金雯
南京市六合区人民医院病理科 211500
【摘 要】目的：探究术中快速免疫组化技术检测CK5/6和P63在乳腺肿瘤冰冻切片诊断中的应用价值。方法：本院2014年7月-2015年7月期间接收的乳腺肿瘤患者27例，首先以术中冰冻切片免疫组化检测，后以常规免疫组化检测，对比两组检测效果差异。结果：两组检测准确率相比，无统计学差异（P＞0.05）；但术中冰冻切片免疫组化检测时间明显比常规免疫组化检测时间短，统计学差异显著（P＜0.05）。结论：术中快速免疫组化检测CK5/6和P63具有快速、准确的优点，可为乳腺肿瘤患者提供较为准确的检测结果。
【关键词】免疫组化技术；CK5/6和P63；乳腺肿瘤；冰冻切片
前言
冰冻切片制作过程较石蜡切片便捷，多用于手术快速病理诊断中[1]。但单纯依靠冰冻切片形态学观察，其诊断误差大，故需借助免疫组化来进一步判断。P63是由定位于染色体3w27-29基因编码的核蛋白，标记结果稳定[2。而CK5/6可反应乳腺管的定位肝细胞和中间腺细胞和中间肌细胞表达。故以冰冻切片免疫组化检测CK5/6和P63效果好于单纯冷冻切片形态学观察。为探究其与常规石蜡切片的检测的诊断准确性，本文选取适当案例，现做如下报道。
1资料与方法
1.1一般资料
选取本院27例乳腺肿瘤患者，年龄30-72岁，平均年龄（50.1±21.9）岁。收取所选患者术中冰冻切片，其中良性乳腺肿瘤（UDH）4例，浸润性导管癌（IDC）10例，导管原位癌（DCIS）13例。（1）纳入标准：难以区分良恶性；经冰冻HE片观察难以确定是否浸润患者。（2）排除标准：排除转院治疗；合并其他恶性肿瘤患者。
1.2方法
术中冰冻切片免疫组化：切片经甲醇20s固定，迅速置入磷酸盐缓冲液清洗1次。以磷酸盐缓冲液（20s）清洗后加入一抗体，孵育10min。再一次以磷酸盐缓冲液（20s）清洗后加入二抗体，37℃环境下孵育5min。最后以磷酸盐缓冲液（20s）清洗后以DAB显色，镜下控制。1min后苏木素复染10s，蓝花脱水封片。
常规免疫组化：取冰冻剩余组织常规石蜡切片。将石蜡切片置于烘干箱（65℃）烘干2h脱蜡。高温高压修复后自然冷却。以磷酸盐缓冲液冲洗3次，3min/次。除去磷酸盐液体后滴入一抗，置入4℃冰箱内过夜。以全氟壬烯氧基苯磺酸钠液冲洗3次，3min/次。除去磷酸盐液体后滴加二抗（抗鼠/兔聚合物），室温孵育半小时。以磷酸盐缓冲液冲洗3次（3min/次）后去除磷酸盐液体，滴加新鲜DAB液体。于显微镜下观察显色时间。后以自然水冲洗，苏木素复染，反蓝，ET梯度脱水，透明（二甲苯），封固（中性树胶）。
1.3评价指标
对比两组检测UDH、DCIS、IDC阳性率差异[3。CK5/6阳性：定位于乳腺肌上皮胞浆。P63阳性：定位于乳腺肌上皮胞核。依照阳性细胞数量及染色强度可分为四个等级。即阴性“-”（，单细胞染色，阳性细胞数＜5%），弱阳性“±-+”（细胞团染色，阳性细胞数为5%-25%）、阳性“2+”（簇状染色，阳性细胞数在25%-50%）、强阳性“3+”（弥散性染色，阳性细胞数＞50%）。
1.4统计学方法
将SPSS23.0软件作为数据统计分析，计数资料以n（%）表示，采用连续校正卡方检验。如P＜0.05则差异有统计学意义。
2结果
两组检测阳性率相比，无统计学差异，P＞0.05。但观察组检测时间为（35.7±10.3）min，对照组检测时间（50.3±10.1）h，两组时间对比，统计学差异显著，P＜0.05。
3.讨论
P63可作为敏感和相对特异性的肌上皮标志物，可降低平滑肌相关肌上皮标志物的诊断失误率[4]。而CK5/6可作为导管原位癌和小叶原位癌的鉴别标志物，用于临床确诊。故以P63和CK5/6作为免疫组化检测治疗具有良好的检测准确性。
快速免疫组化法可在取的患者肿瘤组织后开展，可对患者病情进行预判[5。其与常规石蜡检测方法相比，可短时间内冰冻切片，避免抗原遮蔽绞连，省去了抗原修复的检测，检测速率较快。且快速免疫组化法的其他检测步骤也相对缩短，避免了抗原丢失现象，与一抗、二抗的结合时间较短，故对结果的影响较小。故本次检测可知冰冻切片术中快速免疫技术检测CK53和P63，检测准确率较高，出结果的时间也较短。但本次检测中，快速免疫检测法出现了1例导管原位癌的误判，初步判断是因个别组织对抗体表达差异导致。且本人在日常检测中发现，如若各环节温度控制不当将会增加假阳性几率。故在此建议以冰冻切片术中快速免疫组化技术检验CK56和P63判断疾病分型，需严格控制各环节检测的温度，以降低假阳性率。
综上所述，以冰冻切片技术为乳腺肿瘤患者术中检测免疫组化CK5/6和P63指标，并判断其分型，有助于为临床医生决定手术范围和方法提供支持。同时，其还具备检测速度快，准确率高等特点，实用价值高。
参考文献：
[1] 孔静萍，周浩杰.快速免疫组化技术检测CK5/6和P63在乳腺肿瘤冰冻切片诊断中的应用[J].现代实用医学，2013，25（6）：659-661.
[2] 范京京.快速免疫组化检测CK5/6在乳腺肿瘤病理诊断中的应用价值[J].医学信息，2015，13（28）：350-349.
[3] 朱峥艳.CK5/6、p63、CD10在乳腺良恶性病变中的表达及意义[J].中国当代医药，2016，23（15）：109-111.
[4] 孙可望，邹寿椿，孟群，等.术中快速免疫组化检测早期乳腺癌前哨淋巴结的临床价值[J].浙江医学，2011，33（9）：1296-1299.
[5] 免疫组化在肺小活检中对鳞状细胞癌和腺癌的鉴别诊断意义[J].诊断病理学杂志，2016，23（1）：70-73.
论文作者:金雯
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2018年7月下第14期
论文发表时间:2019/1/8
标签：切片论文; 免疫论文; 冰冻论文; 乳腺论文; 磷酸盐论文; 阳性论文; 肿瘤论文; 《中国医学人文》(学术版)2018年7月下第14期论文;