辽宁省阜新市药品检验所 123000
【 中 图 分 类 号 】 Ｒ２８６【 文 献 标 识 码 】 Ａ【 文 章 编 号 】 １５５０ －１８６８（ ２０１６） ０４
摘 要：目的 建立高效液相色谱法测定养心安神丸中酸枣仁皂苷A含量的方法，并验证该方法在养心安神丸质量控制中应用的可行性和技术适用性。方法 采用Welch C18柱，流动相为乙腈- 0.2%甲酸溶液（30:70），检测器为蒸发光检测器，柱温35℃，进样量10μL，流速：1.0 mL/min。结果 酸枣仁皂苷A的回归方程为lgY=1.626lgX+ 3.0453，r=0.9999，平均收率为98.69%，RSD为1.51%（n=6）。结论: 本次试验方法简便，灵敏度高，重复性好，可作为养心安神丸的质量控制方法。
关键词：高效液相色谱法；养心安神丸；酸枣仁皂苷A；含量测定
Determination of Yangxinanshen pills of Jujuboside A by HPLC
Abstract: Objective HPLC method yangxinanshen pills Jujuboside A method for the determination, and verify the feasibility and applicability of the method in technical support Anshen Pill quality control applications. Methods Welch C18 column using a mobile phase of acetonitrile - 0.2% formic acid solution (30:70), the detector is an evaporative light detector, column temperature 35 ℃, injection volume 10μL, flow rate: 0.6mL / min. Results Jujuboside A regression equation was Y = 1622.6X + 3.0453, r = 0.9999, the average yield was 98.69%, RSD was 2.51% (n = 6). Conclusion This test method is simple, sensitive, reproducible and can be used for quality control yangxinanshen pills.
Key words: HPLC; Yangxin Anshen pill; Jujuboside A; Determination of content
调查表明，我国有四成半的人存在睡眠障碍。急剧上升的失眠症患者不仅影响着人们的健康，也导致了很多社会问题。养心安神丸可补肾益智，养心安神。用于心肾不交引起的少眠多梦，头晕心悸，耳鸣健忘，倦怠无力。其处方中，酸枣仁养心安神，而且酸枣仁及酸枣仁皂苷的安神药理作用已有诸多报道，但其制剂标准中并未对其进行含量测定，因此为了更科学地控制养心安神丸的质量，本文对其酸枣仁皂苷A的含量进行了测定，为其质量控制提供科学有效的方法。
1 仪器与材料
Waters e2695-2424高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Welch C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱（美国Welch公司）；Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱（美国Dikma公司）；AB204-N电子天平（十万分之一）（德国METELER公司）；BT25S电子天平（万分之一）（德国Sartorius公司）；超声波清洗仪（宁波新芝生物科技公司）。
对照品酸枣仁皂苷A（批号110734-200509）购自中国药品生物制品检定所；乙腈（色谱纯）（天津市康科德科技有限公司）；甲酸（分析纯）（天津市康科德科技有限公司）；纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）。
实验中所用养心安神丸购自北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂，批号：2013310301。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Welch C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈- 0.2%甲酸溶液（30:70），检测器为蒸发光检测器，柱温35℃，进样量10μL，流速：1.0mL/min；ELSD检测参数：漂移管温度为50 ℃，气体压力：25 psi；理论塔板数按酸枣仁皂苷A计算应不低于2000。上述色谱条件下，各组分分离度良好，色谱图见图 1。
图1 混合对照品（A）、供试品（B）及阴性样品（C）HPLC图
Fig.1 HPLC chromatogram of mixed standard and sample
2.2 对照品溶液的制备
精密称取酸枣仁皂苷A对照品适量，置量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得酸枣仁皂苷浓度为101μg/mL的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取养心安神丸，剪碎，混匀后精密称取l0g，加入两倍量的硅藻土，研匀，精密称定置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理60 min，放冷至室温，称重并补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照试验
按养心安神丸制备工艺制备缺酸枣仁药材的阴性样品，并照"2.3"项下处理方法制成阴性对照品溶液，备用。供试品溶液、阴性对照品溶液，标准品对照溶液各10μL分别进样，结果表明，在与酸枣仁皂苷A对照品色谱峰的相应位置上，供试品色谱图中显示相同保留时间的色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间处无色谱峰出现，表明阴性对照液无干扰，见图1。
2.5 线性关系考察
取对照品溶液，分别按2.1项下的色谱条件，进样2,4,6,8,10,20μL，记录相应的色谱峰面积，以峰面积的对数为纵坐标（Y），对照品浓度的对数为横坐标（X）进行线性回归。结果显示，酸枣仁皂苷A的回归方程为lgY=1.6261lgX+ 3.0453，r=0.9999，表明酸枣仁皂苷A在0. 3944~3.9344μg范围内与峰面积的对数值呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
取同一对照品溶液，连续进样6次，每次进样量为10μL，记录色谱峰峰面积，计算得酸枣仁皂苷A峰面积的RSD为1.01%，表明仪器精密度良好。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于制备后 0、3、6、9、12、24h进样，记录色谱峰峰面积，计算得酸枣仁皂苷A峰面积的RSD为1.85%，表明供试品溶液在24h内稳定。
2.8 重复性试验
取同一批号样品6份，按“2.3”项下制备，进样测定，计算得酸枣仁皂苷含量的RSD 为1.98%。
2.9 加样回收率试验
称取已知含量的供试品约0.5g，共6份，精密称定，分别加入含酸枣仁皂苷A19.72μg/mL的混合对照品溶液2.0、2.5、3.0mL，制备供试品溶液，测定，计算得酸枣仁皂苷A的加样回收率为98.25 %、99.06%、98.40%、99.63%、98.58%、98.19%，平均收率为98.69%，RSD为1.51%。
2.10 耐用性试验
分别考察水相pH值变化±0.1、柱温变化±5℃、各变波长点检测波长变化±5nm、体积流量变化±20%，以及采用2根不同色谱柱（Diamonsil C18柱、Welch C18柱）进行测定时，仪器色谱行为的变化。检测同一批养心安神丸中酸枣仁皂苷A的量及其RSD，并考察其分离度、拖尾因子、理论塔板数，各条件下所测含量的RSD均在2.0%以内，分离效果理想。因此，养心安神丸中酸枣仁皂苷A成分定量测定条件较宽，具有较好的耐用性。
2.11 样品测定
精密称取3批养心安神丸样品，每批取3份，按“2. 3"项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进行分析，进样量10μL，测定酸枣仁皂苷A的峰面积，计算酸枣仁皂苷A的含量，结果见表1。
表1 养心安神丸中酸枣仁皂苷A的含量（n=3）
3 讨论
预试验时，在初步选择流动相时，首先选择了甲醇和水、乙腈和甲酸水两种流动相，经对比，乙腈和甲酸水作流动相时色谱图的基线更为平稳,色谱峰较窄,柱压低。因而拟定乙腈和甲酸水溶液作为流动相。之后又进行了三种不同浓度甲酸水做流动相的对比，分别为0.1%甲酸水、0.2%甲酸水、0.5%甲酸水，经过对比发现0.2%甲酸水作流动相时分离效果最佳，峰形好，出峰时间适中，故最终选定乙腈-0.2%甲酸水作为本实验的流动相。
为了更好，更充分的提取药材中的成分，提取方法一般有：煎煮法、浸渍法、渗漉法、热回流法和超声法等。预试验时，采用了浸渍法、渗漉法、热回流法和超声法四种方法对提取方式进行了粗考察，结果证明浸渍法和渗漉法提取率较低，且耗时较长。故本实验共采用超声和热回流两种方法对提取方式进行更系统的考察，结果显示，以超声为提取方式的溶液相对峰面积较大，含量较高，且方法简便，易于操作，故最终选取超声的方式对养心安神丸进行提取。提取时间直接决定着提取的充分与否，故预实验共选取了3个时间对提取时间进行考察，分别为用甲醇溶液超声提取30 min、40 min、60 min，结果显示，提取时间为60 min的溶液相对峰面积较大，含量较高，提取的更加充分，故最终选择60 min作为养心安神丸的提取时间。
药品制备工艺的科学性和质量标准的可控性，是制剂发挥疗效的基础。此含量测定方法的建立，能有效地控制养心安神丸的药品质量，同时也可用于其他含酸枣仁的药物制剂含量测定。
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论文作者:褚晶晶
论文发表刊物:《医药界》2016年4月第4期
论文发表时间:2016/6/23
标签：色谱论文; 酸枣仁论文; 养心论文; 溶液论文; 皂苷论文; 含量论文; 甲酸论文; 《医药界》2016年4月第4期论文;