（商丘医学高等专科学校 河南 商丘 476100）
【摘 要】目的：观察复方乌头碱微乳治疗腰椎间盘突出症的作用；方法：建立大鼠腰椎间盘突出症神经根受压模型，观察高倍光镜下3个视野的神经根、神经节炎性细胞数目及对大鼠后肢的机械性刺激阈值的影响；结果：复方乌头碱微乳在一定程度上有减少腰椎间盘突出症模型大鼠神经节、神经根炎性细胞浸润作用的趋势，可提高机械性压迫所致的痛阈值；结论：复方乌头碱微乳有一定抗炎、镇痛作用。
【关键词】复方乌头碱微乳；腰椎闻盘突出症；实验研究
【中图分类号】R283 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）6-0575-02
腰椎问盘突出症是常见病、多发病。保守治疗可以获得较为满意的疗效。中药的外敷一直是有效的治疗方法，但制剂落后，制剂改革势在必行，而适合中药复方成分的微乳制剂日益受到重视「1-2」。复方乌头碱微乳将传统的黑膏药改成微乳制剂，通过实验研究，为临床应用提供科学依据。
1 实验材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1实验动物
选用SPF级成年SD大鼠60只，雌雄各半，体重250—300 g。（由郑州市惠济区华兴实验动物养殖场提供（实验动物检疫合格证号：141002 ）。随机分为：A：空白对照组；B：扶他林对照组；C：黑膏药对照组；D：治疗组，每组15只。
1.1.2 实验药品及制作方法
复方乌头碱微乳：（我校附属医院制剂室制备）组成：生川乌30g、生草乌30g、生马钱20 g、生白芍50 g、生麻黄50 g、桑寄生40 g、生黄芪40、防风20g、雪上一枝蒿50g、桂枝30 g、甘草10 g。辅料组成：十六醇、单甘脂、土温801.5%、白凡士林15%、甘油5%、防腐剂及纯化水。取上药干燥粗粉(40目) 用6倍量80%乙醇浸泡7天以上，进行回流, 重复3次，合并滤液浓缩备用。将以上其余中药在60℃恒温干燥3 h，以料液比为1：5的75％乙醇浸泡12 h，重复3次，合并滤液滤液60℃减压浓缩至糖浆状，残渣以料液比溶液60℃减压浓缩。将以上所有浓缩的原料放入适量十六醇、单甘脂、土温801.5%白凡士林15%、甘油5%溶液中。在37℃水浴中涡旋混匀后，加入20倍的蒸馏水，于磁力搅拌下乳化，装瓶备用。微乳中乌头碱含量4.6μg/ml，RSD为0.95%。
黑膏药：（和复方乌头碱微乳中药组成相同），加广丹熬制成黑膏药。制成1.5×3.0cm大小。
扶他林软膏，北京诺华制药有限公司，生产批号：X4587
1.1.3 实验试剂及仪器
YLS一3E型电子压痛仪；电子天平：SARTORIUS AG GOTIINGEN R200D德国产品；
1.2 实验方法
1.2.1 造模
所有大鼠适应性喂养1周，40 mg／kg戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉，背部手术区域备皮消毒、铺无菌巾。以双侧髂棘最高点连线为中心，取背部后正中切口，依次切开皮肤、皮下组织并沿棘突两侧剥离。利用专门的动物手术器械，包括微型咬骨钳、血管钳、牵开器及神经剥离子等行L4—L5，L5--L6右侧半椎板及小关节切除，小心显露L5右侧神经根及背根神经节。必要时在手术显微镜下下操作，术前准备好消毒小棉球及小块明胶海绵压迫止血，尽量保证术野清晰，避免损伤神经组织。在大鼠尾近根部1 cm处纵行切开皮肤、皮下组织至尾椎骨面，向两侧分离显露椎间隙，横向切开纤维环取出髓核组织(扭力天平称重共取10 mg，) 小心将髓核置于显露好的神经根处，仔细操作，注意勿损伤神经根及脊髓。髓核为胶冻样物质，轻柔粘附于神经表面，无需特殊固定。然后用3-0丝线逐层关闭切口，完成手术。术后当天禁食、禁水，自术后第1天起给予正常食、水，术后连续3天肌注青霉素40万U。
1.2.2 给药
所有动物均在术后第三天药物干预。A组于伤口两侧外涂生理盐水,B组于伤口两侧外涂扶他林软膏,D组于伤口两侧外涂复方乌头碱微乳，每次2毫升，6次/天。C组外贴黑膏药（贴药面积和涂药面积相同），每天贴12小时。
1.3 检测指标
待动物适应饲养环境后，在手术前l天及术后l天、1周、2周及4周分别进行动物的行为学测试和病理学检查。每次进行测试前将大鼠置于测试观察箱中适应20分钟，尽量消除外界干扰因素对动物的影响。
1.3.1 动物运动功能评价
动物运动功能评价是将大鼠置于地面，观察其步态情况。采用Chatani等「3」的运动功能损害评分方法：3分为下肢功能严重受损，无法行走；2分为中度受损，可以行走，但呈现明显跛行步态；1分为轻微跛行；0分代表行走正常。
1.3.2 测量大鼠后肢的机械性刺激阈值
采用YLS一3E型电子压痛仪测定给药第7、14、28天大鼠右后足的痛阈值。比较给药第7、14、28天各组大鼠痛阈值。
1.3.3 病理学检查。
B组、C组和D租分别满4周后，用空气栓塞法每组处死15只实验动物，迅速切下L4／5、L5／6神经根、神经节。10%甲醛固定，组织块经常规脱水，石蜡包埋，切片厚度为5μm，HE染色，图像采集MIQAS医学图象定量分析系统进行图像采集，计数400倍光镜下3个视野的神经根、神经节炎性细胞数目。
1.4 统计学处理
计量资料以（ ）表示，进行方差分析，组间t检验，数据统计均由sPSSl3．0软件完成。
2 结果
2.1 动物运动功能评价。所有4组实验动物手术前后均没有出现跛行、步态异常或瘫痪的现象，运动损害功能评分为0分。
2.2 机械性刺激
四种细胞数目，扶他林组、治疗组分别与对照组比较P均<0.05，分别与黑膏药组比较P均<0.05；扶他林组与治疗组比较P（0.108，1.000,0.698,0.746），均无统计学差异；对照组与黑膏药组比较P（0.196，0.685,0.698,0.333），均无统计学差异。
3 讨论
历代对乌头汤的主治看法是比较一致的。即认为是风寒湿三气袭入肌肤，留着关节，发则为历节痛。本方以《伤寒论》乌头汤为基本方进行加减而成，有温经散寒止痛的作用。
无论是动物实验[4]还是临床应用[5]都证明乌头汤有明显的抗炎镇痛效果，对腰椎间盘脱出症的治疗有良好的疗效。但口服的毒性限制了临床广泛的引用，为达到减毒增效的目的，透皮给药是理想给药方式。我校附院以本方制成黑膏药外敷取得良好效果。然而黑膏药采用麻油炸法，对中药材中各种有效成份的提取度很小，难以达到有效的治疗浓度；而且中药复方制剂的成分复杂，往往多种成分共同发挥治疗作用，通常不提取单一纯品，用药剂量一般较大。药物制成透皮吸收制剂，药物透皮吸收的速度和剂量往往受到角质层屏蔽等的限制。而微乳因其特有的表面张力较低，易于润湿皮肤，使角质层的结构发生变化，经皮给药的微乳一旦进人角质层，能同时改变药物透皮吸收的脂性和极性途径因而能促进药物经皮进入体循环[1]。微乳具有稳定性好，溶解能力强，可以容纳多种中药生物活性成分；生物利用度高，减少中药使用剂量；可用虑过法灭菌，制备过程简单，易于操作，适合规模化生产等优点[2]。
我们通过动物实验证实：在镇痛方面，扶他林组和治疗组无显著差异，但与黑膏药相比，差异显著；在抗炎方面，扶他林组和治疗组无显著差异，但与黑膏药相比，对于神经根上炎性细胞的总数有显著地统计学意义。
参考文献:
[1]张龙，马卓. 微乳技术在现代中药制剂中的研究进展[J].中国医药导报，2012，9（34）：29-31.
[2]刘嘉，刘汉青.微乳化技术在中药中的应用研究进展[J].西北药学杂志，2013,28（2）：218-220
[3]Olmarker K，Nutu M，Storkson It,et a1．Changes in Spontaneous Behavior in Rats Exposed to Experimental Disc Herniation are Blocked by SelectivenTNF一Alpha Inhibition．Spine，2003，28：1635—1642．
[4]王丹华，刘春芳，谭淑芳，等. 乌头汤对大鼠的镇痛作用及初步机制探讨[J].中国实验方剂学杂志，2014，20（10）：109-111
[5]李连飞,罗试计,覃应莲,等.自制乌头汤加味治疗椎间盘源性腰痛88例疗效观察[J].贵阳中医学院学报, 2011, 33(1): 31-32.
论文作者:李玉奎,冯传博,马振勇,赫金凤,余,堃
论文发表刊物:《河南中医》2015年6月供稿
论文发表时间:2015/10/19
标签：乌头论文; 膏药论文; 复方论文; 神经论文; 大鼠论文; 中药论文; 制剂论文; 《河南中医》2015年6月供稿论文;