张海霞[1]2003年在《大鼠脑缺血性预适应保护机制及保护药物的筛选研究》文中提出缺血预适应(Ischemic preconditioning)是指对脑预先进行程度较轻的缺血处理，可以降低随后的致死性缺血的损伤作用，发挥脑保护作用。由于缺血预适应在临床应用受到限制。因此药理性预适应的概念应运而生。药理性预适应(Pharmacological Preconditioning)是指应用某些活性物质的直接／间接药理作用来发挥类似预适应的保护作用。这一概念的提出不仅有助于了解机体内的抗损伤机制，还有助于寻找脑保护的新途径，为创新药物发现提供了新思路。 通过对大鼠脑缺血保护机制的研究，对相应的靶点建立药物筛选模型。结合本室的相关研究将入围药物应用于动物脑缺血模型，观察其对脑缺血的保护作用，并对其作用机制进行初步研究。 第一部分 脑缺血预适应的保护机制 1．缺血预适应对大鼠脑缺血的保护作用 在本研究中，我们采用接扎大鼠双侧颈总动脉方式观察缺血预适应对大鼠大脑中动脉梗塞的保护作用。与单纯MCAO组比较，预适应可以显着降低大鼠梗塞面积(P＜0.001)，提示预适应处理可以降低脑损伤程度；在倾斜板实验中，预适应梗塞组在倾斜板上停留时间明显短于单纯MCAO组(P＜0.001)。预适应后梗塞组的评分显着低于MCAO组的评分(P＜0.01)，表明预适应可以明显改善大脑中动脉梗塞所致的行为学异常。 预适应后梗塞组大鼠脑匀浆中ATP含量、GSH活性显着高于MCAO组(P＜0.05)；预适应后梗塞组大鼠脑匀浆中MDA、LA含量显着低于MCAO组(P＜0.05)。缺血区大脑对自由基的清除能力下降，缺血预适应可以纠正这种变化，同时使大鼠的行为学改善，平衡能力增强；改善能量供应，清除氧自由基。 2．缺血预适应对线粒体功能的保护 提取缺血大鼠皮层线粒体，观察缺血预适应对大鼠脑线粒体功能的影响。在线粒体复合酶系统活性测定实验中，单纯接扎大鼠双侧颈总动脉，可以导致线粒体复合酶Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ活性的增强；而在预适应处理6h后，这些酶的活性都恢复至正常水平。 预适应后梗塞组中线粒体膜肿胀低于MCAO组(P＜0.001)，线粒体膜流动性好于MCAO组(P＜0.01)。预适应后梗塞组线粒体膜电位仅下降12.39％，与假处
郭升[2]2017年在《ABT-702在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用》文中研究说明背景缺血性脑血管病的发病率近年来呈逐年递升的趋势,给人类身体健康和生存质量带来极大的危害,因而对该病不断深入和细致地研究,成为神经学科科学家研究的热门方向,不断寻求新的治疗靶点,尽早挽救缺血半暗带成为目前缺血性脑血管病研究的重点之一。研究发现腺苷对缺血性脑血管病具有保护作用,ABT-702作为新型的非核苷类腺苷激酶抑制剂(Adenosine Kinase Inhibitors AKI),能够提高体内腺苷(Adenosion Ado)水平,在既往的研究中,研究者们证实了ABT-702在许多人类疾病中具有治疗或保护作用,但是ABT-702在缺血性脑血管病中的作用却暂无文献报道。目的探讨在大鼠脑缺血性再灌注损伤模型中,腺苷激酶抑制剂ABT-702应用后,大鼠大脑脑组织中腺苷含量的变化,以及自噬蛋白Beclin1的表达情况,进一步验证ABT-702对大脑具有保护作用,为其在缺血性脑血管病中的研究及应用提供前沿基础。方法雄性SD大鼠84只,随机分为对照组、假手术组、模型组、ABT-702组四个组,每组21只,所有大鼠在再灌注后均进行大鼠神经功能缺失评分,每组选取6只进行TTC染色检测梗死面积,各组再随机选取9只分为3个亚组,在不同时间点通过高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography HPLC)检测脑组织腺苷含量,最后各组再随机选取6只通过RT-PCR法检测Beclin1的表达。结果1、ABT-702组神经缺失功能评分低于模型组。通过Zea Longa法进行评分后,对照组和假手术组评分均为0分,模型组与ABT-702组均有神经功能缺失症状,但ABT-702神经功能缺失评分低于模型组,差距具有统计学意义(P<0.05)。2、ABT-702组的梗死体积明显低于模型组。对照组及假手术组TTC染色后未见梗死区域,模型组及ABT-702组均可见大片梗死区域(TTC染色后为白色)。但ABT-702组梗死体积与模型组相比,梗死体积小于模型组,差距具有统计学意义(P<0.05)。3、HPLC法检测大鼠大脑腺苷含量变化。各组在再灌注后,分别通过HPLC法在不同时间点(2h、6h、12h)进行脑组织中腺苷含量检测。结果提示,各组在各时间点均可以检测处腺苷的存在。对照组与假手术组两组对比,在各时间点腺苷含量水平没有差距,模型组与ABT-702组在再灌注2h、6h时腺苷含量均高于对照组与假手术组组。ABT-702组与模型组对比,ABT-702组在再灌注各时间段腺苷含量水平均高于模型组。但是在再灌注12h后时ABT-702组的腺苷含量水平低于本组再灌注后2h及6h时的水平。4、脑组织中Beclin1 mRNA表达。各组在再灌注6h后,Beclin1 mRNA均有表达,但模型组Beclin1蛋白的表达量高于对照组与假手术组。而ABT-702组的Beclin1表达量明显高于其它叁组。结论1、ABT-702在大鼠缺血再灌注损伤中具有保护作用,减轻了大鼠神经功能的损伤,减小了大鼠脑组织的梗死体积;2、ABT-702应用后大鼠脑组织内腺苷含量明显增加,并且在再灌注6h时脑组织腺苷含量最高;3、ABT-702在大鼠缺血再灌注模型中,提高了自噬(Autophagy)相关蛋白Beclin1的表达水平,这可能是ABT-702在大鼠缺血再灌注损伤(Cerebral Ischemia Reperfusion Injury,CIRI)中起保护作用的机制之一。
参考文献：
[1]. 大鼠脑缺血性预适应保护机制及保护药物的筛选研究[D]. 张海霞. 中国协和医科大学. 2003
[2]. ABT-702在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用[D]. 郭升. 新乡医学院. 2017