【摘 要】随着社会的进步与发展，经济、文化全球化的进程加剧，我国在与世界不断接轨的过程中，开展了现代化的建设。面对不断涌现的外商独资企业与中外合资企业，市场竞争的日益严重，给我国本土企业带来了巨大冲击，人们的日常工作、生活、学习压力不断增大，因此，对医疗卫生业的建设与发展应格外重视。越来越多的先进设备、技术以及理念不断被引入，药品作为医疗卫生行业的基础及依据，更是应该得到重视。双黄连口服液作为日常生活中最为常见的药品之一，其主要成分以及含量都是人们所关心的，因此，本文应用HPLC对双黄连口服液的主要成分含量进行了测定，通过先准备仪器与试药，方法分析，方法学考察，来得出结论。
【关键词】HPLC；仪器试药；方法分析
HPLC即高效液相色谱法也可称之为高压液相色谱、近代柱色谱、高分离度液相色谱等。是色谱分析法的一个分支，也是其中最为重要的一部分，是采用高压输液系统，将液体作为流动相，是极性不同的单一溶剂、不同比例的混合溶剂、缓冲液流入装有固定相的色谱柱，成分在柱内分离，最后进入检测器检测。目前，该方法已被广泛应用到医学、农业、化学、工业等领域。
双黄连口服液作为人们日常工作、生活中最为常见的药品之一，主要是由金银花、连翘、黄芩，并通过传统水提醇沉精制而成，主要用于病毒和细菌引发的感冒、流行性感冒以及气管炎、肺炎、扁桃体发炎等炎症。金银花、连翘为主要原料，连翘苷、牛蒡子苷在连翘中占有微量成分。金银花中含有微量灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙。《中国药典》2010年版用高效液相色谱法对双黄连口服液中的黄芩苷、连翘苷和绿原酸的含量进行过测定，但是其检验方法过于繁琐。如今，质谱技术发展迅速，中药控制多采用LC-MS技术。通过建立双波长高效液相色谱法梯度洗脱方法，对双黄连口服液中的主要成分含量进行测定，该方法具有更高的准确性、快速性、便捷性、灵敏性以及精密性。
一、仪器与试药
1.仪器
CPA225D电子天平（赛多利斯公司）
Agilent1260高效液相色谱仪，HP1100型二极管阵列检测器（安捷伦科技有限公司）
2.试药
黄芩苷、绿原酸、连翘苷对照品（中国食品药品检定研究院）
甲醇为色谱纯试剂（迪马科技公司）
磷酸为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）
试验用水为二次蒸馏的纯化水
二、方法
1.色谱条件与系统用性试验
用先进的Hedera ODS-2色谱柱（4.6mmx250mm，5μm），流动相A用0.2%的磷酸水溶液，流动相B用甲醇，梯度洗脱程序：0-5min，20%→30%B；5-35min，30%→45%B；35-50min，45%→70%B；50-55min，70%→20%B；55-60min，20%B。流速1.0ml/min，检测波长324nm、280nm，柱温为30℃，进样量为10μl。各组的分离度以及拖尾因子曾莹控制在0.95到1.05内。
2.混合对照品贮备液的制备
将绿原酸分别取两份25.12mg，放在25ml的瓶子内，同样的，连翘苷也分别取两份20.22mg放在25ml瓶子内。并用50%的甲醇稀释至刻度，分别取两份29.95mg的黄芩苷，每份各取5ml放在同一个容量为100ml的瓶子内，并用50%的甲醇制成每毫升含有绿原酸50.24μg、黄芩苷299.5μg、连翘苷20.22μg的溶液，作为对照品贮备液。
3.供试品溶液的制备
提取1ml的双黄连口服液并放在容量为50ml的瓶子内，加入适量浓度为50%的甲醇，并进行十五分钟的超声处理，再加入浓度为50%的甲醇至刻度，充分摇匀后，用0.45μm的空进行过滤。
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三、方法学考察
1.线性关系考察
分别取出0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml的对照品储备溶液，分别放在五个容量同为10ml的瓶子内，并加入浓度为50%的甲醇适量稀释至刻度，并充分摇匀。将每一份溶液取10μl分别放入高效液相色谱仪中，每个浓度进一针，以此记录峰面积。并将各个对照品的浓度作为横坐标，将其所对的峰面积作为纵坐标，进行线性回归。其结果可以表明双黄连口服液中的绿原酸、黄芩苷、以及连翘苷在试验范围的浓度内线性关系呈良好。
2.溶液稳定性试验
精密量取混合对照品贮备溶液5.0ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。分别于溶液配制完成后0小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时精密量取10μl注入高效液相色谱仪，每个时间点进样一针，记录峰面积。计算6针峰面积之间的相对标准偏差（RSD%），黄芩苷、绿原酸、连翘苷6次测定峰面积的RSD分别为0.56%、0.22%、0.64%。结果表明：黄芩苷、绿原酸、连翘苷混合溶液在8小时内基本稳定。
3.专属性试验
按照双黄连口服液的处方，用黄芩提取物、连翘提取物、金银花提取物，分别按照缺其中一种提取物的方法，进行药剂制作，并按照溶液制备的方法制出缺一味的空白溶液，从中取出10μl放入高效液相色谱仪中，记录相应的峰面积。其实验结果表明专属性良好。
4.两种含量测定方法结果比较
在市场中所售卖的双黄连口服液中分别提取三个批次的样品，并采用《中国药典》2010年版中的双黄连口服液中主要成分含量的测量方法和本次研究的方法对三瓶药品进行测定，结果表明，本次研究所测量的双黄连口服液中主要成分即绿原酸、黄芩苷、连翘苷的含量与《中国药典》2010版中的结果相同。
四、得出结论
1.双黄连口服液的化学成分研究甚多，但多集中于运用HPLC技术来检测并追踪化学成分，并对制剂中具较强紫外吸收且含量较高的成分进行定量分析，但对弱紫外吸收，含量较低且较难分离的成分含量测定分析时则相对困难。作者经过查阅文献发现，目前尚未见到报道用液-质串联的方法同时检测双黄连口服液中多种微量成分含量的报道，本实验首次使用LC-MS/MS联用技术，对双黄连口服液中多种微量成分进行了同时测定。
2.本实验同时选用正离子模式测定4种成分的含量，且分子离子峰均为[M+Na]+。实验过程发现这四种物质[M+Na]+丰度强且稳定。MS/MS亦发现稳定且灵敏度高。
3.本实验建立的液-质联用方法，可在短时间内快速分离检测双黄连口服液中牛蒡子苷、连翘苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙4种微量成分，该方法经考察，准确，快捷，重现性好，符合中药制剂的相关分析要求，可用于双黄连口服液的质量控制。
4.中药制剂定性、定量研究最初为单一指标性成分，随着以色谱质谱联用为代表（LC-MS/MS）的各种分析仪器、分离手段和计算机技术的迅速发展，目前，中药制剂化学成分定[LL]性、定量研究已经广泛采用多指标成分，为阐明中药的物质基础提供了重要手段。由此可见，不断应用新理论、新方法和新技术将会有力的推动中药的现代研究，大大加快对中药物质基础与质量控制的研究。
五、结语
HPLC---高效液相色谱法作为目前应用最为广泛的测量方法，拥有高效、便捷、精确等特点，本次研究通过制备混合对照品贮备液、供试品溶液，进行了线性考察，稳定性考察，专属性考察，并将通过HPLC所测定的双黄连口服液中主要成分含量与《中国药典》2010版中所测定的双黄连口服液中主要成分含量进行了对比，从而得出两种方法所测定的双黄连口服液中主要成分的含量相同。
参考文献
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[4]. 朱红艳. HPLC/MS法检测双黄连口服液中有效成分的分析[J]. 临床医药文献电子杂志, 2017(62).
论文作者:曹兴宇,肖萧
论文发表刊物:《世界复合医学》2018年第06期
论文发表时间:2018/7/31
标签：口服液论文; 连翘论文; 双黄连论文; 含量论文; 黄芩论文; 色谱论文; 高效论文; 《世界复合医学》2018年第06期论文;