吕定刚（广西桂林市兴安县人民医院 541300）
【摘要】目的 研究野菊花总黄酮和蒙花苷含量的测定方法。方法 选取不同产地的野菊花药材作为研究对象，分别利用紫外分光光度法和HPLC法测定总黄酮和蒙花苷含量。结果 经测定，不同来源的野菊花在具体的总黄酮和蒙花苷含量上差异较显著，其中，蒙花苷和总黄酮含量均相对较高的野菊花大多来自安徽和湖北地区。结论 在测定野菊花中总黄酮和蒙花苷的具体含量的时候，可以采用HPLC法和紫外分光光度法，且最终的测定结果较为准确可靠，可为临床评估药草质量提供有力的依据。
【关键词】野菊花 总黄酮 蒙花苷 含量 测定方法
【中图分类号】R927.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）35-0013-02
本研究中，笔者选取不同产地的野菊花药材作为研究对象，分别利用紫外分光光度法和HPLC法测定总黄酮和蒙花苷含量。现将研究结果进行如下报告。
1材料与用品
1.1材料
选取不同产地（安徽、湖北、河北等地）的野菊花干燥花蕾若干作为研究对象，并由西南大学植物学教研室王海洋教授鉴定，确定为野菊（Chrysanthemum indicum L．）的干燥花蕾。
1.2仪器
（1）高效液相色谱仪：型号LC一20AB (SPD-20紫外检测器，日本岛津)；（2）紫外分光光度计：型号U-3010 (日本日立)；（3）电子天平：型号EL-2046 (梅特勒一托利多仪器有限公司)；（4）电热恒温水浴锅：型号 HHSYZI-NI (北京市风仪器仪表公司)。
1.3试药
蒙花苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号111528-200303)，水为自制重蒸水，乙腈和甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。
2方法
2.1蒙花苷含量测定[1,2,3]
2.1.1溶液制备
（1）供试样品溶液制备：取野菊花药材粉末0.25g左右，置于锥形瓶中，添加100mL甲醇，加塞，称定重量后加热回流3 h。自然冷却室温，添加甲醇补足减失重量。摇匀后劲滤过，得续滤液备用。（2）对照品溶液制备：于量瓶中放置5mg蒙花苷对照品，添加甲醇后进行超声溶解。
2.1.2色谱条件
用高效液相色谱仪测定对照品和供试品的色谱图，具体结果如下图所示。
图1 色谱图
1蒙花苷A对照品B供试品
2.1.3线性试验
精密吸取浓度为24.20 μg／mL的蒙花苷对照品溶液 2，5，10，20，30μL，利用高效液相色谱仪进行测定。得出回归方程，经计算可得，如果进样量在0.04840～0.726 0 μg之间的时候，蒙花苷会呈线性变化。
2.1.4稳定性
利用2.1.1中的方法进行溶液制备，然后室温下静置，分别于0，2，4，6，8，12 h进行测定。计算二者的色谱峰峰面积RSD，经计算可得对照品蒙花苷为0.54％，供试品为0.87％。
2.1.5重复性
另取同样的样品，按照浓度的高、中、低进行划分，并采用同样的方法每浓度制备3份供试品溶液，测定蒙花苷含量。计算3个浓度的RSD平均值，经计算为1.89％。
2.1.6回收率实验
设高、中、低3个浓度，分别制备3份供试品溶液，在不同浓度进行测定。计算不同浓度的平均回收率数值，经计算可得为97.1％，RSD为2.19％。
2.1.7测定样品
取适量药材，制备供试品溶液后测定蒙花苷含量，n=3。最终结果如表1所示。
表1 不同产地野菊花中蒙花苷含量(n=3)
编号采集时间来源原植物蒙花苷含量(%)RSD(%)
110.10.27安徽采集野菊花1.430.76
210.11.06湖北采集野菊花1.810.43
310.11.03湖北采集野菊花1.670.98
410.11.06安徽采集野菊花3.371.10
510.10.28湖北采集野菊花2.250.59
610.11.03江苏采集野菊花0.250.37
710.11.01河南采集野菊花0.491.24
810.10.29购买甘菊0.450.86
910.11.04购买甘菊0.310.51
1010.11.10河北采集甘菊00
2.2总黄酮含量测定[4,5,6]
2.2.1溶液制备
（1）对照品溶液：于量瓶中放置5 mg蒙花苷对照品，添加适量乙醇后进行超声溶解，放置备用。（2）供试品溶液：精密称定0.25 g左右野菊花药材粉末，添加适量甲醇，并经滤过、洗涤、甲醇回收，然后AB-8大孔吸附树脂纯化法来去除供试品中的绿原酸。再经过洗脱，洗脱完毕之后，得到洗脱液，置于量瓶中备用。
2.2.2选择测定波长
将80％乙醇作为空白对照，对供试品溶液和对照品溶液进行紫外光谱扫描，波长范围200～400 nm，结果显示测定波长为326 nm。
2.2.3曲线绘制
在326 nm处进行吸光度测定，得出回归方程，经计算可得如果在8.49 μg／mL~19.81μg／mL之间的时候，蒙花苷会呈线性变化。
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2.2.4 重复性试验
另取同样的样品，按照浓度的高、中、低进行划分，并采用同样的方法每浓度制备3份供试品溶液，测定吸光度。按照回归方程，计算3个浓度的RSD平均值，经计算为1.98％。
2.2.5稳定性试验
利用2.2.1中的方法进行溶液制备，然后室温下静置，分别于10，20，30，60，120，180 min，进行吸光度测定。计算色谱峰峰面积RSD，经计算可得RSD为0.63％。吸光度则在180 min内保持不变。
2.2.6 回收率试验
取适量药材，分别制备6份供试品溶液，在不同浓度进行测定。计算不同浓度的平均回收率数值，经计算可得RSD为2.39％，蒙花苷的平均回收率为96.4％。
2.2.7 样品测定
取适量药材，制备供试品溶液后进行测定，得出总黄酮实际含量(n=3)。具体结果如下表所示。
表2 不同产地野菊花中总黄酮含量(n=3)
编号采集时间来源原植物总黄酮含量(%)RSD(%)
110.10.27安徽采集野菊花6.691.38
210.11.06湖北采集野菊花7.471.57
310.11.03湖北采集野菊花7.660.99
410.11.06安徽采集野菊花9.841.69
510.10.28湖北采集野菊花8.671.41
610.11.03江苏采集野菊花3.410.86
710.11.01河南采集野菊花5.951.88
810.10.29购买甘菊2.311.93
910.11.04购买甘菊0.511.04
1010.11.10河北采集甘菊01.18
3讨论
野菊花为菊科多年生草本植物，被较为广泛用于临床治疗咽喉肿痛和头痛眩晕等，是一种常见的药材[7,8]。野菊花中有多种成分，含有多种化合物，例如黄酮类和挥发油以及绿原酸等[9,10]。在评估野菊花质量的时候，大多采取测定其中蒙花苷和总黄酮等化学成分含量的方式。总黄酮是野菊花中一种十分重要的化学成分，分子量较小，较易被人体吸收。且临床可以有效的减轻人体的疲劳程度，并对血管起到很好的保护作用，并具有抗脂肪氧化和抗衰老等多重功效。野菊花中的蒙花苷也是一种十分重要的成分，具有抗衰老和较强的调节性等多种功效。而且，经研究发现，来源于不同地区的野菊花在蒙花苷和总黄酮等具体含量方面存在较大的差异，于是导致不同产地的野菊花在质量和价值方面存在较大的区别。本研究中，经测定显示出，由安徽采集来的野菊花药材样本在蒙花苷含量方面与其他一些地区相比相对较高，最高可达3.37%，总黄酮含量也较高，最高为9.84%。即提示，不同来源的野菊花在具体的总黄酮和蒙花苷含量上差异较显著，其中，蒙花苷和总黄酮含量均相对较高的野菊花大多来自安徽和湖北地区[11]。究其原因，与安徽和湖北是野菊花的主要产地有关，这些地区所产的野菊花在蒙花苷和总黄酮含量方面均相对较高。但北方地区大多使用甘菊，总黄酮和蒙花苷含量均相对较低。
在测定野菊花中总黄酮含量的时候，大多将芦丁作为对照品，并利用亚硝酸钠一硝酸铝一氢氧化钠进行显色，然后通过比色测定实际含量[12]。本研究中，我们选择将蒙花苷作为对照品。具体测定的时候，采用的是紫外分光光度法。但是，在野菊花中还含有大量的绿原酸，且绿原酸在波长326 nm附近会出现最大吸收，会对总黄酮含量的测定产生影响[13]。因此，需要在测试的时候将绿原酸完全去除。以往一些研究大多采用醋酸乙酯萃取法来排除绿原酸对最终测定结果的干扰，但效果不甚理想，绿原酸的去除率较低。本研究中，我们则选择通过AB-8大孔吸附树脂纯化法来最大程度降低绿原酸对测定结果的干扰，得到了较高的绿原酸去除率，保证了最终测定结果的准确性。所以，在进行具体测定的时候，要注意利用大孔吸附树脂法对供试品进行处理[14,15]。
总之，在测定不同产地野菊花药材中蒙花苷和总黄酮含量的时候，利用 HPLC法和紫外分光光度法可以获得准确的结果，更好的为药草质量的评估提供可靠依据。
参考文献
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论文作者:吕定刚
论文发表刊物:《中外健康文摘》2013年第35期供稿
论文发表时间:2014-2-19
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