【摘要】目的： 建立通络活血丸中毒性生物碱士的宁的半定量检查方法。方法：采用薄层色谱法，以甲苯- 丙酮- 乙醇- 浓氨试液（4: 5 : 0.6 : 0.4）为展开剂，稀碘化铋钾试液为显色剂。结果：，供试品色谱中在与士的宁对照品相应位置上有相同同颜色斑点，阴性无干扰；限量检查结果中，供试品色谱中士的宁的斑点小于对照品的斑点，通络活血丸中士的宁的检测限为5.28μg。 结论：该方法简便准确可靠，可用于通络活血丸中士的宁的半定量检查。
【关键词】 通络活血丸；士的宁；马钱子碱；薄层色谱法【中图分类号】 R2 【文献标号】 A 【文章编号】 2095-9753（2016）5-0160-02
通络活血丸是源于经典方剂加味而成，主要用于接骨舒筋，活血止痛。用于跌打损伤，骨断筋伤等症。处方中马钱子中含有的士的宁和马钱子碱既是其发挥疗效的药效成分，又是毒性较强的成分。
为保证临床用药的安全有效，故对其进行定性鉴别实验及限量检查。
1 仪器与试药AE 240 型电子天平（公司）；LXJ －Ⅱ B 型低速大容量多管离心机（上海但听科学仪器厂）；DZKW-4 电子恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司）；KQ-250B 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；薄层板为自制薄层板和青岛海洋化工厂；硅胶G（青岛海洋化工厂），其余试剂均为分析纯，水为去离子水。
2 方法与结果2.1 士的宁的定性鉴别2.1.1 供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品2 丸，剪碎，精密称定，加硅藻土5g，研磨分散，置具塞锥形瓶中，精密加入2mol/L 盐酸50ml，称重，浸泡过夜，超声处理（功率250W，频率40kHz）30 分钟，称重，用2mol/L 盐酸补足减失重量，转移至离心筒内，精密量取2mol/L 盐酸50ml 润洗锥形瓶，洗液移至离心筒，离心（转速为每分钟3500 转）30 分钟，精密量取上清液50ml，加浓氨试液调pH 值至10~11，置分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取5 次（50ml，50ml，50ml，50ml，50ml），合并三氯甲烷液，用铺有1g 无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，移至5ml 量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.1.2 对照药材溶液的制备 取马钱子对照药材0.5g，加三氯甲烷- 乙醇（10:1）混合溶液5ml 与浓氨试液0.5ml，密塞，振摇5 分钟，放置2 小时，滤过，取滤液作为对照药材溶液。
2.1.3 对照品溶液的制备 对照品溶液的制备：取士的宁对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml 含2.5mg 的溶液，作为对照品溶液。
2.1.4 阴性对照品溶液的制备 取通络活血丸阴性样品，按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。
2.1.5 薄层色谱鉴别 按照薄层色谱法（中国药典2010 年版一部附录Ⅵ B) 试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各5?l，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以甲苯- 丙酮- 乙醇- 浓氨试液（4 :5 : 0.6 : 0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。
供试品色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图1-2。
图2 马钱子薄层色谱图（青岛海洋）三批供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，且用不同厂家的薄层版进行定性检查，结果没有显著性差异。实验结果表明，该方法专属性、重现性良好。
2.2 士的宁的限量检查[2-3] 本品处方中马钱子为制马钱子，以达到降低毒性的目的，为了进一步保证制剂安全，拟采用薄层半定量法对马钱子中士的宁进行限量检查，《中国药典》2010 年版一部中规定：马钱子药材的用法与用量为炮制后入丸散用，每日为0.3 ～ 0.6g，规定药材中士的宁含量为1.2%~2.2%。得到每日服用的士的宁限量为13.2mg（0.6g×2.2%=13.2mg）。
2.2.1 供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品2 丸，剪碎，精密称定，加硅藻土5g，研磨分散，置具塞锥形瓶中，精密加入2mol/L 盐酸50ml，称重，浸泡过夜，超声处理（功率250W，频率40kHz）30 分钟，称重，用2mol/L 盐酸补足减失重量，转移至离心筒内，精密量取2mol/L 盐酸50ml 润洗锥形瓶，洗液移至离心筒，离心（转速为每分钟3500 转）30 分钟，精密量取上清液50ml，加浓氨试液调pH 值至10~11，置分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取5 次（50ml，50ml，50ml，30ml，30ml），合并三氯甲烷液，用铺有1g 无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，移至5ml 量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.2.2 对照品溶液的制备 对照品溶液的制备：取士的宁对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml 含2.5mg 的溶液，作为对照品溶液。
2.2.3 盐酸浓度的考察 吸取上述供试品溶液各Ⅰ、Ⅱ各5?l，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以甲苯- 丙酮- 乙醇- 浓氨试液（4:5:0.6:0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。
结果：应用2mol/L 盐酸和3mol/L 盐酸对马钱子中士的宁和马钱子碱的提取效率是相同的，故选用2mol/L 盐酸作为提取溶剂即可。
3 小结与讨论本品为大蜜丸，故加入硅藻土起到分散作用，利于溶剂穿透提取；浸泡过夜其目的为使盐酸充分透化，再超声提取，使盐酸与士的宁充分反应成盐；2mol/L 盐酸的配制方法为10ml 浓盐酸加水至50ml 即得。调pH 值至9~10 的过程要碱化充分，调节pH 值后静置15 分钟再测量一次，如果pH 降低，再进行碱化，以保证pH 值控制在9~10。
综上所述，上述实验结果表明，该方法专属性、重现性均良好，可用于通络活血丸中士的宁的鉴别及限量检查。
参考文献[1] 中国药典 [S]. 一部. 2010.[2] 封淑华, 戴敬, 韩桂茹, 宋淑敏. 薄层色谱法检查蚁乌风湿膏中毒性生物碱的限量[J]. 中国药师,2010,07:1051-1053.
论文作者:李杨 李昕光 宋宁 白珺 陈新
论文发表刊物:《中国医学人文》2016年第5期
论文发表时间:2016/6/27
标签：溶液论文; 马钱子论文; 薄层论文; 盐酸论文; 甲烷论文; 精密论文; 中士论文; 《中国医学人文》2016年第5期论文;