喻林华[1]2004年在《小鼠早期胚胎发育过程中iNOS和nNOSmRNA的表达》文中进行了进一步梳理一氧化氮(nitric oxide，NO)是一种具有自由基性质的生物活性分子，能溶于水并具有脂溶性，化学性质非常活跃，作为一种小分子气体信号分子，NO在机体防御、神经信号传导、血管扩张等生理过程中发挥着重要的作用。生物体内的一氧化氮由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)催化L-精氨酸(L-arginine，L-Aig)脱胍基产生L-胍氨酸(L-citrulline，L-Cit)而成，哺乳动物有叁种不同构型的NOS，即神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(inflammatory or macrophage nitric oxide synthase，iNOS)。NOS是一氧化氮生成过成中的限速酶，因此某一组织中NOS的量能线性反应出该组织中NO的量。 近年来有许多研究表明NO在体内外早期胚胎发育中具有重要的调节作用。动物早期胚胎的发育是个体发育的重要阶段，其发育过程受体内许多因素(包括NO)的调节和影响。人们已从多个方面对早期胚胎发育过程作了大量的研究，然而对NO在早期胚胎中可能产生的生理调节作用了解较少。为了探讨NO对小鼠附植前胚胎发育的影响，采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase RT-PCR)方法检测了附植前各发育时期胚胎中nNOS和iNOS的mRNA的表达情况，用目的基因与内参照管家基因β-actin的引物共同扩增cDNA后，进行PCR产物的琼脂糖凝胶电泳，可见692bp和554bp处有明显的两条带。结果表明：小鼠囊胚中观察到有iNOS mRNA的表达，小鼠1-细胞期、2-细胞期、4-细胞期和8-细胞期胚胎以及桑椹胚中没有观察到iNOS mRNA的表达；而1-细胞期、2-细胞期胚胎中nNOS mRNA表达明显，且1-细胞期胚胎比2-细胞期胚胎表达量稍高。这表明NO参与了小鼠附植前胚胎的发育，并可能与附植前胚胎的信号传递及早期分化有关。
张璐[2]2005年在《小鼠早期胚胎中nNOS、iNOS 和 eNOS mRNA的表达》文中认为一氧化氮(nitric oxide,NO)是一种具有自由基性质的生物活性分子,作为一种信号分子,NO在机体防御、神经信号传导、血管扩张等生理过程中发挥着重要的作用。生物体内的一氧化氮由一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸脱胍基产生L-胍氨酸而成,现已确认的一氧化氮合酶有3种亚型,分别是神经元型NOS(nNOS)、内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS(iNOS)。NOS是一氧化氮生成过成中的限速酶,因此某一组织中NOS的量能线性反应出该组织中NO的量。 NO作为一种多功能的分子,在许多生理系统的信号传递中起重要作用,近年来有许多研究表明NO在体内外早期胚胎发育中具有重要的调节作用。动物早期胚胎的发育是个体发育的重要阶段,其发育过程受体内许多因素的调节和影响。人们已从多个方面对早期胚胎发育过程作了大量的研究,然而对NO在早期胚胎中可能产生的生理调节作用了解较少。为了探讨NO对小鼠早期胚胎发育的影响,深入研究早期胚胎发育机制,揭示其发育过程的调节规律,本研究采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase RT-PCR)方法检测了附植前各发育时期胚胎中nNOS、iNOS和eNOS的mRNA的表达情况。结果表明:1-细胞胚胎到早期囊胚均有nNOS和eNOS mRNA的表达,1-细胞期到桑椹胚的相对表达量有上升趋势,到早期囊胚又有所下降,经t检验各期胚胎nNOS和eNOSmRNA的相对表达量差异不显着(P>0.05)。除了早期囊胚,其它各期的早期胚胎均有iNOS mRNA的表达,且相对表达量有所增加,到桑椹胚时相对表达量最大,经t检验,1-细胞胚胎到8-细胞胚胎的iNOS mRNA的相对表达量差异不显着(P>0.05),而桑椹胚和其它各期胚胎的iNOS mRNA的相对表达量差异显着(P<0.05)。 结果表明,小鼠早期胚胎的发育至少需要两种NOS的参与,NO在小鼠早期胚胎的正常发育过程中起着重要的调节作用,并可能与附植前胚胎的信号传递及早期分化有关。
喻林华, 薛立群, 袁安文, 许道军, 向建洲[3]2004年在《小鼠附植前胚胎发育过程中nNOS and iNOS mRNA的表达》文中提出为了探讨NO(一氧化氮)对小鼠附植前胚胎发育影响,采用RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)方法检测了附植前各发育时期胚胎中nNOS(神经型一氧化氮合酶)和iNOS(诱导型一氧化氮合酶)mRNA的表达情况。结果表明:小鼠囊胚中观察到有iNOS mRNA的表达,小鼠1-细胞期、2-细胞期、4-细胞期和8-细胞期胚胎以及桑椹胚中没有观察到iNOS mRNA的表达:而1-细胞期、2-细胞期胚胎中nNOSmRNA表达明显,且1-细胞期胚胎比2-细胞期胚胎表达量稍高。这表明NO参与了小鼠附植前胚胎的发育,并可能与附植前胚胎的信号传递及早期分化有关。
胡淑敏[4]2007年在《一氧化氮合酶与神经管畸形关系的研究》文中认为目的神经管畸形(neural tube defects，NTD)是人类常见先天畸形，是影响人口素质的最常见、最严重的出生缺陷性疾病之一。它是由于在胚胎发育过程中，神经管闭合不全所引起的一组缺陷，包括无脑畸形、脑膨出和脊柱裂等。它们在病因学上是多因素的，是遗传学因素和环境因素共同作用结果。胚胎脑发育的早期阶段主要是神经板隆起、弯曲、闭合形成神经管，神经管的头部从前向后依次发育形成脑的基本组织形态，即端脑、间脑、中脑、后脑，在神经管闭合过程中出现异常就会导致NTD。研究表明一氧化氮(nitric oxide，NO)与脑内许多生理功能相关，尤其在神经系统分化过程中扮演重要角色。另有文献报道在鸡胚NO通过细胞凋亡调节细胞数目影响神经管的闭合，从而影响神经管发育。由于NO极不稳定，半衰期短，目前尚无法直接定位组织中NO的分布，主要通过对一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的定位来反映NO的分布。NOS是催化合成内源性NO的唯一酶，在很大程度上决定着NO的生物学效应。NOS分为3型，分别为神经元型一氧化氮合酶(neuronal NOS，nNOS)；诱导型一氧化氮合酶(inducible NOS，iNOS)；内皮型一氧化氮合酶(endothelial NOS，eNOS)。研究资料表明NO增高可以促使细胞发生凋亡，从而影响神经管的发育，但在叁种类型NOS中，究竟是来源于哪一种类型NOS的NO在神经管发育过程中起主导作用目前尚不清楚。因此，本研究采用乙烯硫脲(Ethylenethiourea，ETU)致畸的大鼠神经管畸形动物模型观察nNOS、iNOS、eNOS在胎鼠大脑皮质中表达情况，从血管内皮细胞与神经细胞相互作用影响神经管发育角度，探讨NOS与脑发育异常的关系，希望为脑发育异常机制提供理论根据。材料和方法一、神经管畸形大鼠模型制备与动物分组Wister大鼠80只(中国医科大学第一临床学院实验动物中心提供)体重250～300克。雌雄(比例3：1)交配后，清晨阴道涂片发现精子定为孕0天，在孕10天时，随机选取50只孕鼠为ETU致畸组，经胃管注入1％ETU，剂量为125mg/kg，制作神经管畸形大鼠模型。10只为对照组，注入等量生理盐水。分别在大鼠孕14d、20d时，剖宫取出胎鼠，一部分胎鼠用0.9％的生理盐水10毫升及4％多聚甲醛20毫升分别进行左心室灌注固定，然后在显微镜下取出胎鼠的大脑组织，置于4％多聚甲醛后固定3小时，转入30％蔗糖过夜，将固定好的标本连续冠状冰冻切片或石蜡包埋；另一部分胎鼠在显微镜下分离新鲜未经固定大脑组织，液氮速冻后于-70℃保存。实验分四组：对照组、给药无畸形组、脊柱裂组、脑膨出组。二、神经管畸形胎鼠大脑皮质的病理改变观测1、对E20胎鼠大脑皮质进行HE染色，以明确脑膨出胎鼠大脑皮质的病理结构变化。2、应用细胞凋亡原位检测法检测不同组E20胎鼠大脑皮质神经元凋亡情况，并计算凋亡指数，进行X~2检验。3、应用免疫荧光技术检测bcl-2在E20胎鼠大脑皮质神经元细胞中的分布和表达，应用Western blot法检测胎鼠大脑皮质中caspase-3、bcl-2的蛋白表达半定量分析。叁、神经管畸形胎鼠大脑皮质中NOS的差异表达检测1、应用免疫荧光技术检测nNOS、iNOS、eNOS在E20胎鼠大脑皮质神经元和脑血管内皮细胞中的分布和表达，应用免疫荧光技术检测V8脑血管内皮细胞中的分布和表达；应用Western blot法检测胎鼠大脑皮质中nNOS、iNOS、eNOS的蛋白表达半定量分析。2、应用实时定量PCR对nNOSmRNA、eNOSmRNA、iNOS mRNA的表达作相对定量分析。结果一、神经管畸形模型成功制备在大鼠孕10d给予ETU处理后，孕20d剖腹取出胎鼠发现可出现脑膨出、脊柱裂、无尾、肛门闭锁等多种畸形。对对照组、给药无畸形组、脊柱裂组、脑膨出组E20胎鼠大脑皮质进行HE染色，发现给药无畸形组、脊柱裂组与对照组的胎鼠大脑皮质无明显异常改变，而脑膨出组胎鼠大脑皮质明显变薄，细胞数量减少，部分细胞变性(细胞核淡染，肿胀)。二、应用细胞凋亡原位检测法检测不同组E20胎鼠大脑皮质中细胞凋亡情况E20胎鼠大脑皮质中Tunel阳性细胞数目在正常组、给药无畸形组及脊柱裂组细胞凋亡数无明显改变，而在脑膨出组胎鼠大脑皮质细胞凋亡数明显多于对照组，计算凋亡细胞百分率，然后用X~2检验进行分析，脑膨出组和对照组的细胞凋亡指数差异有统计学意义(P<0.05)。叁、免疫荧光技术检测E20胎鼠大脑皮质中bcl-2的表达差异E20胎鼠大脑皮质中bcl-2阳性神经元表达量在对照组、给药无畸形组、脊柱裂组无明显改变，而脑膨出组bcl-2阳性神经元表达量明显减少。四、Western-blot检测E14、E20胎鼠大脑皮质中caspase-3、bcl-2蛋白的表达1、用Western-blot方法检测不同组E20胎鼠大脑皮质中caspase-3、bcl-2蛋白表达水平，结果表明对照组、给药无畸形组、脊柱裂组胎鼠大脑皮质中caspase-3、bcl-2蛋白表达水平无明显改变，而脑膨出组胎鼠大脑皮质中caspase-3蛋白活化片段表达水平明显增加，bcl-2蛋白表达水平明显减少。2、用Western-blot方法检测脑膨出组、对照组E14、E20胎鼠大脑皮质中caspase-3蛋白表达水平，结果表明E14、E20脑膨出组大脑皮质中caspase-3活化片段表达明显高于对照组(P<0.01)。五、胎鼠大脑皮质中nNOS、eNOS和iNOS蛋白的差异表达1、利用免疫荧光技术检测到给药无畸形组、脊柱裂组和对照组E20胎鼠大脑皮质中nNOS阳性神经元数量无明显改变，而脑膨出组胎鼠大脑皮质中nNOS阳性神经元数量明显减少，计算平均光密度值发现与其他组相比，脑膨出组胎鼠大脑皮质中nNOS表达量明显减少；给药无畸形组、脊柱裂组和对照组E20胎鼠大脑皮质中eNOS阳性血管数量无明显改变，而脑膨出组胎鼠大脑皮质中eNOS阳性血管数量增多，计算平均荧光密度值发现各组胎鼠大脑皮质中eNOS的表达无明显改变，同样计算V8染色血管数量及平均荧光密度值亦得到同样结果；在各组未检测到iNOS阳性染色。2、在Western blot分析中，发现E20胎鼠大脑皮质中nNOS、eNOS蛋白表达在给药无畸形组、脊柱裂组和对照组间无明显改变，而脑膨出组E20胎鼠大脑皮质中nNOS蛋白表达明显减少，eNOS蛋白表达增加；在各组未检测到iNOS蛋白表达。3、在Western blot分析中，发现与对照组比较，E14脑膨出组胎鼠大脑皮质中nNOS蛋白表达明显减少，eNOS蛋白表达水平明显增加，与E20结果相一致；在E14胎鼠大脑皮质中检测到iNOS蛋白微量表达，但脑膨出组与对照组比较无明显差异，E20胎鼠大脑皮质中未检测到iNOS表达。六、不同组E20胎鼠大脑皮质中nNOS mRNA、eNOS mRNA和iNOS mRNA的表达1、实时定量PCR检测发现对照组、给药无畸形组、脊柱裂组和脑膨出组E20胎鼠大脑皮质中nNOS mRNA表达无明显改变；2、给药无畸形组、脊柱裂组和对照组胎鼠大脑皮质中eNOSmRNA表达无明显改变，而脑膨出组胎鼠大脑皮质中eNOS mRNA表达明显增多；3、在各组未检测到iNOSmRNA表达。结论1、在用ETU成功制备神经管畸形大鼠模型过程中，发现孕10天是获得神经管畸形大鼠模型的最佳给药时间。2、神经管畸形中脑膨出胎鼠大脑组织中eNOS表达升高，引起NO释放增加，可能是通过caspase-3、bcl-2途径促发神经元凋亡，导致神经管闭合缺陷引起脑发育异常，说明eNOS在神经管畸形发育过程中起主导作用。3、脑血管与神经元发育比例失衡，可能也是脑发育异常的一个重要因素。
卢岩[5]2005年在《L-精氨酸对大鼠被动吸烟致宫内发育迟缓的防治作用及其机理研究》文中进行了进一步梳理目的 胎儿宫内发育迟缓(IUGR),也称胎儿生长受限,是围产期主要并发症之一,其围产儿的死亡率较正常儿高6-9倍,存活者生后可出现智力、体格发育迟缓,成年后代谢综合征的易感性也明显增加,严重影响人口素质,但IUGR目前尚无公认有效的治疗方法,因此其防治已成为围产医学的重要课题。IUGR的病因复杂,分类不一,其中外因性、不均称性IUGR占绝大多数,多为孕中晚期受各种有害因素的影响导致子宫胎盘血流障碍,胎盘功能不足,胎儿供养/氧不足,发育受限。IUGR的病因通常难以确定,因此研究其发病机制,寻求有效的干预措施,阻断IUGR发生的病理生理过程,改善胎儿发育就成为IUGR防治研究的切入点。目前关于IUGR的发病机制国内外研究已取得一定进展,证实胎盘功能不足是不均称性IUGR发生的关键,但多为病理形态研究和血流动力学检测,至于与胎盘循环相关的因子的相互作用及其变化,围产期IUGR对胎儿脑发育的影响,外源性药物干预能否改善IUGR胎盘病理生理改变,纠正胎儿脑组织损伤,目前国内外研究还很少,为本研究探讨的重点。一氧化氮(NO)是调节胎儿胎盘循环的关键因子之一。已经证实NO的合成释放减少在IUGR的病理生理变化中起重要作用,但直接补充外源性NO并未达到预期的治疗目的。NO的前体物质是L-精氨酸(L-Arg),L-Arg能扩张血管、改善微循环,已用于临床多种疾病的治疗,能否通过补充L-Arg来改善病理条件下NO的不足?L-Arg的使用剂量与机体或组织局部NO水平及其它与NO相关的指标的关系如何?L-Arg又是通过什么途径发挥作用?这些均是L-Arg临床应用前应该解决的问题。NO作为一种不稳定的小分子,在某些条件下作为自由基,可具有负向的生物学作用,被称为双刃剑,因此选择L-Arg作为孕期给予的干预药物,研究L-Arg的作用机理、剂量效应及对胎儿的影响是本研究的目的。
李锦涛[6]2013年在《CHAT及nNOS基因在先天性胆总管囊肿壁中的分布及意义》文中认为目的：先天性胆总管囊肿(Congenital choledochal cyst, CCC)，是小儿时期常见的一种先天性胆道发育异常，表现为肝外胆道远端狭窄及管壁发育不良或存在胆胰管合流异常，使胆汁淤积，排出障碍导致胆总管扩张。先天性胆总管囊肿在婴幼儿期发病者中占2/3，其他1/3见于青年，男女比例为1:4~5[1]。截至目前，先天性胆总管囊肿的病因仍不十分明确，近年来随着对本病形态学、胆汁酶学及动物实验等研究的进展，认为CCC是由多种因素造成的先天发育异常，而胆总管远端神经、肌肉发育不良的发病因素越来越受到人们的重视。胆道的神经分布包括胆道壁内的内在神经和外来神经系统两部分，二者相互协调，共同调节胆道的功能。研究表明调节胆道的神经递质主要有兴奋性递质Ach和抑制性递质NO，但CCC病变囊肿中不同神经递质的分布及其与不同囊肿类型的关系仍不十分清楚。故本研究通过利用RT-PCR的方法检测对比CCC患儿肝外胆道不同部位间神经网络结构中合成抑制性神经递质NO的关键酶-一氧化氮合酶（Neuronal Nitric Oxide Synthase, nNOS）和兴奋性递质Ach的关键酶-胆碱乙酰转移酶（Choline acetyltransferas, CHAT）的表达情况，从基因水平和神经动力角度分析肠神经调控异常在CCC发病机制中的作用，从而进一步完善CCC的发病机理，为其临床治疗提供重要的理论依据。方法：随机选取2011年1月~2012年9月河北医科大学第二医院小儿外手术治疗的先天性胆总管囊肿患儿20例作为研究对象，男6例，女14例，男：女=1：2.3；年龄8月~11岁，平均年龄4.33±2.94岁，其中以腹痛就诊患儿12例，以黄染便白就诊患儿4例，以发热就诊患儿2例，胆道穿孔的患儿1例，产前B超检查发现1例，所有患儿术前经过B超或CT检查后明确诊断，手术切去胆总管囊肿及胆囊，行肝管空肠Roux-en-Y吻合术或肝管十二指肠吻合术，分别切取胆总管囊肿远、近端管壁和胆囊壁作为远端组、近端组和胆囊组，将叁组标本液氮速冻后置于-70℃冰箱中保存。用荧光定量RT-PCR方法检测各组标本中nNOSmRNA和CHAT mRNA转录水平的表达情况，所得数据输入SPSS13.0for Windows软件进行数据分析， P＜0.05为具有统计学意义。结果：通过RT-PCR检测先天性胆总管囊肿不同部位CHAT和nNOS基因的表达情况，发现上述指标在各组中有不同表达。CHAT和nNOS基因在先天性胆总管囊肿的近端组表达分别为1.38±0.21，1.65±0.16；在远端组表达分别为1.79±0.21，1.15±0.17；在胆囊组的表达分别为1.30±0.19，1.57±0.12；在囊状扩张型CCC远端管壁中的表达为1.74±0.21，1.11±0.15；在梭状扩张型CCC远端管壁中的表达为1.86±0.20，1.22±0.18。统计学分析发现CHAT基因在先天性胆总管囊肿的近端组、胆囊组的表达均少于囊肿远端组表达（P＜0.05），有显着性差异；而CHAT基因在近端组和胆囊组之间没有显着性差异（P＞0.05）。nNOS基因在先天性胆总管囊肿近端组、胆囊组表达均多于远端组（P＜0.05），有显着性差异；而在近端组和胆囊组之间没有显着性差异（P＞0.05），无统计学意义。CHAT基因和nNOS基因在囊状扩张型CCC远端组和梭形扩张型CCC远端组中表达量之间比较无显着性差异（P＞0.05）。结论：1. CHAT基因表达在CCC远端表达多于囊肿的近端和胆囊，说明兴奋性胆碱能神经在先天性胆总管囊肿的远端分布相对增多，导致远端胆管环形平滑肌痉挛性收缩，导致CCC发病。2. nNOS基因表达在CCC远端表达少于近端和胆囊，说明抑制性神经在胆总管囊肿远端分布减少，胆管远端平滑肌舒张受限，导致胆总管囊肿的形成。3. CHAT、nNOS基因在近端组和胆囊组表达无明显差异，说明肠神经动力调控异常可能以胆总管囊肿的远端病变为主。4.兴奋性和抑制性神经递质的分布异常在不同病理类型CCC的发病中并不存在差异。
张莉[7]2004年在《针刺对大鼠脑缺血再灌注后线粒体损伤相关因素影响的研究》文中指出脑对缺血极为敏感,脑缺血再灌注损伤后,机体主动或被动地作出广泛的反应,构成了脑缺血再灌注损伤复杂的病理机制。由于脑缺血后存在着缺血时相改变,为在治疗时间窗内研究针对性干预,改善大脑功能提供了理论依据。由于缺血半暗区理论提出,使脑缺血再灌注损伤机制研究重点定位于脑组织出现不可逆之前。脑缺血再灌注损伤后的基本病理改变脑水肿及细胞凋亡,是各种因素相互作用和相互联系的结果。虽然线粒体功能恢复在缺血再灌注细胞复苏中必不可少,但线粒体在脑损伤一系列瀑布反应中起着非常关键作用,围绕着线粒体介导的脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的主要事件,脑缺血再灌注损伤病理上发生了一系列时间和空间的错综级联反应。脑缺血时,线粒体氧化磷酸化不能有效进行,ATP 生成减少而水解增多,细胞由于能量不足发生功能障碍,随着缺血时间延长,线粒体功能和结构受损,ATP 耗竭,细胞功能进一步损害。再灌注时,线粒体产生大量自由基,同时线粒体钙转运紊乱,发生永久性通透性改变,胞浆钙急剧升高,在 Bcl-2 家族、半胱天冬酶、细胞色素 C 等凋亡相关因子的作用下,导致细胞凋亡发生。脑缺血再灌注损伤可以诱导神经细胞再生,有内源性 NSC 激活现象,脑功能可以发生重建。神经元再生有分布和移行规律。神经生长因子和神经特异性蛋白等和神经再生关系密切。在众多的细胞因子中,神经营养因子在神经再生中具有重要作用。靶源性神经营养因子通过自分泌、旁分泌方式,转输作用于相应神经细胞,只有那些获得足够神经营养因子的神经元能够成活,否则就会死亡。脑缺血属于中医学中的中风病范畴。针刺治疗中风在我国已有数千年的临床验证,早在《黄帝内经》、《甲乙经》及《针灸大全》中即有记载。由于时间治疗窗的提出,针刺疗法已经从对缺血性中风后遗症和恢复期的治疗转到了对其急性期的治疗研究;针刺治疗脑缺血再灌注损伤是多途径、多因素综合作用的结果。针刺对脑缺血再灌注损伤的保护作用研究涉及面较广,从对大鼠神经功能行为缺损的干预、脑组织的病理形态学的改变、脑功能代谢和脑微循环的改善到缺血性神经元凋亡信号转导的影响等方面都有所及。对针刺机理的研究已经不是仅限于器官和系统水平的整体分析,对针刺效应的研究已经在微观水平层面上逐渐开展。虽然针灸的脑保护作用机制还未十分明确,但很可能是通过激发机体的潜能,启动包括内源性抗缺血损伤的能力在内的多种调控机制,共同发挥抗损伤的脑保护作用。这种脑保护作用也可能促进了内源性神经干细胞参与病损的修复。本研究利用线拴法闭塞大鼠大脑中动脉造成局灶性脑缺血再灌注模型和在体外培养海马神经元模拟脑缺血再灌注损伤模型,进行了下列主要研究工作:① 从脑损伤后起关键作用的线粒体改变入手,分别观察线粒体膜电势变化、细胞内钙变化,以及与其密切相关的能说明体内自由基产生和清除状况的脑组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)动态变化。② 从与抗脑损伤有相应关系的神经再生营养角度,观察局灶性脑缺血再灌注损伤后神经生长相关肽(GAP-43)表达和血清转化生长因子(TGF-β)含量变化和二者的相关关系。③ 电
王珊[8]2008年在《DDAH在调节神经细胞分化及介导药物抗神经细胞凋亡中的作用及机制研究》文中提出一氧化氮(nitric oxide，NO)合酶(nitric oxide synthase，NOS)／NO与神经细胞分化密切相关。二甲基精氨酸二甲胺水解酶(dimethylarginine dimethylaminohydrolase，DDAH)能特异性水解内源性NOS抑制物非对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine，ADMA)，上调NOS活性。DDAH广泛存在于各种细胞和心血管、神经系统组织中。目前认为其活性降低所致的ADMA代谢减少与多种心血管疾病的发生发展密切相关，是一个新的心血管疾病相关蛋白和药物防治靶点。新近研究发现，舌下运动神经损伤后DDAHmRNA的水平明显升高，同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)可显着降低神经细胞DDAH的表达和活性并增加ADMA的水平，提示DDAH可能与神经系统发育或某些神经系统疾病的发生发展密切相关。本论文将从分子细胞水平系统研究DDAH在神经细胞分化和凋亡中的作用，并探讨DDAH／ADMA通路是否介导3,4,5,6-四羟基(口山)酮和全反式维甲酸(all-trans retinoic acid，atRA)的抗凋亡作用。主要研究工作如下：在神经生长因子(nerver growth factor，NGF)诱导PC12神经细胞分化的体外模型，利用基因转染技术沉默或过表达DDAH1基因，系统探讨DDAH1调节神经细胞分化的作用及分子机制。结果显示：NGF(50 ng／ml)能诱导神经细胞分化，增加NO水平、DDAH1、nNOS mRNA及蛋白表达，并呈时间依赖性；NGF降低DDAH2mRNA和蛋白表达；NGF对DDAH活性和ADMA水平无明显影响；L-NAME能抑制NGF诱导的神经细胞分化和NO水平，但不影响DDAH1及DDAH2的表达。沉默DDAH1可抑制NGF诱导的神经细胞分化及其标志性蛋白微管相关蛋白(microtubule-associatedprotein2，MAP2)的表达，同时抑制nNOS mRNA的表达；而过表达DDAH1诱导神经细胞分化，增加G_0／G_1期细胞百分比，增加nNOSmRNA的表达，L-NAME能抑制过表达DDAH1诱导的神经细胞分化。(口山)酮是普遍存在于植物中的一类多酚类化合物。具有强效的抗氧化、抗炎作用。某些(口山)酮单体对血管内皮功能的保护作用与升高DDAH活性从而降低内源性ADMA水平有关。3,4,5，6-四羟基(口山)酮是我校药学院药物化学系合成的新型(口山)酮单体化合物。我室前期工已证明，3,4,5,6-四羟基(口山)酮对缺血心肌及血管内皮具有保护作用，其机制与抑制氧化应激有关。基于Aβ所致神经细胞凋亡与氧化应激密切相关及3,4,5,6-四羟基(口山)酮具有抗氧化特性，本实验采用Aβ_(25-35)诱导PC12神经细胞损伤建立阿尔茨海默病(Alzheimers disease，AD)的细胞模型，研究3,4,5,6-四羟基(口山)酮对Aβ_(25-35)所致PC12细胞凋亡的保护作用，并探讨其机制是否与DDAH／ADMA途径有关。结果显示：10μM Aβ_(25-35)与PC12神经细胞孵育48 h能显着增加细胞凋亡率；Aβ_(25-35)处理PC12细胞3 h后逐渐增加ROS水平和caspase-3活性，抗氧化剂PDTC(5μM)或caspase-3活性抑制剂DEVD-CHO(100μM)能显着抑制Aβ_(25-35)诱导的凋亡；(口山)酮(3，10或30μM)能显着抑制Aβ_(25-35)诱导的细胞凋亡，ROS水平和caspase-3活性的增加。Aβ_(25-35)处理PC12神经细胞6 h后能显着降低DDAH活性和增加ADMA水平，(口山)酮(3，10或30μM)能显着抑制Aβ_(25-35)诱导的上述作用。ADMA浓度和时间依赖性的诱导细胞凋亡；ADMA(10μM)处理PC12细胞3 h后逐渐增加ROS水平和caspase-3活性，抗氧化剂PDTC(5μM)或caspase-3活性抑制剂DEVD-CHO(100μM)能显着抑制ADMA诱导的细胞凋亡。atRA在调控细胞生长、分化、凋亡等生命活动中起重要作用。atRA通过与维甲酸受体(retinoic acid receptor，RAR)和维甲类受体(retinoid X receptor，RXR)结合，从而启动一系列靶基因的转录。其中DDAH2的启动子区含有维甲酸反应元件。新近研究发现，在培养的内皮细胞atRA能上调DDAH2的表达。本研究将探讨CoCl_2诱导的PC12神经细胞调亡是否涉及DDAH／ADMA通路及atRA是否通过上调DDAH2表达抑制CoCl_2诱导的神经细胞凋亡。结果显示：125μM CoCl_2与PC12神经细胞孵育48 h能显着增加细胞凋亡率；CoCl_2处理PC12细胞3 h后逐渐增加ROS水平和caspase-3活性；atRA(0．1，1 or 10μM)能显着抑制CoCl_2诱导的细胞凋亡、ROS水平与caspase-3的活性的增加；抗氧化剂PDTC(5μM)或caspase-3活性抑制剂DEVD-CHO(100μM)能显着抑制CoCl_2诱导的凋亡。CoCl_2处理PC12神经细胞6 h后能显着降低DDAH活性和增加ADMA水平；8 h或12 h后分别显着降低DDAH2 mRNA或蛋白的表达；atRA(0．1，1 or 10μM)可显着抑制CoCl_2对DDAH活性、表达及ADMA水平的影响。在DDAH2基因被沉默的PC12神经细胞，atRA(0．1μM)不能抑制CoCl_2诱导的细胞凋亡；CoCl_2处理DDAH2基因被沉默的PC12神经细胞12 h后，atRA(0．1μM)不再抑制CoCl_2对ROS水平、caspase-3活性和ADMA水平的影响。
范源, 罗嘉, 甘麦邻, 谭娅, 张顺华[9]2018年在《长链非编码RNA TERRA的研究进展》文中认为端粒是染色体末端的特殊结构,对染色体具有保护作用,并且和衰老及很多疾病相关。长链非编码RNA是长度大于200bp且一般不具有编码功能的RNA。TERRA(telomeric repeat-containing RNA)是由端粒重复序列转录的一类长链非编码RNA,研究表明TERRA具有参与调控端粒长度,促进异染色体形成和保护染色体末端等功能,并且TERRA的表达与疾病和衰老相关。由于TERRA对于端粒具有重要作用,因此对于TERRA的研究已经成为端粒相关研究中的热点。目前对于TERRA的转录调控及生物学功能已有较为深入的了解。现对TERRA的生物学特性,功能和与疾病及衰老的关系进行综述,以期为TERRA后续的研究如作为疾病治疗靶点,延缓衰老等提供参考。
谢晓婷, 张建成[10]2017年在《心脏生物起搏器的最新研究进展及发展趋势》文中提出临床上病窦综合征等缓慢性心动过缓的病人需要植入电子起搏器,但电子起搏器的应用仍有缺陷和局限性,因此构建心脏生物起搏器成为探索治疗病态窦房结综合征的新方向。本文就构建心脏生物起搏器的研究进展进行综述。
参考文献：
[1]. 小鼠早期胚胎发育过程中iNOS和nNOSmRNA的表达[D]. 喻林华. 湖南农业大学. 2004
[2]. 小鼠早期胚胎中nNOS、iNOS 和 eNOS mRNA的表达[D]. 张璐. 湖南农业大学. 2005
[3]. 小鼠附植前胚胎发育过程中nNOS and iNOS mRNA的表达[C]. 喻林华, 薛立群, 袁安文, 许道军, 向建洲. 全国首届动物生物技术学术研讨会论文集. 2004
[4]. 一氧化氮合酶与神经管畸形关系的研究[D]. 胡淑敏. 中国医科大学. 2007
[5]. L-精氨酸对大鼠被动吸烟致宫内发育迟缓的防治作用及其机理研究[D]. 卢岩. 中国医科大学. 2005
[6]. CHAT及nNOS基因在先天性胆总管囊肿壁中的分布及意义[D]. 李锦涛. 河北医科大学. 2013
[7]. 针刺对大鼠脑缺血再灌注后线粒体损伤相关因素影响的研究[D]. 张莉. 北京中医药大学. 2004
[8]. DDAH在调节神经细胞分化及介导药物抗神经细胞凋亡中的作用及机制研究[D]. 王珊. 中南大学. 2008
[9]. 长链非编码RNA TERRA的研究进展[J]. 范源, 罗嘉, 甘麦邻, 谭娅, 张顺华. 中国生物工程杂志. 2018
[10]. 心脏生物起搏器的最新研究进展及发展趋势[J]. 谢晓婷, 张建成. 福建医药杂志. 2017