汤劐菱[1]2004年在《参附注射液对缺氧复氧损伤心肌的保护作用及分子机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景和目的: 随着多种血管再通技术在临床的广泛应用,心肌缺血再灌注损伤(Ischemia/reperfusion injury,IRI)己越来越受到广大科研工作者的重视。探索心肌缺血再灌注损伤的机制和防治措施,已成为当今医学研究的热点之一。 参附注射液由红参和黑附片提取物组成,主要含有人参皂甙和其它有效成分;是叁九药业集团独创产品,属国家中药保护品种。临床广泛用于心血管疾病,尤其是冠心病、心肌梗死等急症,其用药效果除迅速改善心绞痛、心肌缺血症状外,还在于有效保护或改善缺血再灌注损伤心肌,且疗效较好。但关于其作用机制还未见报道。 本实验利用SD大鼠的乳鼠培养心肌细胞,并建立心肌细胞缺氧复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)损伤模型,通过细胞存活率、细胞活力、细胞凋亡率、细胞内游离钙离子浓度、细胞内热休克蛋白(Heat Shock Proteins,HSPs)70表达量和细胞内核因子-κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)活性变化等指标的检测,观察缺氧复氧对心肌细胞的影响,在此基础上观察参附注射液(ShenFu Injection,SH)对缺氧复氧损伤心肌细胞的保护作用,并对其可能的作用机制进行初步探讨,从而为其临床应用及研究提供理论和实验基础。
汪芳[2]2015年在《毛冬青皂苷E对心肌缺血再灌注损伤的影响及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:毛冬青皂苷E为毛冬青药材中的皂苷类活性成分,本课题组前期的实验结果表明,毛冬青皂苷E可提高缺氧/复氧心肌细胞存活率,减少细胞内心肌酶外漏和活性氧的生成,提高SOD活性,同时降低MDA活性,从而抑制细胞凋亡率,其心肌保护作用与抑制Caspase-3凋亡蛋白的表达有关。然而,目前未见文献报道毛冬青皂苷E影响心肌缺血再灌注损伤的在体研究。本课题通过建立H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,比较毛冬青皂苷E与上市的同类中药注射剂对心肌细胞的体外保护效果,并以细胞内ROS水平和Caspase-3、Cleaved caspase-3、Bc1-2、Bax等凋亡相关基因蛋白的表达为指标探讨其保护机制,再以大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的在体实验验证其作用,为毛冬青皂苷E的成药性研究及新药开发提供支持。方法:1.毛冬青皂苷E与上市的同类中药注射剂对大鼠H9c2心肌细胞H/R损伤的保护作用比较。H9c2心肌细胞随机分为空白对照组(Control组);缺氧/复氧模型组(H/R组);H/R+毛冬青皂苷E低、中、高剂量(10、50、250μg/mL)组;H/R+丹参多酚酸盐低、中、高剂量(5、10、20μg/mL)组;H/R+毛冬青注射液低、中、高剂量(0.2、2、20μL/mL)组;H/R+注射用红花黄色素低、中、高剂量(0.2、2、20μg/mL)组;H/R+注射用血栓通低、中、高剂量(4、20、100 μg/mL)组;H/R+参附注射液低、中、高剂量(0.2、1、5μL/mL)组;H/R+丹红注射液低、中、高剂量(0.2、1、5μL/mL)组;H/R+生脉注射液低、中、高剂量(0.2、1、5μL/mL)组。各给药组于造模前24h给予相应浓度的药物预处理,缺氧4h,复氧4h后,采用CCK-8法检测心肌细胞存活率。2.毛冬青皂苷E抑制大鼠H9c2心肌细胞H/R损伤的机制研究。H9c2心肌细胞随机分为空白对照组(Control组);缺氧/复氧模型组(H/R组);H/R+毛冬青皂苷E低、中、高剂量(10、50、250 μg/mL)组。造模前24h给予相应浓度的药物预处理,缺氧4h,复氧4h后,采用H2DCF-DA荧光探针检测心肌细胞活性氧(ROS)含量,并采用蛋白印迹法(Western Blot)检测 Caspase-3、Cleaved caspase-3、Bcl-2 和 Bax等相关凋亡蛋白的表达。3.毛冬青皂苷E对大鼠在体MI/R损伤的保护作用研究。将SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组);缺血再灌注模型组(Model组);毛冬青皂苷E低剂量+I/R组(10mg/kg,EL+I/R 组);毛冬青皂苷 E 高剂量+I/R 组(40mg/kg,EH+I/R组);丹参多酚酸盐+I/R组(43mg/kg,Salvianolate+1/R组)。大鼠在结扎前10min尾静脉注射相应浓度的药物,结扎30min,再灌注4h后,采用Evans-blue和TTC双染法,测量心肌梗死面积和缺血面积,取血清,测定血清中LDH、AST、CK-MB、IL-6和CRP的含量。结果:1.毛冬青皂苷E与上市的同类中药注射剂对大鼠H9c2心肌细胞H/R损伤的保护作用比较。与Control组比较,H/R组存活率有显着降低,有高度统计学意义[(52.57±4.33)%vs.(100.00±8.41)%,P<0.01)];与H/R组比较,各药物组的存活率均有所升高,其中毛冬青皂苷E对H/R损伤的H9c2心肌细胞的保护作用优于注射用红花黄色素(P<0.05),与丹参多酚酸盐、毛冬青注射液、注射用血栓通、参附注射液、丹红注射液和生脉注射液6种中药心血管注射剂的H9c2心肌细胞存活率差异均无统计学意义(P>0.05)。2.毛冬青皂苷E对H/R损伤的H9c2心肌细胞内ROS含量和Caspase-3、Cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白表达的影响。与Control组比较,H/R组的相对荧光强度有高度统计学意义[(164.37±7.46)%vs.(100.00±8.26)%,P<0.01];毛冬青皂苷E低剂量组的相对荧光强度为(151.99±9.84)%,与H/R组比较,差异无统计学意义(P>0.05),毛冬青皂苷E中、高剂量组的相对荧光强度分别为(138.97±8.37)%、(140.31 ±3.21)%,与H/R组比较,差异均有高度统计学意义(P<0.01)。与 Control 组相比,H/R 组的 Caspase-3、Cleaved caspase-3、Bax 蛋白表达水平均显着升高,Bcl-2蛋白表达水平显着下降,都有高度统计学意义(P<0.01);与H/R组相比,毛冬青皂苷E各给药组Caspase-3、Cleaved caspase-3和Bax蛋白表达水平均下降,有统计学意义(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显着升高,有高度统计学意义(P<0.01),并且各给药组的Bcl-2/Bax蛋白表达水平较H/R组均有显着升高(P<0.05)。3.毛冬青皂苷E对大鼠在体MI/R损伤后梗死面积和血清中LDH、AST、CK-MB、IL-6和CRP含量的影响。与Sham组比较,Model组的IS/AAR有显着升高,差异具有高度统计学意义[(41.55±8.99)%,P<0.01]。毛冬青皂苷E低、高剂量组和丹参多酚酸盐组的 IS/AAR 值分别为(25.89±9.33)%、(20.49±6.55)%、(19.66±2.58)%,与Model组比较,各给药组的IS/AAR差异均有高度统计学意义(P<0.01),且毛冬青皂苷E与阳性药(丹参多酚酸盐)的IS/AAR无显着性差异(P>0.05)。Model组的LDH、AST、CK-MB、IL-6 和 CRP 含量分别为(11093.05±639.71)U/L、(60.95±10.54)U/L、(4.85±0.49)ng/mL、(32.36±2.53)ng/L和(2.49±0.19)mg/L,较 Sham组[(8387.65±769.88)U/L、(12.88±0.99)U/L、(3.88±0.15)ng/mL、(25.20±2.12)ng/L、(1.73±0.15)mg/L]均有显着升高,差异均有高度统计学意义(P<0.01),毛冬青皂苷E给药组的LDH、AST、CK-MB、IL-6和CRP的含量均低于Model组,其中尤以毛冬青皂苷E高剂量组[(8696.46±1103.49)μ/L、(40.51 ±7.09)U/L、(3.80±0.17)ng/mL、(27.40±4.76)ng/L、(2.13±0.36)mg/L]下降的更明显,且与丹参多酚酸盐组[(9177.57±1016.95)U/L、(38.75±8.66)U/L、(3.87±0.54)ng/mL、(27.75±4.08)ng/L、(2.16±0.25)mg/L]下降程度相似。结论:1.毛冬青皂苷E对心肌细胞的体外保护效果与上市同类中药注射剂相似。2.毛冬青皂苷E可减少ROS的含量,抑制凋亡相关基因蛋白Caspase-3、Cleaved caspase-3和Bax的表达,升高Bcl-2的表达,从而减轻H/R诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡。3.毛冬青皂苷E预处理可减少心肌梗死面积和血清LDH、AST、CK-MB、IL-6和CRP的含量,对I/R损伤的心肌有一定的保护作用,其保护效果与阳性药(丹参多酚酸盐)类似。
马周瑞[3]2008年在《参附注射液预处理对缺氧/复氧心肌细胞延迟性保护作用的实验研究》文中研究指明目的:研究参附注射液预处理对缺氧/复氧心肌细胞的延迟保护作用的量效、时效关系并探讨其可能机制。方法:本实验采用原代培养的新生SD大鼠心肌细胞,建立细胞缺氧/复氧模型。采用细胞存活率和凋亡率(流式细胞术)、培养液中LDH活性(细胞LDH漏出率,全自动生化分析仪测定)、细胞培养液中MDA活性(细胞MDA漏出率,硫代巴比妥钠比色法)作为细胞受损指标,观察终浓度为100、200、400μl/ml的参附注射液预处理以及预处理6、12、24、48、72、96h后对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响,并同时观察ERKs上游激酶MEK-1/2抑制剂PD098059及反义HIF-1α对参附注射液预处理诱导的心肌细胞延迟性保护作用及其诱导的HIF-lα表达的影响。具体实验分组如下:1.参附注射液预处理对缺氧/复氧心肌细胞的延迟保护作用的量效关系的实验研究:培养的细胞随机进入各实验分组:①空白对照(Control)组:细胞置于培养箱内继续培养28(2+24+2)h;②缺氧/复氧(H/R)组:细胞缺氧2h后复氧,常氧培养2h;③缺氧预处理(HPC)组:细胞缺氧20min,复氧后置培养箱内常氧培养24h,然后再进行H/R操作;④～⑥100μl/ml、200μl/ml、400μl/ml参附注射液预处理(SF-100、SF-200、SF-400)组:含不同浓度(100μl/ml、200μl/ml、400μl/ml)参附注射液的无血清培养基预孵育细胞10min,更换预平衡的无血清培养基后置培养箱内常氧培养24h,然后进行H/R操作。2.参附注射液预处理对缺氧/复氧心肌细胞的延迟保护作用的时效关系的实验研究:采用实验1确定的最佳预处理浓度(200μl/ml),按如下分组进行实验:①Control组,②H/R组,③HPC组,④～⑨参附注射液预处理后6h、12h、24h、48h、72h、96h缺氧/复氧(SF-6、SF-12、SF-24、SF-48、SF-72、SF-96)组。3.反义HIF-1α及ERK通路抑制剂PD098059对参附注射液预处理诱导的心肌细胞延迟性保护作用的影响的实验研究:采用实验1确定的最佳预处理浓度(200μl/ml)预处理心肌细胞并在实验2确定的最佳保护作用时段(预处理后12h)内进行H/R操作,具体分组如下:①Control组,②H/R组,③HPC组,④参附注射液预处理(SF)组,⑤参附注射液+反义HIF-1α(SF+iHIF-1α)组:参附注射液预处理前用含5.0μmol/L的反义HIF-1α培养基预孵育细胞10min,其余步骤同④;⑥参附注射液+ PD098059(SF+PD098059)组:参附注射液预处理前用终浓度为50μmol/L的PD098059预孵育细胞10min,其余步骤同④。取①③④⑥组细胞进行Western Blot检测心肌细胞HIF-1α蛋白表达量。结果:1.与对照组相比,H/R组细胞存活率降低34.20%而凋亡率增加22.15%(p<0.05),LDH和MDA漏出率分别增加110.26%、51.22%(p<0.05)。而HPC组与H/R组相比,细胞存活率增加22.16%,凋亡率降低11.34%(p<0.05),LDH和MDA漏出率分别减少70.77%、37.43%(p<0.05)。2. 100、200、400ul/ml浓度参附注射液预处理组较H/R组相比,细胞存活率分别增加5.90%、20.20%、20.86% (p<0.05),凋亡率分别降低8.29%、8.59%、8.44%(p<0.05),LDH和MDA漏出率分别减少34.52%、58.50%、52.74%和27.72%、33.71%、31.25%(p<0.05)。其中100ul/ml参附注射液预处理组与H/R组比较无显着性差异(p>0.05),200、400ul/ml参附注射液预处理组与H/R组相比有显着性差异(p<0.05),但与HPC组及二者之间并无显着性差异(p>0.05)。3. SF-6、SF-12、SF-24、SF-36、SF-48、SF-72参附注射液预处理组较H/R组相比,细胞存活率分别增加5.14%、15.75%、20.20%、20.52%、19.66%、17.81%而凋亡率分别降低4.82%、10.80%、8.59%、8.74%、7.68%、8.26%(p<0.05),LDH和MDA漏出率分降低34.32%、43.26%、58.50%、57.63%、59.92%、58.29%和20.47%、30.38%、33.69%、30.83%、31.78%、29.75%(p<0.05)。除SF-6组与HPC组相比有显着性差异外(p>0.05),其余各组与HPC组相比无显着性差异且组间无显着性差异(p<0.05)。4. HPC组、SF组与H/R组相比,细胞存活率分别增加22.16%、20.20%,凋亡率分别降低11.34%、8.59%,LDH和MDA漏出率分别减少70.77%、58.50%和37.43%、33.71%,此两组结果与H/R组相比有显着差异(p<0.05)且此两组间差异无显着性(p>0.05)。而SF组+反义HIF-1α组、SF组+PD098059组与H/R组相比,细胞生存率分别增加6.04%、7.89%而凋亡率分别减少4.59%、5.41%,LDH和MDA漏出率较H/R组分别减少10.91%、17.69%和11.76%、12.57%,结果无显着差异(p>0.05);但此两组与HPC组相比,细胞生存率分别减少16.12%、14.27%,LDH和MDA漏出率较H/R组分别增加59.86%、53.08%和24.67%、23.86%,结果有显着性差异(p<0.05)。5. Western Blot结果显示:对照组HIF-1α所在的120kD蛋白条带灰度值为0.427,HPC组为0.837,SF组为0.783,后二组较对照组分别高0.410和0.35(6p<0.01),且后二组间无显着性差异(p<0.01),而PD098059组HIF-1α表达(灰度值为0.566)与SF组及HPC组相比则明显受到抑制(p<0.05).结论:1.参附注射液预处理可以模拟缺氧预处理对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞延迟性保护作用; 2. 200μl/ml的参附注射液预处理即可诱导对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的延迟性保护作用,其有效剂量为200～400μl/ml; 3.参附注射液预处理后12h即可产生对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的延迟性保护作用,有效保护期为12～96h; 4.参附注射液预处理对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的延迟性保护作用与ERKs介导的HIF-1α上调有关。
何蕾[4]2006年在《黄芪注射液抗心肌细胞缺血再灌注损伤作用及机制研究》文中进行了进一步梳理目的 研究黄芪注射液抗心肌细胞再灌注损伤的作用,并初步探讨其机制。方法研究分为叁部分。第一部分采用间生态离体兔心共生支持系统模型,研究黄芪与模拟酶对离体兔心再灌注损伤的保护。24只离体兔心脏随机分为叁组:对照组,模拟酶组,黄芪组,每组8只。分别采用St.Thomas'液,St.Thomas'液+黄芪,St.Thomas'液+模拟SOD酶进行心肌保护。常温缺血45min。再灌注60min。记录缺血再灌注前后血流动力学,心肌酶等指标的变化,比较黄芪注射液和模拟SOD酶的心肌保护作用。第二部分和第叁部分采用培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧模型,研究黄芪对细胞再灌注损伤的保护,初步探讨p42/p44 MAPK信号途径在黄芪注射液诱导的心肌保护中的作用。培养细胞随机分为五组:正常对照组,缺氧组,黄芪组,PD98059组,黄芪+PD98059组。缺氧过程中,给予黄芪和/或抑制剂PD98059,缺氧4h,复氧2h。比较缺氧复氧前后心肌细胞存活率,培养液中心肌酶,p42/p44蛋白,一氧化氮合酶(NOS)蛋白和NOSmRNA表达情况。结果离体兔心再灌注损伤研究表明黄芪组和模拟SOD酶组血流动力学和心肌酶变化优于对照组。黄芪对心脏功能的保护与模拟酶没有明显差异。培养心肌细胞缺氧复氧研究表明,黄芪能够引起正常心肌细胞和缺氧复氧心肌细胞eNOSmRNA和蛋白表达,与对照组相比能够减轻心脏再灌注损伤。加入抑制剂PD98059减弱了其对缺血再灌注心肌的保护作用。结论黄芪能够减轻缺血再灌注损伤,其机制涉及了p42/p44 MAPK信号途径。
徐通达[5]2013年在《丹酚酸A通过DUSP介导ERK/JNK通路对大鼠心肌缺血/再灌注损伤抗凋亡作用及机制》文中进行了进一步梳理目的：本研究通过建立大鼠离体缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)心脏和心肌细胞模型,以心肌梗死面积、心脏血流动力学变化、心肌坏死标记物、单个心肌细胞的收缩功能、凋亡相关蛋白、双特异性蛋白磷酸酶(Dual specificity protein phosphatase, DUSP)2/4/16以及ERK1/2和JNK通路上相关蛋白的表达变化为指标,观察丹酚酸A (Salvianolic acid A, SAA)对离体I/R心脏和心肌细胞收缩功能的恢复及凋亡的影响。探讨SAA对I/R损伤的保护作用及其可能的分子机制,从而为临床治疗心肌I/R损伤提供一种新的药物及治疗靶点。方法：1.清洁级成年雄性wistar大鼠,体重200-250g,分为正常对照组(CON, n=6), I/R组(I/R, n=6), SAA预处理组(SAA+I/R, n=6), ERK1/2抑制剂PD098059+I/R组(PD+I/R), ERK1/2抑制剂PD098059+SAA+I/R组(PD+SAA+I/R), JNK抑制剂SP600125+I/R组(SP+I/R)。应用离体心脏连接Langendorff装置,采用停灌、复灌方法模拟I/R过程,观察SAA(20μM)对离体I/R心脏的保护作用。CON组离体心脏持续用K-H液灌流200min; I/R组离体心脏持续灌流50min后,再缺血30min复灌120min; SAA+I/R组离体心脏持续灌流30min,进行SAA预处理20min后再缺血30min复灌120min; PD+I/R组PD预处理30min,余处理同I/R组；PD+SAA+I/R组进行SAA预处理前用PD预处理30min,余处理同SAA+I/R组；SP+I/R组SP预处理30min,余处理同I/R组。灌注过程中将一连接于压力传感器的充水水囊经肺静脉口进入左心房,经二尖瓣插入左室,以进入左室后LVEDP为5-15mmHg为充水水囊充水后标准,通过生物信号采集器测量心功能各项指标。分别于缺血前、再灌注30min、120min记录心率(HR)、左心室收缩压(LVSP).左心室舒张末压(LVEDP).左心室压变化最大速率(±dp/dtmax)。同时各组在再灌注15min时留取冠脉流出液待测乳酸脱氢酶(LDH)。再灌注结束后,冷冻心脏,TTC染色法测量各组心脏的心肌梗死面积。2.以常规酶解法分离成年大鼠心肌细胞,采用缺糖缺氧、复糖复氧的方法模拟I/R过程,观察SAA对离体I/R心肌细胞的保护作用。所得心肌细胞,分为以下各组：(1)CON组：心肌细胞正常培养18h；(2)I/R组：心肌细胞正常培养13h后,培养基更换为模拟缺血液,放入叁气培养箱中进行缺氧培养3h,然后将细胞培养基更换为高糖DMEM培养基,放入C02培养箱复糖复氧模拟再灌注；(3)SAA不同浓度组+I/R组：心肌细胞正常培养1h后,加入不同浓度SAA (1,5,10,15μM)预处理12h,再进行I/R,应用心肌细胞杆状率评价细胞的存活率,根据细胞的存活率确定SAA的最佳浓度,后述实验中SAA剂量均采用最佳浓度一种剂量进行；(4) PD+SAA+I/R组：进行SAA预处理前用PD预处理1h,余处理同SAA+I/R组；(5) SP+I/R组：SP预处理1h,余处理同I/R组。再灌注时间根据不同指标分为2h或6h。处理细胞分别进行以下实验：在异丙肾上腺素刺激(isoproterenol, ISO)状态下,收缩幅度用单个心肌细胞检测技术测定；用TUNEL及DAPI法检测心肌细胞凋亡率；用免疫印迹法(Western blot)测定Bcl-2、Bax、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases, JNK),磷酸化-JNK (p-JNK),细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK1/2),磷酸化-ERK1/2(p-ERK1/2)及DUSP2, DUSP4, DUSP16蛋白表达变化。结果：1.在离体I/R心脏水平上,与CON组相比,I/R能够明显地降低心功能的各种参数(P<0.01),增加LDH释放量,心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率(P<0.01)；与I/R组相比,SAA+I/R, SP+I/R组,PD+SAA+I/R组,均可改善心功能的各种参数,降低LDH释放量,心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率(P<0.05-0.01),而PD+I/R组与I/R组相比,心功能的各种参数,LDH的释放量,心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率未见明显变化(P>0.05)；各组与PD+I/R组相比,结果等同于与I/R组相比；与SAA+I/R组比较,PD+SAA+I/R组心功能参数降低,LDH释放量,心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率均有所增加(P<0.05),而SP+I/R组与SAA+I/R组比较,心功能参数,LDH释放量,心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率未示明显差异(P>0.05)；而与PD+SAA+I/R组相比,SP+I/R组心功能参数升高,LDH释放量,心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率减少明显(P<0.01)。由于PD+I/R组与单存I/R组相比,心脏血流动力学指标,心肌损伤标记物LDH,以及心肌细胞凋亡率叁组未见明显变化,故在心肌细胞水平中,未进一步行PD+I/R组的相关试验。2.在细胞水平上,与CON组相比,I/R后,单个心肌细胞收缩幅度、p-ERK1/2、Bcl-2及DUSP4/16蛋白表达水平明显下降,p-JNK、Bax及DUSP2蛋白表达水平明显增加(P<0.05-0.01)；用SAA预处理后,能够增加单个心肌细胞收缩幅度、p-ERK1/2、Bcl-2及DUSP4/16蛋白表达水平,降低p-JNK、Bax及DUSP2蛋白表达水平(P<0.05)；与I/R组比较,SAA+I/R, SP+I/R组,PD+SAA+I/R组,均可增加单个心肌细胞收缩幅度、p-ERK1/2、 Bcl-21及DUSP4/16蛋白表达水平,降低p-JNK、Bax及DUSP2蛋白表达水平(P<0.05)；相对于SAA+I/R组,PD+SAA+I/R组单个心肌细胞收缩幅度、p-ERK1/2、Bcl-2及DUSP4/16蛋白表达水平降低,p-JNK、Bax及DUSP2蛋白表达水平上调(P<0.05)；而SP+I/R组与SAA+I/R组比较,单个心肌细胞收缩幅度、p-ERK1/2、p-JNK、Bcl-2、Bax、DUSP2及DUSP4/16蛋白表达水平均未见明显变化(P>0.05)；与PD+SAA+I/R组相比,SP+I/R组增加了单个心肌细胞收缩幅度、p-ERK1/2、Bcl-2及DUSP4/16蛋白表达水平,降低了p-JNK、Bax及DUSP2蛋白表达水平(P<0.05)。结论：JNK可以通过DUSP2抑制ERK1/2的激活,而ERK1/2则可以通过DUSP4/16去磷酸化抑制了JNK的活性；SAA可能通过抑制DUSP2介导的JNK通路激活ERK1/2通路以及通过激活DUSP4/16介导的ERK1/2通路抑制JNK通路激活,从而发挥对缺血/再灌注心肌细胞抗凋亡的作用。
强皎[6]2014年在《毛冬青皂苷E对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:毛冬青皂苷E是毛冬青药材药效物质基础的代表性成分,本论文通过分离培养大鼠乳鼠原代心肌细胞,建立体外缺氧/复氧损伤模型,在细胞水平模拟大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤,研究毛冬青皂苷E对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响及其作用机制,以阐释毛冬青心肌保护的药效物质基础。方法:1.大鼠乳鼠原代心肌细胞的分离培养及鉴定。取出生1～3天的SD大鼠乳鼠心肌组织,用0.25%胰蛋白酶4℃浸泡过夜,0.08%Ⅱ型胶原酶37℃磁力搅拌消化,心肌细胞用含15%胎牛血清的DMEM培养液孵育,利用差速贴壁分离法和5-溴脱氧尿苷化学抑制法相结合对心肌细胞进行分离、纯化。采用α-actin抗体进行免疫组化染色,鉴定心肌细胞。2.心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的建立。利用均匀设计确定不同的缺氧、复氧时间组合,以CCK-8法检测细胞存活率为主要指标,初步筛选最佳建模条件,以TUNEL法检测细胞凋亡率为辅助指标对最佳建模条件进行验证,建立缺氧/复氧损伤模型。3.毛冬青皂苷E对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响。毛冬青皂苷E在建模前进行预干预,心肌细胞随机分为5组:空白对照组(Control,CON);缺氧/复氧组(H ypoxia/reoxygenation,H/R);毛冬青皂苷 E 低、中、高剂量干预组(EL、EM、EH+H/R)。缺氧4h/复氧4h后,采用CCK-8法检测心肌细胞存活率,TUNEL法测定凋亡率。4.毛冬青皂苷E抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的作用机制。心肌细胞给药方式及实验分组同上,缺氧4h/复氧4h后,采用DHE荧光探针法检测心肌细胞活性氧(ROS)含量,采用Western Blot技术检测凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果:1.原代心肌细胞形态学观察结果。细胞接种4～6h后开始贴壁生长,12～24h明显增殖,部分细胞开始单个搏动,48h可见细胞汇合成片,形成细胞单层或细胞簇,呈现同步搏动,即所谓功能性合体细胞。经α-actin免疫细胞化学染色,心肌细胞肌动蛋白呈强阳性反应(棕褐色颗粒状改变),阳性率达95%以上。2.缺氧/复氧损伤模型建立条件的筛选结果。经筛选,最终确定缺氧/复氧模型建立的条件是缺氧4h/复氧4h,该条件下测得的心肌细胞的存活率最低,为48.80%;凋亡率(累积光密度值,IOD)为9494.27,是空白对照组的8倍左右。3.毛冬青皂苷E对缺氧/复氧心肌细胞存活率和凋亡率的影响结果。与空白对照组比较,缺氧/复氧组心肌细胞存活率显着降低[(45.10±3.10)%vs.(100.00±2.94)%,P<0.01)],细胞凋亡率明显增加[(16.57±0.45)%vs.(0.60±0.16)%,P<0.01)];与缺氧/复氧组比较,毛冬青皂苷E低、中、高剂量干预组(EL、EM、EH+H/R)心肌细胞存活率均显着升高,其值依次分别为(56.09±3.95)%、(64.60±4.16)%、(78.03±2.56)%;细胞凋亡率明显降低,其值依次分别为(13.15±0.18)%、(11.49±0.27)%、(8.45±0.20)%。4.毛冬青皂苷E对缺氧/复氧心肌细胞活性氧(ROS)含量和Caspase-3蛋白表达的影响结果。与空白对照组比较,缺氧/复氧组心肌细胞活性氧(ROS)含量明显上升[(145.17±9.65)累积光密度值vs.(33.96±3.10)累积光密度值,P<0.01],凋亡蛋白Caspase-3的表达显着增加[(1.07±0.03)灰度比值vs.(0.38±0.01)灰度比值,P<0.01];与缺氧/复氧组比较,毛冬青皂苷E低、中、高剂量干预组(EL、EM、EH+H/R)可不同程度地降低心肌细胞活性氧的含量,其值依次分别为109.01±7.55、86.45±4.92、54.05±7.10;高剂量干预组可显着减少凋亡蛋白Caspase-3的表达,其灰度比值为 0.62 ±0.04。结论:1.本课题优化的原代心肌细胞培养方法简单方便,稳定可靠,可获得活力好、纯度高、数量多的心肌细胞。成功建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,可用于评价药物的心肌保护作用。2.毛冬青药材代表性成分毛冬青皂苷E可显着提高缺氧/复氧心肌细胞的存活率,降低其凋亡率,对心肌细胞的凋亡具有直接抑制作用;其作用机制与毛冬青皂苷E可显着降低缺氧/复氧心肌细胞活性氧(ROS)含量,减少凋亡蛋白Caspase-3的表达相关。
刘晓艳[7]2013年在《四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响》文中提出目的:研究四妙勇安汤合生脉饮对缺氧/复氧损伤后原代培养乳鼠心肌细胞的影响，探讨四妙勇安汤合生脉饮对缺氧/复氧损伤后原代培养乳鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:本研究应用醇沉技术制备四妙勇安汤合生脉饮的药液，采用胰蛋白酶和胶原酶联合消化的方法分离SD乳鼠心肌细胞，采取两次差速贴壁法对心肌细胞进行纯化，原代培养，建立细胞模型，倒置相差显微镜下观察原代培养的心肌细胞，不同时间下对细胞形态拍照并录像，利用免疫细胞化学方法对心肌细胞进行纯度鉴定。利用高纯氮气建立心肌细胞缺氧/复氧模型，制备细胞缺氧用的密闭方盒，自制缺氧盒有进气口和出气口，先用注射器自出气口尽量抽真空，再自进气口向缺氧盒中充高纯氮气30-40min，置换盒中的氧气，关闭缺氧盒的进气口与出气口，缺氧时间4h，复氧时间2h。原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为叁组。正常对照组（control group）：不进行缺氧/复氧的处理，不更换培养液，也不加四妙勇安汤合生脉饮的醇沉药液进行干预；模型组（model group）：进行缺氧/复氧的处理，更换无糖无血清培养液，但不加四妙勇安汤合生脉饮的醇沉药液；药物干预组（treatment group）：进行缺氧/复氧的处理，更换无糖无血清培养液，加四妙勇安汤合生脉饮的醇沉药液进行干预。实验开始时正常对照组更换完全培养基入培养箱培养6h；模型组、药物干预组更换无糖无血清培养液，缺氧培养4h，随后模型组更换完全培养基，药物干预组更换含有10%四妙勇安汤合生脉饮醇沉药液的完全培养基，复氧2h，根据不同实验目的用于实验。采用MTT比色法检测心肌细胞存活力，采用全自动生化自动仪检测心肌细胞培养液AST的含量，采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌细胞凋亡率，比较各组心肌细胞存活力、AST含量、心肌细胞凋亡率的情况，从而得出四妙勇安汤合生脉饮对心肌细胞凋亡的影响结果。结果:(1)原代培养的乳鼠心肌细胞在倒置相差显微镜下观察，接种时心肌呈悬浮状态，最早在6小时内观察到心肌细胞贴壁并搏动，心肌细胞逐渐伸展为叁角状、梭形状、菱形状、多角形状等多种不规则形状，24小时内大部分心肌细胞搏动，但搏动频率不同，48小时后见心肌细胞相互连接，搏动频率趋于一致，第5天见心肌细胞铺展成片搏动频率基本一致，应用免疫组织化学的方法经鉴定为心肌细胞。(2)四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响：①MTT比色法检测心肌细胞存活力：正常对照组OD值为（0.274±0.012），模型组OD值为（0.189±0.020），药物干预组OD值为（0.223±0.018）。模型组与正常对照组比较，OD值明显降低，说明模型组心肌细胞活细胞的数量明显减少，药物干预组与正常对照组比较，OD值也降低，药物干预组与模型组比较，OD值增高，说明药物干预组能提高各孔的OD值，心肌细胞活细胞数量虽然较正常对照组减少，但是较模型组并未减少。经单因素方差分析，模型组、药物干预组与正常对照组比较差异具有显着性(P<0.05)，有统计学意义；药物干预组与模型组比较差异具有显着性，也有统计学意义(P<0.05)；②心肌细胞培养液中天冬氨酸氨基转移酶AST含量的检测：在缺氧/复氧实验结束后，留取正常对照组、模型组、药物干预组各个组心肌细胞培养液样本检测，正常对照组AST含量为（1.02±0.45），模型组AST含量（3.96±0.88），药物干预组AST含量（2.55±0.67），模型组AST含量较正常对照组升高，而在加入四妙勇安汤合生脉饮醇沉药液的药物干预组AST含量较模型组降低，但是较正常对照组仍升高。经单因素方差分析，模型组、药物干预组与正常对照组相比较，差异具有显着性，有统计学意义(P<0.05)；药物干预组与模型组相比较，差异具有显着性，有统计学意义(P<0.05)。③流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌细胞凋亡：从FITC和PI荧光标记的双参数点图做统计分析观察到，正常对照组处于正常条件培养的心肌细胞即有细胞凋亡的存在，凋亡率为(13.02±0.65)%；模型组缺氧/复氧条件下培养的心肌细胞凋亡率为(28.56±0.92)%；药物干预组给四妙勇安汤合生脉饮干预的心肌细胞凋亡率为(16.74±0.83)%。经单因素方差分析，各组比较，差异有显着性，具有统计学意义(P<0.05)。结论:四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡具有保护作用，其作用可能与四妙勇安汤合生脉饮能够提高缺氧/复氧损伤后心肌细胞的存活力、能够降低缺氧/复氧损伤后心肌细胞培养液中AST含量有关，改善心肌细胞能量代谢及维持心肌细胞膜结构的完整性和功能的通透性，为了更加详细完善地总结出有关四妙勇安汤合生脉饮对心肌细胞凋亡保护作用的具体机制，尚待进一步研究。四妙勇安汤在保护心肌细胞凋亡方面的作用，为冠心病、心衰的治疗提供新的思路与方法。
史成和[8]2005年在《紫芪方对肠道屏障功能保护作用的实验研究及机制探讨》文中研究说明背景:肠道是机体遭受创伤后最早发生病理生理变化的器官。Wilmore称肠道为“外科应激条件下的中心器官”;Meakins称之为“MOF”的动力器官。肠道因其在体内独特的生理环境及特殊的生理构造而参与了几乎所有危重病的病理生理过程。肠道是肌体除体表以外隔绝外环境的主要屏障,又是体内最大的细菌储源,肠道细菌或内毒素易位进入淋巴或直接引流入肝而成为炎症反应的启动者。因此在MODS的发生中,肠道既是受损的“靶”器官,又是损伤的“激发”器官。近年来在“肠道靶学说”牵引下开展了大量化学、生化药物防止内毒素移位、保护肠粘膜屏障功能等方面的药物研究,但仍存在诸如疗效、副作用、价格昂贵等不利因素,限制了临床使用。近年研究表明,中药制品不仅在毒副作用、环境污染等方面有化学、生物药品无法比拟的优势,同时对机体遭受严重外来损伤时肠道损伤的保护具有多靶位效应,诸如,改善微循环、清除自由基及抑制细胞凋亡等保护效应。由于目前开展的研究局限于中药单方、单一成分或少数传统方剂注射剂对肠道的保护研究,对于新的复方药物的研究缺少足够的重视,没有充分体现传统中医药整体施治疾病的医疗思想。因此,以加强内源性抗损伤的医疗思想为指导,在中医传统方剂及现代中药研究成果基础上开展中药复方保护肠道屏障功能的基础研究,无疑对研制开发复方制剂研究的模式及临床使用具有重要的意义。目的:构建保护肠道屏障功能的复方中药-紫芪方;探讨紫芪方对肠上皮细胞(IEC-6 )缺氧再复氧损伤的保护效应;阐述紫芪方对失血性休克肠道屏障功能的保护作用及其机制,为中药复方制剂保护肠道屏障的研究构建技术平台及提供理论依据。方法:一、应用大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)体外缺氧再复氧损伤模型,观察不同浓度参附方血清对细胞LDH释放的影响,建立药物血清的制备和血清药理学研究技术;采用均匀设计法,设计组分不同用量配比的中药复方,观察不同设计方案配比的中药复方对缺氧再复氧损伤细胞LDH释放量的影响,从而获取最佳组分配比的中药复方-紫芪方。
徐伟建[9]2006年在《参附注射液对大鼠急性压力超负荷及乳鼠心肌细胞缺糖缺氧损伤的影响》文中研究指明目的：采用腹主动脉结扎的方法制作急性压力超负荷大鼠模型，研究参附注射液对其进行治疗后，以及参附注射液提前干预后大鼠急性压力超负荷在不同时间点的血流动力学及心肌组织病理学变化，观察参附注射液对急性压力超负荷大鼠心肌组织ANP表达水平，及对急性压力超负荷大鼠心肌组织Na~+-K~+ATPase与Ca~(2+)-ATPase表达水平的影响，并对腹主动脉结扎致压力超负荷大鼠心肌细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响进行研究，同时采用体外培养心肌细胞的方法，并造成缺糖缺氧损伤模型，探讨参附注射液对急性压力超负荷大鼠的干预及治疗作用及缺糖缺氧损伤的心肌细胞的作用。方法：参照相关文献制作急性压力超负荷大鼠模型。实验分为：(1)药物治疗组：雄性Wistar大鼠50只，随机取8只作为假手术(Sham)组，其余42只行腹主动脉结扎术。其中10只大鼠于腹主动脉结扎术中死亡，32只存活大鼠随机分为模型组、参附组、西地兰组、多巴酚丁胺组，每组8只。假手术组仅分离腹主动脉而不结扎。术后2小时，分离大鼠左侧颈外静脉，分别推注①参附组：参附注射液0.5ml(人参皂甙3.5mg/1ml)；②西地兰组：西地兰0.5ml(0.036mg/1ml)；③多巴酚丁胺组：多巴酚丁胺0.5ml(1.8mg/1ml)。(2)药物提前干预组：65只雄性Wistar大鼠随机分为5组。假手术组，模型组、参附高剂量组、参附低剂量组及依那普利组，其中假手术组为5只大鼠，其余四组各15只大鼠。参附高剂量组与低剂量组大鼠分别以8ml/kg及4ml/kg腹腔注射参附注射液，同时以生理盐水10ml/kg灌服；依那普利组大鼠灌服依那普利溶液10ml/kg(0.5mg/ml)，同时腹腔注射生理盐水(8ml/kg)，每日一次，连用7日后行腹主动脉结扎术；假手术组同时进行腹腔注射(8ml/kg)及灌服生理盐水(10ml/kg)，7日后作腹部正中切口2cm后钝性分离腹主动脉但不结扎腹主动脉。血流动力学参数(1)药物治疗组：术后2小时，插入左室导管，八道生理记录仪记录压力曲线，计算左室收缩功能参数：左室内压峰值(LVSP)、左室压力上升最大速度(+dp/dt_(max))及左室舒张功能参数：左室舒张末内压(LVEDP)、左室压力下降最大速度(-dp/dt_(max))。间隔5分钟后，分别按不同组别从静脉推注参附注射液、西地兰及多巴酚丁胺，间隔10分钟后再次记录参附组、西地兰组、多巴酚丁胺组大鼠的血流动力学参数。(2)药物干预组：腹主动脉结扎术后1/2小时、1小时及2小时，于模型组、参附高剂量组、参附低剂量组及依那普利组中分别取5只大鼠行血流动力学检测及其他指标检测，同时测定假手术组上述3个时段血流动力学参数及其他指标采用放射免疫(RIA)法检测心肌组织ANP表达，分光光度法测定心肌组织中Na~+/K~+ATPase,Ca~(2+)-ATPase含量。具体操作步骤按说明书进行采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡，采用免疫组织化学染色检测心肌细胞Bcl-2与Bax蛋白。采用全自动图像分析仪于HPIAS-2000图像分析系统分析棕黄色阳性颗粒的平均吸光度(A)用2-3天Wistar乳鼠进行心肌细胞的分离、纯化、培养，实验时用缺糖Hanks液代替正常培养基。培养瓶内立即充入氮气(1升/分流量)30秒，造成缺糖缺氧心肌细胞损伤模型。对照组用正常培养基不含氮气取培养心肌细胞，随机分为：1组：正常对照组；2组：缺糖缺氧组；3组：缺糖缺氧+参附液高剂量组(含人参皂甙1000μg/ml)；4组：缺糖缺氧+参附液中剂量组(含人参皂甙500μg/ml)；5组：缺糖缺氧+参附液低剂量组(含人参皂甙250μg/ml)；6组：缺糖缺氧+依那普利组(500μg/ml)，于倒置显微镜下观察心肌细胞生长情况和搏动频率，MTT比色法检测细胞活力，流式细胞仪检测心肌细胞DNA含量、细胞周期及凋亡率结果：在腹主动脉结扎后，大鼠出现呼吸浅而快，少动，唇舌紫绀等症状，符合中医心肾阳虚病机范畴，在结扎大鼠腹主动脉导致急性压力超负荷后，心率在参附组与西地兰组药物治疗后较治疗前显着降低(P＜0.01)，而多巴酚丁胺组用药后HR显着增加(P＜0.01)；参附组、西地兰组、多巴酚丁胺组药物治疗后与治疗前相比，LVSP、+dp/dt_(max)在治疗后均有非常明显的升高(P＜0.01)；参附组药物治疗后-dp/dt_(max)较治疗前明显上升，而西地兰组和多巴胺组则显着下降(P＜0.01)；药物治疗后，参附组LVEDP有非常显着性的下降，而西地兰组与多巴酚丁胺组则明显上升(P＜0.01)。同时，提前使用参附注射液或依那普利大鼠各项血流动力学参数在急性压力超负荷后各时间点均出现非常明显的改变(P＜0.01)：在参附注射液提前干预组中，与模型组相比，高、低剂量组参附注射液各项血流动力学参数均有非常显着的差异(P＜0.01)，其中提前使用参附低剂量组大鼠LVSP与-dp/dt_(max)较高剂量组明显降低(P＜0.05)；依那普利组大鼠LVSP及+dp/dt_(max)较参附组明显降低(P＜0.01)。实验中我们发现腹主动脉结扎后0.5小时、1小时、2小时，大鼠心肌组织ANP水平随时间逐渐升高，腹主动脉结扎2小时后大鼠心肌组织ANP水平较假手术组升高了5.45倍，而此时应用参附注射液即能有效地降低急性压力超负荷大鼠心肌组织ANP水平；同时，在结扎大鼠腹主动脉前使用参附注射液，无论高剂量或是低剂量，其均能有效地降低腹主动脉结扎后大鼠心肌组织ANP水平，显示在急性压力超负荷时心房ANP分泌增加，而参附注射液有减少其分泌的作用，且疗效较西地兰和多巴酚丁胺为佳，提示参附注射液对急性压力超负荷状态下的心脏ANP表达具有良好的早期干预作用。同时我们发现急性压力超负荷大鼠在腹主动脉结扎后0.5小时，心肌组织Na~+/K~+ATPase表达水平较假手术组有显着性的升高，但在随后的时间点(1小时和2小时)，模型组大鼠心肌组织Na~+/K~+ATPase表达水平较假手术组有非常显着性的降低(P＜0.01)，且心肌组织Na~+/K~+ATPase表达水平随时间的推移有降低的趋势，腹主动脉结扎2小时后，大鼠心肌组织Na~+/K~+ATPase与Ca~(2+)-ATPase表达水平均较假手术组有非常显着性的降低(P＜0.01)，同时，我们在实验中亦发现，Na~+/K~+ATPase与Ca~(2+)-ATPase表达水平与心肌组织ANP蛋白表达水平呈负相关。实验结果显示，参附注射液、西地兰及多巴酚丁胺均能有效地增加大鼠心肌组织Na~+-K~+ATPase表达水平以及Ca~(2+)ATPase表达水平；而提前使用参附注射液干预后，与不同时间点模型组大鼠心肌组织Na~+-K~+ATPase表达水平相比，高、低剂量参附注射液及依那普利均能显着增加Na~+/K~+ATPase及Ca~(2+)ATPase表达水平。实验中我们发现在腹主动脉结扎后0.5小时，1小时和2小时，模型组大鼠心肌细胞凋亡率较假手术组明显升高，腹主动脉结扎后2小时模型组大鼠心肌细胞凋亡率较假手术组升高9.13倍，且急性压力超负荷大鼠心肌细胞凋亡率随着时间的推移有上升趋势。而预先使用高、低剂量参附注射液及依拉普利均能明显降低腹主动脉结扎后在不同的时间点的大鼠心肌细胞凋亡率，同时在腹主动脉结扎后2小时使用参附注射液能降低大鼠心肌细胞凋亡率。我们在实验中采用流式细胞术对使用不同剂量参附注射液缺糖缺氧培养的心肌细胞的细胞周期及心肌细胞凋亡率进行了监测。结果显示，在培养的正常心肌细胞在空白对照组心肌细胞G_1期之前，存在亚二倍体峰，提示处于正常条件培养的乳鼠心肌细胞即有细胞凋亡的存在，凋亡率为(1.08±0.84)％；参附注射液高剂量组+缺糖缺氧培养3小时后心肌细胞凋亡率为(2.23±0.89)％，与正常对照组相比无显着性差异。参附注射液中与低剂量组+缺糖缺氧培养3小时后心肌细胞凋亡率为分别为(4.30±0.47)％与(5.7±0.56)％，二组心肌细胞凋亡率与对照组相比有显着性差异(p＜0.05)，依那普利+缺糖缺氧培养3小时后心肌细胞凋亡率为(11.23±0.34)％，与缺糖缺氧相比有显着性差异(p＜0.05)，不同浓度的参附注射液与依那普利相比，亦有显着性的差异(p＜0.05)。本实验结果显示：缺糖缺氧培养3小时后，与正常对照组ANP表达量相比，缺糖缺氧组ANP表达明显增高(P＜0.01)。参附注射液干预后能明显降低缺糖缺氧诱导心肌细胞ANP的合成(P＜0.01)，依那普利亦能明显降低缺糖缺氧诱导心肌细胞ANP的合成(P＜0.05)，但与不同浓度的参附注射液相比，仍有显着性的差异(P＜0.05)。结论：总结以上实验结果，我们认为急性压力超负荷导致心肌射血时阻力增加，心脏做功增加的同时出现结构性的变化，以适应这种后负荷的改变，即心肌重塑，在此过程中心肌的耗氧耗能急剧增加。但机体储备有限，因此心肌细胞供氧供能相对不足，结果引起机体神经内分泌的激活如ANP表达增多，细胞因子分泌增多，进一步引起心肌细胞的重塑，最终形成心室扩张，肥厚；另一方面压力牵张可直接导致心肌细胞的结构及功能改变，引起相关基因的表达异常，Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(++)-ATP酶表达的异常，并引发心肌细胞离子流障碍，同时由于能量及氧代谢异常可引起心肌细胞凋亡，心肌细胞数目减少，这些因素共同形成心脏舒缩功能障碍，心功能衰竭，临床上出现心慌、气喘、乏力、肢冷、水肿等症状，这些与中医之心气不足、心肾阳虚证候极为相似，故推测作为心衰根本病因的心肾阳虚之生物学基础可能在于心肌能量与氧代谢障碍。因此参附注射液益气温阳作用机制可能在于改善了急性压力超负荷状态下心肌异常的能量及氧代谢，减少了心肌ANP表达，有效提高心肌细胞的Na~+/K~+ATPase及Ca~(2+)ATPase的表达水平，改善急性压力超负荷状态下心肌细胞异常的Ca~(2+)摄取和释放，有效的预防和治疗急性压力超负荷状态下和缺糖缺氧条件下培养心肌细胞凋亡的发生，减少心肌细胞数量的丧失，从而改善心力衰竭时心脏收缩力减弱和舒张异常延迟的状态，维持心脏的功能。
朱金墙, 梁钰彬, 华声瑜, 叶乔峰, 刘璇[10]2014年在《参附注射液的成分及其对心血管系统的药理作用研究进展》文中认为参附注射液被广泛用于治疗心力衰竭、休克、心律失常、急性心肌梗死、扩张性心肌病、病毒性心肌炎、肺心病等心血管疾病。近年来,医药工作者们对其药效物质基础和药理作用进行了大量研究,并取得了一定成果。笔者将近年来关于参附注射液有效成分及其对心血管系统的药理作用研究进行综述,以期为其深入研究与临床应用提供参考。
参考文献：
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[4]. 黄芪注射液抗心肌细胞缺血再灌注损伤作用及机制研究[D]. 何蕾. 中国人民解放军军医进修学院. 2006
[5]. 丹酚酸A通过DUSP介导ERK/JNK通路对大鼠心肌缺血/再灌注损伤抗凋亡作用及机制[D]. 徐通达. 南京中医药大学. 2013
[6]. 毛冬青皂苷E对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响及机制研究[D]. 强皎. 广州中医药大学. 2014
[7]. 四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响[D]. 刘晓艳. 河北医科大学. 2013
[8]. 紫芪方对肠道屏障功能保护作用的实验研究及机制探讨[D]. 史成和. 第叁军医大学. 2005
[9]. 参附注射液对大鼠急性压力超负荷及乳鼠心肌细胞缺糖缺氧损伤的影响[D]. 徐伟建. 湖北中医学院. 2006
[10]. 参附注射液的成分及其对心血管系统的药理作用研究进展[J]. 朱金墙, 梁钰彬, 华声瑜, 叶乔峰, 刘璇. 中成药. 2014