【摘要】 糖尿病(DM)是一组常见的内分泌紊乱的疾病,糖尿病导致的死亡率及与其相关的并发症的发病率逐年增加,使之已成为全球一个急待解决的重要问题,中医在治疗预防糖尿病中具有自己的优势.导师冯明清教授亦根据自己诊疗经验以及现代糖尿病的临床变化特点和对“脾虚致消”理论的研究认为其实质应是“脾虚不及游移精气”的理论,自制复脾汤在临床治疗中取得了良好的效果.并进一步从实验的角度探讨脾胃与消渴病发病机理的研究具有重要的意义.【关键词】 糖尿病 复脾汤 糖尿病大鼠胰腺 GCKmRNA 和GLUT２mRNA 表达的影响【中图分类号】R５８【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０１３７－０２
糖尿病(DM)是一组常见的内分泌紊乱的疾病,其基本病理生理改变是绝对或相对胰岛素分泌不足引起糖、蛋白质、脂肪、水及电解质的代谢紊乱.临床症状为多食、多饮、多尿、烦渴、善饥、消瘦或肥胖、疲乏无力为其主要症群. 病情严重者可威胁生命.糖尿病导致的死亡率及与其相关的并发症的发病率逐年增加,使之已成为全球一个急待解决的重要问题,如何防治糖尿病成为医学界所面临的重大课题.随着对消渴病研究的深入,不断有报道脾虚在其发病中占有重要地位.近年来,中医对糖尿病研究的重点亦集中在与中医脾胃的关系上. 导师冯明清教授亦根据自己诊疗经验以及现代糖尿病的临床变化特点和对“脾虚致消”理论的研究认为,糖尿病的病机多因脾气虚而致痰浊内生,瘀而为热,转为消渴,以虚为本,瘀为标[１].其实质应是“脾虚不及游移精气”的理论,在临床治疗中取得了良好的效果.但其作用机制的实验研究尤其是在分子生物学方面的研究却比较滞后.因此,进一步从实验的角度探讨脾胃与消渴病发病机理的研究具有重要的意义.
１．１ 实验材料
１．１．１ 动物:健康成年Wistar大白鼠,体重１８０g~２２０g,全部为雄性,由郑州大学实验动物中心提供.
１．１．２ 试剂:造模药物链脲佐菌素(STZ),SIGMA．USA 产品.１．１．３ 中药:人参１０g,黄芪１２g,茯苓１２g,五味子１２g,山药１２g,麦冬１０g,生地１０g,以上药物均煎制成含生药２g/ml煎液备用,由河南中医学院医院制剂室提供.
１．１．４ 方义:人参、黄芪,健脾益气,扶正固本为君药;山药、茯苓,补脾气,除湿浊为臣药;麦冬、生地,养胃阴,泻瘀火为佐药;五味子滋肾水,纳元气亦为佐药.１．１．５ 实验仪器:７２１型分光光度仪(上海第三仪器厂生产);电子天平(上海电子仪器厂);双目光学显微镜OLYMPUSBH 系列(日本生产);自动显微照相装置OLYMPUSPM－１０－３５A－Ⅰ型(日本生产);One—touch血糖仪(美国强生公司生产);普通组织切片机;定量可调移液器WS２－２６１－７９(上海精密仪器厂);WS２－２６１型电热恒温水浴箱(北京长安科学仪器厂).
１．２ 动物模型建立与分组 选取健康雄性Wistar大白鼠４０只,随机选１０只为正常对照组,其余３０只大鼠按照有关文献[２]的造模方法,于造模前１２h禁食水,然后以４０mg/kg的STZ左下腹腔注射,注射前用０．１mol/L无菌枸橼酸— 枸橼酸钠缓冲液(PH４．５)配制,注射１次.７２h后,尾部取血测血糖值,大于l１．１mmo１/L,并其有明显的多饮、多食、多尿症状者为造模成功,共２４只. 造模前随机抽取的l０只为正常组(A 组),造模成功的２４只随机分为模型组(B组)、治疗组(C组),每组l２只.其中正常组(A 组)和模型组(B组)每日生理盐水５ml灌胃;治疗组(C组)每日复脾汤生药煎剂５ml灌胃,每日一次,以上各组每周取血一次,测血糖.于一月后取血及胰腺组织,做相应指标测定,后断头处死(处死前１０h禁食水).
１．３ 观察指标及方法 取材:血,胰腺组织.指标测定:用One－touch血糖仪检测血糖;用原位杂交法测定GCKmRNA 表达和GLUT２mRNA 的表达. １．４ 原位杂交技术路线 具体方法如下[２]:石腊切片厚度５um,裱于用防脱片剂APES处理过的载玻片上,置入４５℃温箱烤片２４h;(２)切片常规脱蜡至水;(３)磷酸缓冲液(PBS．０．１MOL．PH７．４)冲洗５min/次×２;(４)滴加蛋白酶K,消化５min,PBS洗５min/次×２;(５)吸干切片周围水分,滴加０．３％H２O２ 室温１５min以灭活内源性酶,PBS洗５min/次×２;(６)吸干切片周围水分,滴加末端标记酶置湿盒内３７℃水浴１h,PBS洗５min/次×３;(７)滴加抗荧光抗体,置湿盒内３７℃水浴３０min,PBS洗５min/次×３;(８)DAB显色１０min,蒸馏水洗;(９) 甲基绿复染１０min,蒸馏水洗;(１０)正丁醇脱水×３;(１１)二甲苯透明×２;(１２) 树脂胶封固;(１３)显微镜观察. １．５ 统计学处理 所有统计工作均经计算机采用SPSS１３．０软件进行统计分析处理,计数资料所有数据以均数(`x)±标准差(S)表示.组间检验采用t 检验. ２ 结果各组大鼠空腹血糖的比较
３ 讨论?
素问??阴阳别论?云:“二阳结,谓之消”、“二阳之病发心脾———传为风消”;?灵枢??五邪?云:“邪在脾胃,则病肌肉痛,阳气有余,阴气不足,则热中善饥”;?灵枢??师传?亦云:“胃中热则谷消,令人悬心善饥”;在?素问??脉要精微论?中又结论性地指出:“瘅成为消中”.这些论述都说明,消渴病的发病部位与二阳(胃、大肠)与脾密切相关,脾胃是导致消渴病发生的重要脏腑. 基于对消渴病病因、病机和发病的认识,运用益气健脾和胃法治疗消渴病也为现代医家所重视.各种从脾胃治疗消渴病的现代临床报道层出不穷,取得了一定的疗效,也积累了大量的经验. 从表１可以看出,在开始实验时,B组、C组大鼠的血糖极其明显的高于A 组,说明在开始实验时造模成功,实验是有意义的.在经过二周的治疗后,C组大鼠的血糖水平尽管与A 组相比仍有一定的差距,但已显著低于B组.在第四周末,这种趋势得到了进一步的加强,说明复脾汤具有一定的降低血糖作用.这应该是与其影响了脾胃的主运、主化,“布精散微”和降浊功能有关. 从表２我们可以看出,A 组、C组和B组相比,大鼠胰腺组织中的GCK 和GluT２的表达有极显著的意义(P＜０．０１).显微镜下观察和对比,可以发现A 组和C组胰腺组织中β细胞的细胞核比B组的颜色要深,而且数目要多,说明复脾汤能够通过某些机制来干预其表达,进而影响胰岛素的合成.而GluT２表达的多少则影响着胰岛素的释放.从中医上我们认为这是脾虚不运即脾胃气虚不能运化水谷. 综上所述,复脾汤能促进脾胃的运化功能、调整脾胃所化生的血液成分、改善病鼠的糖代谢,反证了糖尿病存在着一定的“脾胃气虚、脾虚不运”的机理. 参考文献[１] 梁光宇．冯明清教授治疗糖尿病学术思想简介．河南中医,２０００,２０(１):１５． [２] 温进坤,韩梅主编．医学分子生物学理论与研究技术．北京:科学技术出版社,２００２:８０．
论文作者:任彬彬
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年12月供稿
论文发表时间:2016/3/2
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