永州市职业技术学院附属医院消化内科 425100
摘要：目的：研究湖南永州地区汉、瑶族慢性胃炎、胃溃疡患者中表达cagA、vacA基因的幽门螺杆菌感染情况及与慢性胃炎、胃溃疡疾病的相关性。方法：收集2013年11月至2014年1月胃镜诊断为慢性胃炎、胃溃疡的患者，汉瑶民族各50例。对快速尿素酶试验及14C呼气实验联合确诊为幽门螺杆菌感染的患者取胃粘膜进行PCR扩增检测cagA、vacA基因。结果：100例慢性胃炎、胃溃疡的瑶汉族患者中，Hp阳性率为82%（82/100），其中汉族人群Hp阳性率为78%（39/50），瑶族人群为86%（43/50），汉、瑶民族Hp阳性率无明显统计学差异（P>0.05）。cagA阳性率是82.9%（68/82），Hp cagA的表达在汉、瑶民族之间，在慢性胃炎、胃溃疡患者之间均无统计学差异（P>0.05）。vacA阳性率为100%（82/82），检测出s1a/m1b、s1a/m2、s2/m2三种组合，各亚型所占的比例分别为53.7%（44/82）、34.1%（28/82）、12.2%（10/82）。其中Hp vacA s1a/m1b在慢性胃炎中的表达高于胃溃疡（P<0.05），vacA s1a/m2在胃溃疡中的表达高于慢性胃炎（P<0.05）；Hp vacA基因各亚型在湖南永州地区汉、瑶民族之间的分布差异无统计学意义（P>0.05）。结论：1、湖南永州地区汉瑶民族、慢性胃炎、胃溃疡患者感染Hp后以cagA+， vacA s1a/m1b+亚型占优势。2、Hp vacA s1a/m1b与慢性胃炎关系更为密切，Hp vacA s1a/m2与胃溃疡关系更为密切；3、未发现Hp cagA、vacA基因与湖南永州地区汉瑶民族具有相关性。
关键词：幽门螺杆菌；cagA基因；vacA基因；慢性胃炎；胃溃疡
幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）与慢性胃炎、胃溃疡的发生密切相关，其中细胞毒素相关基因A（Cytotoxin-associated gene A，cagA）【1】 和空泡细胞毒素（vacuolating cytotoxin A，vacA）vacA基因【2】是Hp的两个重要毒力因子。不是所有的Hp都含有cagA，它存在于Hp高毒力菌株中，表达产物为CagA蛋白【3】。所有的Hp菌株都含有vacA基因，但只有约50％~60％能表达有活性的VacA蛋白对宿主细胞产生多种毒性作用。国外研究提出不同的Hp菌株所产生的菌株毒力差异是导致不同疾病类型的主要原因。Hp菌株具有多样性，不同的地域、不同的民族之间所感染的Hp菌株类型可能存在差异。许海峰在研究Hp cagA、vacA基因在汉族与维吾尔人群中的特异性中发现vacA m2在维吾尔族人群中检出率显著于汉族，vacA m1b在汉族人群中的检出率显著于维吾尔族，提示Hp cagA、vacA基因可能存在民族差异性。本实验基于永州江华县是瑶族人群的聚集地，有充足的瑶族人群研究标本，采取聚合酶连反应技术（PCR）研究Hp cagA、vacA基因在湖南永州瑶汉民族慢性胃炎、胃溃疡患者中的表达，探讨Hp cagA、vacA基因的民族表达差异性及与慢性胃炎、胃溃疡疾病的相关性。
1材料和方法
1.1一般资料：随机收集于2013年11月-2014年1月在永州市职业技术学院附属医院（收集汉族病例）、江华瑶族自治县人民医院（收集瑶族病例）胃镜室因上腹部不适接受胃镜检查的慢性胃炎、胃溃疡患者的胃粘膜标本100例，其中瑶汉民族各50例。男56例，女44例，年龄45~60岁，平均54.3士2 岁，两组间年龄、性别等一般资料对比差异不显著。纳入标准：（1）、研究对象均为在永州出生并长大，父母三代同为汉族或同为瑶族、既往无重大基础疾病的患者。（2）、所有的研究对象均确保在实验开始前3个月内未曾服用过铋剂、质子泵抑制剂、抗酸剂、非甾体类抗炎药及抗生素等药物。（3）、胃镜及病理诊断为慢性非萎缩性胃炎、胃溃疡。
1.2 主要试剂及仪器：细菌基因组DNA快速抽提试剂盒、组织基因组DNA快速抽提试剂盒、Hp国际标准菌株NCTC11637（vacAs1a/m2，cagA+）、PCR扩增试剂盒（上海生工生物制剂有限公司）、Biometra T Grandient 热循环仪（Hettich 公司）。
1.3 方法：（1）采取14C呼气试验及胃窦黏膜组织快速尿素酶检测两种诊断方法，均阳性者认为Hp感染。（2）采取上海生物工程公司提供的组织基因组DNA快速抽提试剂盒及细菌基因组DNA快速抽提试剂盒分别对实验标本及Hp国际标准菌株NCTC11637（vacAs1a/m2，cagA+）提取Hp DNA。（3）引物序列为根据Pubmed里的权威文献所提供的Hp cagA、vacAs1a、s1b、s1c、s2、m1a、m1b、m2、m1b-m2引物序列，由上海生物工程公司合成。（4）按照聚合酶连反应技术步骤进行Hp cagA、vacA基因PCR扩增。
1.4、统计学处理：采用spss17.0软件对所获得的数据进行2检验，设检验水准a=0.05，其中P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
共获得82例Hp阳性标本，其中55例CSG标本（汉27，瑶28），27例GU标本（汉12，瑶15），结果见表1。经PCR扩增后获得68例cagA阳性标本，82例vacA阳性标本，有s1a/m1b、s1a/m2、s2/m2三种组合，各亚型所占的比例分别为53.7%（44/82）、34.1%（28/82）、12.2%（10/82），未检出s1b、s1c、m1a、m1b-m2等其他亚型。其中Hp
cagA+/vacAs1a/m1b+菌株是永州地区的优势基因。Hp cagA 在慢性胃炎、胃溃疡等不同
疾病类型中的表达及在永州地区汉、瑶等不同民族之间的表达差异无统计学意义（P>0.05）结果见表2、3，提示Hp cagA在湖南永州地区汉瑶民族中的分布不具有民族特异性，并与慢性胃炎、胃溃疡等疾病类型不相关。Hp vacA s1a/m1b在慢性胃炎中的表达高于胃溃疡，差异有统计学意义（P<0.05），vacA s1a/m2在胃溃疡中的表达高于慢性胃炎，差异有统计学意义（P<0.05），结果见表2，提示Hp vacA s1a/m1b与慢性胃炎关系更为密切，Hp vacA s1a/m2与胃溃疡关系更为密切；；Hp vacA基因各亚型在永州地区汉、瑶等不同民族之间的分布差异无统计学意义（P>0.05）。结果见表3，提示Hp vacA在湖南永州地区汉瑶民族中的分布不具有民族特异性。
3讨论
cagA是Hp的重要毒力因子，东西方对cagA基因的检出率的相关报道具有较大的差异。西方国家的报道Hp分离株中所得到的cagA基因的阳性率约为60％，并报道cagA与疾病的严重程度呈正相关。亚洲国家如新加坡、日本等对cagA的报道高达90%，且报道与疾病严重程度不相关。在本研究中，Hp cagA总检出率为82.9%（68/82），在分析Hp cagA基因的致病性时发现Hp cagA在慢性胃炎及胃溃疡中阳性率均较高，两者的分布无统计学差异（P>0.05），提示Hp cagA与疾病类型不相关，这都与亚洲国家的报道相近。在研究Hp cagA基因在汉、瑶民族中的分布时发现两者表达无统计学差异（P>0.05），提示Hp cagA基因在永州地区汉、瑶民族的表达中不存在民族差异性。关于东亚与西欧关于cagA基因检出率会有如此差异的原因现未能完全明确，分析可能与cagA基因存在多样性、地域差异性相关。同时可能正是因为东亚国家的高cagA检出率，故无法体现出cagA与各疾病类型之间的关系。
vacA基因存在于全部的Hp菌株中，VacA蛋白是其表达产物，能对宿主细胞产生多种毒性作用。由于Hp vacA的基因型为s区和m区基因依据不同方式结合形成的，理论上vacA基因可能具有s1a/m1、s1b/m1、s2/m1、s1a/m2、s1b/m2及s2/m2等多种嵌合体形式。vacA各亚型与不同疾病类型的关系，国内外文献有不同的报道。西方文献报道vacA s1a型菌株与胃粘膜炎症程度有关，消化性溃疡的Hp菌株的vacA很多表现为s1a/m2型。在本研究中，vacA基因的检出率是100%（82/82），与国内外的报道一致。共发现s1a/m2、vacA s1a/m1b、vacA s2/m2三种组合亚型，分析可能与样本量有限有关。其中在分析Hp vacA各基因亚型的致病性时发现vacA s1a/m1b在慢性胃炎中的表达高于胃溃疡（P<0.05），vacA s1a/m2在胃溃疡中的表达高于慢性胃炎（P<0.05），提示Hp vacA s1a/m2的毒性较s1a/m1b可能更高，与胃上皮损伤的程度更密切。但在研究Hp vacA各基因亚型在汉、瑶民族中的分布时发现两者表达差异无统计学意义（P>0.05）；提示Hp vacA基因在汉、瑶民族的表达中不存在民族差异性。
Hp菌株具有多样性，研究本地区的Hp的基因分型与胃疾病的关系有助于建立本地区的优势Hp基因库，更好的为Hp疫苗的研制、Hp的防治服务。但由于本研究所收集到的样本量有限，因此有待大样本的研究进一步论证。
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论文作者:杨铭,杨斐,唐峰波
论文发表刊物:《健康世界》2015年22期
论文发表时间:2016/3/16
标签：胃溃疡论文; 基因论文; 菌株论文; 慢性胃炎论文; 民族论文; 统计学论文; 汉族论文; 《健康世界》2015年22期论文;