磷酸化修饰可以不依赖E2。7．在外源性E2存在时，孕三烯酮（2、4和8 mg／kg）可下调ER、PR和PRB的表达。在剥夺E2的子宫肌瘤细胞中，在转录水平：孕三烯酮0.1，1和10μmol／L可使肌瘤细胞中PRmRNA、ERβmRNA和ERαmRNA呈下调趋势；较高剂量（10μmol／L）时ERαmRNA下调趋势更明显，而ERβmRNA水平则呈上调趋势。在蛋白水平：孕三烯酮（0.1，1和10μmol／L）以剂量依赖性方式下调ER、PR及其磷酸化蛋白Phospho-167ER和Phospho-190PR的表达。8．在E2诱导的豚鼠子宫肌瘤组织，孕三烯酮2、4和8mg／kg组细胞凋亡率与模型组和正常对照相比未见明显变化（P＞0.05）；在剥夺E2的子宫肌瘤细胞，孕三烯酮对子宫肌瘤细胞凋亡率的影响与溶剂对照组相似。RU486可明显促进细胞凋亡。9．与瘤旁子宫肌层细胞基因表达谱相比，在肿瘤信号转导涉及的15条通路96个被测基因中，子宫肌瘤细胞基因表达谱中22条基因明显上调，25条基因明显下调，上调的差异基因主要涉及的信号通路包括：低氧通路、炎症通路（NF-κB通路和Cox-2通路）、STAT通路、WNT通路、雄激素通路和Hedgehog通路；而雌激素通路、抗细胞增殖通路（TGFβ通路）及与凋亡相关的细胞幸存（PI3K／AKT）通路和DNA损伤／p53通路相关的基因水平变化较小。10．给予孕三烯酮3μmol／L作用36小时后，子宫肌瘤基因表达谱中，下调11条基因明显上调，46条基因明显下调，下调基因主要涉及炎症通路（NF-κB通路）、激素通路（雌激素与雄激素通路）、低氧通路、WNT通路、Hedgehog通路、STAT通路、Wint通路和抗细胞增殖通路（TGFβ通路）。而与凋亡相关的细胞幸存（PI3K／AKT）通路、DNA损伤／p53通路、热激通路和p38／JNK通路的相关基因水平变化较小。11．免疫组化结果显示，在正常子宫肌层细胞，c-Src阳性表达部位在细胞浆和细胞核周；在子宫肌瘤细胞，c-Src阳性表达部位在细胞核。在E2诱导的子宫肌瘤模型中，模型组豚鼠子宫肌细胞c-Src的阳性表达率明显高于正常对照组（p＜0.05），孕三烯酮2、4和8mg／kg组c-Src的阳性表达率降低（p＜0.05）。给予孕三烯酮0.1～1μmol／L后，细胞核着色淡，阳性反应程度和反应率降低。12．在转录水平，剥夺E2的肌瘤细胞中c-Src mRNA含量高于瘤旁子宫肌层细胞，孕三烯酮0.1～10μmol／L可以剂量依赖性方式降低肌瘤细胞中c-Src mRNA表达。13．蛋白水平：在E2诱导的豚鼠子宫肌瘤组织，c-Src和phospho-416Src蛋白含量明显高于正常对照组（P＜0.05），孕三烯酮2～8mg／kg可明显下调c-Src和phospho-416Src蛋白表达；在剥夺E2的子宫肌瘤细胞，c-Src mRNA蛋白含量明显高于瘤旁子宫肌层细胞（P＜0.05），孕三烯酮0.1～10μmol／L可以明显降低肌瘤细胞中c-Src和phospho-416Src蛋白表达（P＜0.05）。14．初步的免疫沉淀结果提示，在子宫肌瘤细胞中存在ER／c-Src的相互作用，孕三烯酮0.1和1μmol／L可能抑制ER／c-Src的相互作用。结论：1．性成熟的雌性豚鼠，双侧摘除卵巢后，皮下注射E2100μg／只，2次／周，连续12～16周，可成功建立豚鼠子宫肌瘤动物模型。2．孕三烯酮微球具有长效缓释作用。3．皮下注射孕三烯酮微球注射液在2、4和8mg／kg时以剂量依赖性方式抑制E2诱导的豚鼠子宫肌瘤形成，孕三烯酮的抗子宫肌瘤作用部分与其较强的抗雌激素作用有关。4．在剥夺E2的子宫肌瘤细胞，孕三烯酮可明显抑制子宫肌瘤细胞的生长，IC50值为26.7μmol／L。5．首次发现，在剥夺E2的肌瘤细胞，ER和PR的磷酸化修饰可以不依赖雌激素。孕三烯酮可在蛋白水平下调ER、PR及其磷酸化水平，在转录水平以不同方式调节ERmRNA和PRmRNA的表达。在外源E2存在时，孕三烯酮可下调ER、PR和PRB的表达。6．无论是否存在外源性E2，孕三烯酮均无明显诱导肌瘤细胞凋亡的作用，与RU486作用机制不完全相同。7．子宫肌瘤的形成可能与低氧、炎症、有丝分裂以及磷酸化信号通路活跃有关。首次发现，孕三烯酮可通过影响炎症、低氧、激素、有丝分裂以及磷酸化相关信号通路阻止肌瘤细胞增殖，而与细胞凋亡关系较小。8．首次发现，酪氨酸激酶c-Src的表达可能与子宫肌瘤形成有关，c-Src的高表达与可以不依赖于E2，但子宫肌瘤细胞中c-Src活性与E2有关。在子宫肌瘤发展的进程中，c-Src可能从胞浆向核内移位。孕三烯酮可在转录水平和蛋白水平下调c-Src的表达，降低其磷酸化水平，使c-Src活性降低。9．在子宫肌瘤细胞中存在ER／c-Src的相互作用，孕三烯酮对子宫肌瘤的抑制作用可能与抑制ER／c-Src相互作用有关。
童妍,吴晓青[10]（2006）在《中医药治疗子宫肌瘤的实验研究概况》文中提出
二、三种药物对体外培养子宫肌瘤细胞增殖凋亡及调控因子影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、三种药物对体外培养子宫肌瘤细胞增殖凋亡及调控因子影响（论文提纲范文）
（1）基于WNT/NF-κB双信号通路探讨橘荔散结丸对子宫肌瘤细胞的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 子宫肌瘤的现代医学研究 |
| 1.1.1 定义 |
| 1.1.2 发病机制 |
| 1.1.3 治疗措施 |
| 1.2 Wnt/ NF-κB双信号通路与子宫肌瘤 |
| 1.2.1 Wnt信号通路与子宫肌瘤 |
| 1.2.2 NF-κB信号通路与子宫肌瘤 |
| 1.2.3 Wnt和NF-κB信号通路的交联作用 |
| 1.3 中医对子宫肌瘤的认识 |
| 1.3.1 中医对子宫肌瘤病因病机的认识 |
| 1.3.2 中医对子宫肌瘤的辨证施治 |
| 1.4 橘荔散结丸治疗子宫肌瘤的研究 |
| 第二章 实验研究 |
| 1. 实验一 基于UHPLC-QE-MS技术的橘荔散结丸化学成分分析 |
| 1.1 试药 |
| 1.2 实验试剂及仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 结果 |
| 1.5 讨论 |
| 2. 实验二 人子宫肌瘤组织原代细胞培养及鉴定 |
| 2.1 病例来源 |
| 2.2 主要试剂、耗材及仪器 |
| 2.3 方法 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 3. 实验三 Wnt/NF-κB双信号通路交联调控子宫肌瘤细胞的机制研究 |
| 3.1 实验细胞 |
| 3.2 实验试剂和仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 结果 |
| 3.5 讨论 |
| 4. 实验四 橘荔散结丸对子宫肌瘤细胞的药效作用研究 |
| 4.1 实验细胞 |
| 4.2 实验试剂和仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 结果 |
| 4.5 讨论 |
| 5. 实验五 基于Wnt/NF-κB双信号通路探讨橘荔散结丸对子宫肌瘤细胞的作用机制 |
| 5.1 实验细胞 |
| 5.2 实验试剂和仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.4 结果 |
| 5.5 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
| 详细摘要 |
（2）基于“虚损生积”探讨益气消症方治疗子宫肌瘤大鼠的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTARCT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 研究背景 |
| 1 现代医学对子宫肌瘤的研究 |
| 1.1 雌、孕激素及受体与子宫肌瘤 |
| 1.2 血液流变学与子宫肌瘤 |
| 1.3 免疫失调与子宫肌瘤 |
| 1.4 平滑肌细胞增殖、凋亡与子宫肌瘤 |
| 2 中医学对子宫肌瘤的研究 |
| 2.1 病名 |
| 2.2 病因病机 |
| 2.3 治疗 |
| 3 导师从“虚损生积”立论,强调“虚瘀同治、攻补并济” |
| 3.1 “虚损生积”理论的来源 |
| 3.2 从“虚损生积”论子宫肌瘤 |
| 4 提出假说 |
| 第二章 实验研究 |
| 1 技术路线图 |
| 2 实验动物及材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要药物 |
| 2.3 主要仪器及试剂 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 分组与造模 |
| 3.2 药物干预 |
| 3.3 标本采集 |
| 3.4 指标检测 |
| 3.5 统计学方法 |
| 4 结果 |
| 4.1 益气消症方对子宫肌瘤模型大鼠一般状态的影响 |
| 4.2 造模及药物干预对子宫肌瘤模型大鼠体重、子宫重量、子宫系数的影响 |
| 4.3 益气消症方对子宫肌瘤模型大鼠子宫病理形态的影响 |
| 4.4 益气消症方对子宫肌瘤大鼠血液流变学的影响 |
| 4.5 益气消症方对子宫肌瘤大鼠免疫功能的影响 |
| 4.6 益气消症方对大鼠雌、孕激素受体(ER、PR)表达的影响 |
| 4.7 益气消症方对子宫肌瘤大鼠肌瘤组织细胞增殖、凋亡及周期分布的影响 |
| 4.8 益气消症方对子宫组织内Bcl-2、Bax及 Caspase-3 蛋白的影响 |
| 讨论 |
| 1 子宫肌瘤模型的建立 |
| 2 阳性对照药的选择 |
| 3 益气消症方治疗子宫肌瘤的理论依据 |
| 3.1 “虚损生积”是主要病机,益气扶正,祛瘀消症是根本治法 |
| 3.2 益气消症方的方药分析 |
| 4 益气消症方抗子宫肌瘤的作用机理 |
| 4.1 对大鼠一般状态、体重的影响 |
| 4.2 对大鼠子宫形态的影响 |
| 4.3 对大鼠血液流变学的影响 |
| 4.4 对大鼠免疫功能的影响 |
| 4.5 对大鼠子宫组织内雌孕激素受体的影响 |
| 4.6 对大鼠子宫平滑肌细胞凋亡及周期的影响 |
| 4.7 对大鼠子宫组织内Bax、Caspase-3、Bcl-2 蛋白表达的影响 |
| 结语 |
| 1 结论 |
| 2 创新点 |
| 3 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 伦理审查表 |
| 动物合格证 |
| 动物使用许可证 |
| 综述 扶正祛瘀法抗子宫肌瘤的实验研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）金雀异黄酮对子宫肌瘤的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 1.前言 |
| 2.实验方法和结果 |
| 2.1 Gs对去卵巢大鼠子宫的影响 |
| 2.2 Gs对体外培养人子宫肌瘤细胞的影响 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间已发表综述 |
| 参考文献 |
（4）民族医药防治肿瘤潜力与优势分析及基于P53-GADD45α通路研究土家药蜚蠊对肝癌细胞凋亡的调控机制（论文提纲范文）
| 第一部分 民族医药防治肿瘤潜力与优势分析 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一章 民族医学防治肿瘤理论认识 |
| 1.1 四大民族医学 |
| 1.2 壮族、土家族、彝族与瑶族医学 |
| 第二章 民族医药预防肿瘤潜力优势分析 |
| 2.1 未病先防-扶正御邪 |
| 2.2 既病防变-预防恶化 |
| 2.3 瘥后防复-减毒增效 |
| 第三章 民族医药治疗肿瘤潜力优势分析 |
| 3.1 药理研究 |
| 3.2 临床应用 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 基于P53-GADD45α通路研究土家药蜚蠊对肝癌细胞凋亡的调控机制 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 实验一 蜚蠊提取物含药血清大鼠饲养及含药血清细胞培养 |
| 1 材料与方法 |
| 实验二 蜚蠊提取物含药血清对肝癌细胞增殖和周期分布的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 实验三 蜚蠊提取物含药血清通过P53-GADD45 α通路调控肝癌细胞凋亡的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 特色创新 |
| 参考文献 |
| 总结与展望 |
| 附录一 缩略语对照表 |
| 附录二 文献综述 P53、GADD45α与肿瘤关系研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录三 致谢 |
| 附录四 个人简历 |
（5）基于经典Wnt/β-catenin信号通路探讨EGCG对人子宫肌瘤细胞作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 Abstract 引言 第一部分 文献研究 |
| 1. 子宫肌瘤概述 |
| 2. 子宫肌瘤的古代文献研究 |
| 3. 子宫肌瘤病因学研究 |
| 3.1 年龄 |
| 3.2 种族与基因 |
| 3.3 内分泌因素 |
| 3.4 月经与生殖因素 |
| 3.5 饮食 |
| 3.6 体力活动 |
| 3.7 肥胖 |
| 3.8 情志 |
| 3.9 吸烟 |
| 4. 绿茶及其提取物在临床应用新进展 |
| 4.1 绿茶及其提取物能降低心血管疾病的发病率 |
| 4.2 绿茶及其提取物能与骨质疏松之间的关系 |
| 4.3 绿茶及其提取物在口腔疾病中的应用 |
| 4.4 绿茶及其提取物在神经系统疾病中的应用 |
| 4.5 绿茶及其提取物能降低糖尿病患者的餐后血糖、保护肾脏 第二部分 人子宫肌瘤原代细胞的建立和鉴定 |
| 1. 目的与意义 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 第三部分 绿茶多酚对人子宫肌瘤细胞增殖及对经典Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt5b、β-catenin、EGFR的表达影响 |
| 1. 目的和意义 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 结语 参考文献 攻读学位期间发表的学术论文 致谢 统计学审核证明 |
（6）消瘤颗粒治疗子宫肌瘤的临床研究及对模型大鼠影响的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 理论研究 |
| 一.子宫肌瘤的西医病因病机及治疗进展 |
| 1.西医病因及发病机理 |
| 2.子宫肌瘤的西医治疗 |
| 二.子宫肌瘤的中医病因病机认识及治疗进展 |
| 1.中医学对子宫肌瘤病因病机的认识 |
| 2.中医药治疗子宫肌瘤现状 |
| 3.中医药治疗子宫肌瘤的实验研究进展 |
| 第二部分 临床研究 |
| 一.研究对象 |
| 二.研究方法 |
| 三.观察结果 |
| 第三部分 实验研究 |
| 一.实验材料 |
| 二.实验方法 |
| 三.结果与分析 |
| 第四部分 讨论 |
| 一.益气化瘀法治疗子宫肌瘤的立法依据 |
| 二.消瘤颗粒的组方特点 |
| 三.消瘤颗粒的临床疗效 |
| 四.消瘤颗粒的作用机理 |
| 五.本研究的不足与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 照片附图 |
| 致谢 |
| 附录1:综述 |
| 附录2:个人简历 |
（7）左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞体外增殖与凋亡的影响及机理研究（论文提纲范文）
| 一、中英文对照 |
| 二、摘要 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 三、前言 |
| 参考文献 |
| 四、研究内容 |
| 第一部分:人子宫平滑肌瘤细胞的原代培养与鉴定 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分:左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞体外增殖与凋亡的影响 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分:左炔诺孕酮抑制体外培养人子宫肌瘤细胞增殖及诱导凋亡的机制研究 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 五、小结 |
| 六、综述 |
| 七、致谢 |
（8）过氧化物酶体增殖体激活受体γ激动剂对人子宫肌瘤影响的实验研究及临床观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 论文正文 |
| 论文一 PPAR—г和TGF—в3在人体子宫肌瘤表达的意义以及体外分离培养的人子宫肌瘤细胞的生物学特性研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 论文二 PPAR—г激动剂罗格列酮对体外培养的人子宫肌瘤细胞的生物学效应的研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 论文三 罗格列酮对人体子宫肌瘤作用的临床观察 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 子宫肌瘤发病机制的研究进展 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 英文文章1 |
| 英文文章2 |
（9）孕三烯酮微球治疗子宫肌瘤药效学研究及作用机制探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| (一)子宫肌瘤发病的易感因素 |
| (二)子宫肌瘤相关基因的研究现状 |
| (三)子宫肌瘤的治疗 |
| (四)孕三烯酮 |
| 第一章 孕三烯酮微球长效作用研究 |
| 第一节 孕三烯酮微球猴体内释放时间的测定 |
| 第二节 孕三烯酮微球对SD大鼠性周期的影响 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 孕三烯酮微球对雌激素诱导豚鼠子宫肌瘤生长的抑制作用 |
| 第一节 雌激素诱导豚鼠子宫肌瘤模型的建立 |
| 第二节 孕三烯酮抑制豚鼠子宫肌瘤生长的药效学研究 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 孕三烯酮对体外培养人子宫肌瘤细胞的抑制作用 |
| 第一节 人子宫肌瘤细胞体外培养与鉴定 |
| 第二节 孕三烯酮对人子宫肌瘤细胞生长的抑制作用 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 孕三烯酮抑制子宫肌瘤作用机制探讨 |
| 第一节 孕三烯酮对子宫肌瘤雌、孕激素受体表达的影响 |
| 第二节 孕三烯酮对子宫肌瘤细胞周期的影响 |
| 第三节 孕三烯酮对人子宫肌瘤细胞基因表达谱的影响 |
| 第四节 孕三烯酮对子宫肌瘤c-Src和phospho-~(416)Src表达的影响 |
| 第五节 孕三烯酮影响人子宫肌瘤细胞ER/c-Src相互作用的初步研究 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 总结与展望 |
| 研究总结 |
| 创新与新发现 |
| 存在的不足 |
| 前景展望 |
| 综述:子宫肌瘤的药物治疗进展 |
| 在读期间发表论文和参与申请的专利 |
| 致谢 |
四、三种药物对体外培养子宫肌瘤细胞增殖凋亡及调控因子影响（论文参考文献）
- [1]基于WNT/NF-κB双信号通路探讨橘荔散结丸对子宫肌瘤细胞的作用机制[D]. 谢卓庭. 广州中医药大学, 2021(02)
- [2]基于“虚损生积”探讨益气消症方治疗子宫肌瘤大鼠的作用机制[D]. 司红红. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [3]金雀异黄酮对子宫肌瘤的影响[D]. 董艳北. 大理大学, 2019(01)
- [4]民族医药防治肿瘤潜力与优势分析及基于P53-GADD45α通路研究土家药蜚蠊对肝癌细胞凋亡的调控机制[D]. 王雪雁. 贵州中医药大学, 2019(02)
- [5]基于经典Wnt/β-catenin信号通路探讨EGCG对人子宫肌瘤细胞作用的研究[D]. 胡光云. 广州中医药大学, 2017(01)
- [6]消瘤颗粒治疗子宫肌瘤的临床研究及对模型大鼠影响的实验研究[D]. 朱澄漪. 南京中医药大学, 2008(08)
- [7]左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞体外增殖与凋亡的影响及机理研究[D]. 仇黎丽. 南京医科大学, 2008(01)
- [8]过氧化物酶体增殖体激活受体γ激动剂对人子宫肌瘤影响的实验研究及临床观察[D]. 张春华. 山东大学, 2007(03)
- [9]孕三烯酮微球治疗子宫肌瘤药效学研究及作用机制探讨[D]. 朱焰. 复旦大学, 2007(01)
- [10]中医药治疗子宫肌瘤的实验研究概况[J]. 童妍,吴晓青. 现代临床医学, 2006(04)