Afatinib对膀胱癌T24细胞顺铂化疗敏感性研究论文_李卓,李远伟,卢强,陈佳

湖南省人民医院 湖南师范大学附属第一医院 泌尿外科

摘要:目的 探讨阿法替尼(Afatinib)与顺铂联合应用于膀胱癌细胞的协同作用,并对其作用机制及耐药性进行初步探讨。方法 先进行膀胱癌阿霉素耐药T24细胞株(T24-ADM)的制备,用噻唑蓝(MTT)法观察Afatinib联合顺铂对T24细胞增殖的抑制作用;分别用MTT法检测Afatinib作用前后顺铂对T24-ADM细胞增殖的抑制作用。结果 Afatinib和顺铂联合用药的T24细胞的增殖抑制率高于单用顺铂;顺铂对Afatinib作用后的T24-ADM细胞抑制率高于Afatinib作用前。结论 Afatinib与顺铂同时作用膀胱癌T24细胞时,两者在抑制T24细胞增殖上表现出协同作用,Afatinib作用后顺铂对于膀胱T24-ADM细胞的抑制率高于单独用顺铂的抑制率。

关键词:Afatinib;顺铂;多药耐药

膀胱癌是对化疗敏感的肿瘤,其中对含顺铂的化疗方案比较敏感,总有效率为40%-75%。当前化疗药物面临的最大难题是耐药性,多药耐药(multidrug resistance,MDR)是指当肿瘤细胞多次接触到某一种化疗药物后,随后对其他不同结构和不同药理作用的抗癌药物产生耐药性,也称之为肿瘤的多药耐药性[1]。

近年来靶向抗肿瘤药物成为研究的方向与热点。Afatinib为选择性靶向表皮生长因子受体。临床上主要用于研究治疗非小细胞肺癌[2]。目前针对膀胱癌的靶向药物较少,相关的单用或联合应用靶向和传统化疗药物的报道亦较少。我们设计了Afatinib与临床常用的顺铂联合应用于膀胱癌T24细胞的一些实验研究,以为临床应用提供实验依据。

1 材料和方法

(1)主要试剂

人膀胱癌T24细胞株 中国科学院上海细胞生物研究所

阿霉素(ADM) 美国Sigma公司

BIBW2992(Afatinib) 美国Selleck

顺铂(Cisplatin) 美国Sigma公司

(2)细胞培养

T24细胞培养和传代 膀胱癌T24-ADM细胞的制备:

(3)Afatinib处理T24-ADM细胞:

(4)噻唑蓝(MTT)法检测T24细胞增殖能力实验:

(5)MTT法检测Afatinib作用前后T24- ADM细胞对药物的敏感性

(6) 统计学分析

本实验数据资料通过SPSS 17.0 for Windows分析统计软件进行单因素方差分析。各实验计量资料用(X ±S)表示,P<0.05表示差异有显著意义。

2实验结果

1 Afatinib和顺铂联合对T24细胞的影响

通过MTT法观察在不同浓度的Afatinib溶液(1umol/L、10umol/L)和不同浓度的顺铂溶液(0、0.5、1.0、2.0、10.0μg/mL)处理后的膀胱癌T24细胞,发现联合用药组与单用顺铂组相比较,对T24细胞的OD值有显著差异性(p<0.05),联合用药组T24细胞存活率明显下降。联合用药组和单用Afatinib组相比较,同样发现联合用药组T24细胞存活率明显下降,两药合用对T24细胞的OD值有显著差异性(p<0.05)。两药合用对T24细胞的抑制率高于单独应用两药的抑制率,两者合用表现出协同作用(表1,图1)。

2 Afatinib作用前后T24- ADM细胞对顺铂的敏感性影响

通过MTT法观察Afatinib作用72h后的T24-ADM细胞和不经Afatinib处理的T24-ADM细胞,结果发现随着顺铂浓度的升高,Afatinib作用后T24-ADM细胞的存活率明显下降,且与Afatinib作用前T24-ADM细胞组相比较,存活率有显著差异性(p<0.05). Afatinib作用后顺铂对于膀胱T24-ADM细胞的抑制率高于单独用顺铂的抑制率。

3 讨论

膀胱肿瘤是泌尿生殖系最常见的恶性肿瘤,目前膀胱癌的治疗手段是以手术为主,放化疗及免疫治疗为辅的综合治疗。顺铂是治疗膀胱癌的一线药物,总有效率为40%-75%,约12%-20%的患者局部病灶获得完全缓解,约10%-20%的患者可获得长期生存。目前膀胱癌的化疗方案包括GC(吉西他滨和顺铂)方案和MVAC(氨甲喋呤、长春新碱、阿霉素和顺铂)方案。无论那种方案,顺铂都在膀胱癌的化疗中起到重要作用。但肿瘤细胞对于化疗药物的耐药性也是治疗肿瘤失败的重要原因。正是由于这种现象的出现,使得肿瘤细胞对化疗敏感性程度下降,治疗效果也随之变差。并且两种药物有明显的协同作用。Woodbur和Ciardiello等人发现吉非替尼和多种化疗药物,比如说顺铂、多系紫杉醇、卡铂、阿霉素等联合使用对高度表达EGFR的肿瘤细胞株的生长有着抑制作用,并且两类药物能起到相互协同的效果。Inoue[10]等人报告了用抗EGFR单克隆抗体MG-225联合紫杉醇对人移行细胞癌细胞株253JB-V的抗肿瘤效果由于单独用药。他们进一步在裸鼠体内试验中发现,联合用药后肿瘤血管生成受到抑制,淋巴结转移率减少,膀胱肿瘤的消退更加明显。他们认为,紫杉醇和MG-225联合用药能下调碱性成纤维细胞生长因子,血管内皮细胞生长因子,白细胞介素-8型基质金属蛋白酶9的表达,从而抑制肿瘤诱发的新生血管的生成和诱导细胞凋亡。

通过我们的试验,结合国内外的研究,我们认为,对于膀胱癌T24-ADM细胞,Afatinib可以提高该细胞对顺铂的敏感性。Afatinib与顺铂同时作用膀胱癌T24细胞时,两者在抑制T24细胞增殖上表现出协同作用,Afatinib作用后顺铂对于膀胱T24-ADM细胞的抑制率高于单独用顺铂的抑制率。

参考文献:

[1]Kuo MT. Roles of multidrug resistance genes in breast cancer chemoresistance. Adv Exp Med Biol. 2007,608(1):23-30.

[2]Miller VA,Hirsh V,Cadrane J,et al. Phase Ⅱ/Ⅲ double-blind randomized trial of BIBW 2992,an irreversible inhibitor of EGFR/HER1 and HER2+ best supportive care(BSC)versus placebo+ BSC in patients with NSCLC failing 1-2 lines of chemotherapy and erlotinib or gefitinib(LUX-Lung1)[J]. Annals of Oncology,2010,21(8):1-12.

[3]Warner TD,Mitchell JA. Cyclooxygenases:new forms,new inhibitors,and lessons from the clinic. FASEB J,2004,18(7):790-804.

论文作者:李卓,李远伟,卢强,陈佳

论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2017年第23期

论文发表时间:2018/1/11

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