[关键词]程序性死亡配体-1；乳腺癌；间质浸润淋巴细胞
Expression of PD-L1 in breast cancer tissues and Stromal tumor infiltrating lymphocyte and its correlation with clinicopathological features
[Abstract] Objective: To investigate the expression of programmed death ligand-1 in different immunohistochemical subtypes of breast cancer and Stromal tumor infiltrating lymphocyte, and to analyze its correlation with clinicopathological features and prognosis of breast cancer. Methods: 90 cases of non-specific invasive breast cancer were selected. The tissues were removed or punctured without radiochemotherapy. The expression of PD-L1 in different immunohistochemical subtypes of breast cancer cells and sTIL was detected by immunohistochemical EliVision two-step method after routine paraffin embedding. Relationship with clinicopathological features and prognosis. Results: The positive rate of PD-L1 in breast cancer cells was 35.56% (36/90), and that of PD-L1 in sTIL was 51.11% (46/90). The positive rates of PD-L1 in lumen type, HER-2 overexpression type and triple negative type breast cancer were significantly different (P < 0.05). The expression of PD-L1 in sTIL was significantly correlated with PFS (X2 = 14.364, P = 0.011), OS (X2 = 12.112, P = 0.006) and the expression of PD-L1 in breast cancer cells and sTIL. Conclusion: PD-L1 is expressed in breast cancer cells and sTIL, and the expression is most significant in triple-negative breast cancer. PD-L1 is closely related to histological stage and clinical stage, and the expression of PD-L1 in sTIL is correlated with PFS and OS of patients. The research can provide new ideas for clinical treatment of breast cancer.
[Keywords] programmed death ligand -1; breast cancer; Stromal tumor infiltrating lymphocyte
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，针对早期患者采用手术切除联合放化疗可以达到治愈的效果，但目前对于三阴型乳腺癌却尚无有效的治疗策略[1]。有研究发现，程序性死亡配体-1（Programmed death ligand-1，PD-L1）是共刺激分子B7 家族成员，在多种肿瘤中都处于高表达水平，通过阻断PD-L1的信号通路，能够有效达到治疗肿瘤的效果，目前在恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌等肿瘤方面都取得了良好的临床效果[2]。近年来，不断有学者开始研究探索PD-L1在治疗乳腺癌方面的作用，但是并没有对不同免疫组化亚型乳腺癌患者的PD-L1水平进行分析和研究，本研究通过比较PD-L1在不同免疫组化乳腺癌亚型肿瘤组织及间质浸润淋巴细胞（Stromal tumor infiltrating lymphocyte，sTIL）中的表达情况，分析其与临床病理特征及乳腺癌预后的相关性，现将结果报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料 本研究选择的样本来自于2010年1月-2019年6月在兴义市人民医院治疗的90例非特殊性浸润性乳腺癌患者，在未经放化疗治疗情况下取得患者手术切除或穿刺组织，经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋。所有组织切片均经两位高年资病理医生确诊并提取原有免疫组化结果进行重新评估。根据相关文献资料，免疫组化法将乳腺癌分为三种免疫组化亚型，分别为管腔型、HER-2过表达型以及三阴型，其中三阴型包括基底细胞样型和未分类型。所有入组患者临床资料完整，患者均为女性，年龄32-70岁，平均年龄（48.96±8.26）岁；肿瘤最大直径0.9-8.4cm，平均直径（4.16±2.16）cm；淋巴结转移52例，未转移38例；组织学分级：Ⅰ级7例，Ⅱ级48例，Ⅲ35例；临床分期：Ⅰ期24例，Ⅱ期38例，Ⅲ期18例，Ⅳ期10例；免疫组化亚型：管腔型42例，HER-2过表达型22例，三阴型26例。
1.2方法 免疫组化采用EliVision两步法，兔抗人PD-L1单克隆抗体（SPL42）及EliVision检测试剂盒均购自美国Abcam公司。实验过程中均严格按照试剂说明说进行，高压修复，DAB显色，苏木精衬染，PBS代替一抗作空白对照，以胎盘组织作阳性对照，乳腺癌旁组织作阴性对照。
1.3染色结果判读标准 PD-L1阳性的染色表现为细胞质及细胞膜呈棕褐色，染色结果根据每张切片阳性细胞所占百分比及着色的深浅计分，然后两项得分相乘即可作为判定阳性强度的最终结果。参照文献[3]，阳性细胞百分比评分，阳性细胞数<5%为0分，5%-25%为1分，26%-50%为2分，51%-75%为3分，>76%为4分。着色强度评分，无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两项结果相乘结果≤1分，为阴性（-）；结果>1分为阳性（+），结果越大阳性越强。sTIL免疫组化结果判读：sTIL的阳性判定标准参照国际乳腺癌TIL评估共识，以sTIL占肿瘤浸润边界以内兼职面积的百分比作为衡量标准，sTIL百分比≥1%表示sTIL阳性（+）；<1%为阴性（-）。
1.4统计学方法 采用SPSS21.0软件进行数据分析，PD-L1在不同免疫组化亚型乳腺癌组织及sTIL中的表达，以及与临床病理特征的相关性，乳腺癌组织与sTIL中的相关性采用X2检验及Fisher确切概率法分析；生存分析采用Kaplan-Meier 函数，Logrank检验，以P<0.05表示具有统计学意义。
2结果
2.1 PD-L1在不同免疫组化亚型乳腺癌肿瘤细胞及sTIL中的表达情况 PD-LI在乳腺癌肿瘤细胞中的阳性率为35.56%（36/90），在三阴型乳腺癌肿瘤细胞中的阳性率最高为61.54%，不同免疫组化亚型乳腺癌阳性率比较差异具有统计学意义（P<0.05）；PD-L1在sTIL中的阳性率为51.11%（46/90），在三阴型乳腺癌肿瘤细胞中的阳性率最高为80.77%，不同免疫组化亚型乳腺癌阳性率比较差异具有统计学意义（P<0.05）；如表1所示。
2.3PD-L1阳性表达与临床预后的相关性分析 所有患者治疗后随访12-60个月，中位随访时间36个月，在随访过程中约有4例患者出现复发或转移，5例患者死于乳腺癌。PD-L1在肿瘤细胞中的表达与患者的无进展生存时间（PFS）及总生存时间（OS）无明显相关性；但PD-L1在sTIL中的表达与患者的PFS（X2=14.364，P=0.011），OS（X2=12.112，P=0.006）呈明显相关性。
2.4PD-L1在乳腺癌肿瘤细胞及sTIL中的表达相关性分析 PD-L1在乳腺癌肿瘤细胞及sTIL中的表达呈明显正相关性（P<0.05），如表4。
3讨论
PD-L1是活化T细胞表面的程序性死亡蛋白1（PD1）的配体，相对质量为4.0X104的Ⅰ型跨膜蛋白，广泛表达与活化的淋巴细胞及抗原提呈细胞等。在正常情况下，PD-L1与PD-1相互结合后向T淋巴细胞传递抑制性信号，从而抑制自身的免疫应答起到预防免疫性基本的发展。但是当PD-L1的表达升高时，其与PD1结合后，诱导T淋巴细胞凋亡，从而导致机体免疫功能降低，伤害组织和器官功能；而且由于机体免疫能力减弱，还可导致肿瘤细胞免疫逃逸，导致疾病的发生发展[4]。国内外大量研究文献对PD-L1与肿瘤的相关性进行了研究发现，PD-L1在肺癌、膀胱癌、黑色素瘤等多种恶性肿瘤细胞中均呈现高表达水平，有研究指出PD-L1与乳腺癌的发生发展也有密切关系[5]。
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，采用免疫组化法进行亚型划分可以分为管腔型、HER-2过表达型及三阴型，其中管腔型、HER-2过表达型已有较为成熟的治疗方法，但是三阴型乳腺癌尚未有有效的临床治疗方案。本研究在对90例乳腺癌患者的肿瘤细胞及sTIL中PD-L1的表达发现，PD-LI在乳腺癌肿瘤细胞中的阳性率为35.56%（36/90），在三阴型乳腺癌肿瘤细胞中的阳性率最高为61.54%；PD-L1在sTIL中的阳性率为51.11%（46/90），在三阴型乳腺癌肿瘤细胞中的阳性率最高为80.77%。SUN 等[6]通过对218例乳腺癌患者检测PD-L1的阳性率发现，其在肿瘤细胞的PD-L1阳性率为11.0%，在sTIL中的阳性率为19.3%；与本文研究结果存在一定差异，其主要原因在于选择样本数量及类型的差异。耿卫朴[7]对40例乳腺癌患者的PD-L1阳性率进行了检测，结果为45%；黄述斌等[8]对68例乳腺癌患者进行了研究，其在肿瘤细胞的PD-L1阳性率为35.3%，在sTIL中的阳性率为51.5%，与本研究结果一致。同时，研究结果表明PD-L1在乳腺癌肿瘤细胞及sTIL中的阳性表达与患者的组织学分级、临床分期有关（P<0.05）；与患者的年龄、肿瘤直径、淋巴结转移无关（P>0.05）；这表明PD-L1参与了乳腺癌的发生、发展过程。在PD-L1与患者预后的相关性研究中发现，PD-L1在肿瘤细胞中的表达与患者的无进展生存时间（PFS）及总生存时间（OS）无明显相关性；但PD-L1在sTIL中的表达与患者的PFS、OS呈明显相关性，这一研究结果与潘贝晶等[9]研究结果一致，肯定了sTIL中PD-L1的表达水平时影响乳腺癌预后的重要因素，并进一步证实了肿瘤免疫疗法在治疗乳腺癌中的作用。有研究通过阻断PD1/PD-L1信号通路治疗肿瘤小鼠模型发现，可有效延长小鼠的生存期，这主要是通过阻断型抗PD-L1单抗阻断阻断PD1/PD-L1信号通路可上调机体IFN -γ、IL-2、IL-10 的分泌水平，逆转T 淋巴细胞的凋亡，提高机体的免疫功能，避免肿瘤逃避免疫治疗[10]。三阴型乳腺癌的治疗难度大，预后情况差，PD-L1的表达水平较高，通过单克隆抗体干预阻断PD1/PD-L1信号有望成为治疗三阴型乳腺癌的新策略。
综上所述，PD-L1在乳腺癌肿瘤细胞及sTIL中均有所表达，且在三阴性乳腺癌中的表达最为显著，PD-L1与组织学分期、临床分期关系密切，且PD-L1在sTIL中的表达与患者的PFS、OS具有相关性，因此通过对PD-L1的研究可为乳腺癌的临床治疗提供新的思路。
参考文献
[1]王立东，徐卫国，杨鑫，等.PD-L1在乳腺癌中的表达及其与细胞免疫的相关性分析[J].重庆医学，2018，47（9）：1207-1209.
[2]区燕华，林骏，罗深秋.程序性死亡因子配体１在乳腺癌中的表达及意义[J].广东医学，2015，36（10）：1515-1517.
[3] 吕淑贞，李艳萍，赵霞，等．乳腺癌组织PD1、PDL1 表达变化及其与患者临床病理参数和预后的关系[J]．山东医药，2018，58（28）：28-31．
[4] Bertucci F, Finetti P, Colpaert C, et al. PDL1 expression in Inflammatory breast cancer is frequent and predicts for the pathological Response to chemotherapy [J]. Oncotarget, 2015, 6 ( 15 ) :13 506-13519.
[5] 张伟，徐国祥，李佳嘉，等. PD-1/PD-L1在三阴性乳腺癌中的表达及其意义[J].中华病理学杂志，2017，46（1）：20-24.
[6] Sun WY, Lee YK, Koo JS. Expression of PD-L1 in triple-negative Breast cancer based on different immunohistochemical antibodies[J]. J Transl Med, 2016, 14(1): 173.
[7]耿卫朴.人乳腺癌中共刺激分子PD-L1、PD-L2的表达及其临床意义[J].临床与实验病理学杂志，2017，33（1）：59-62.
[8] 黄述斌，侯永微，李松梅，等．乳腺癌组织及间质浸润淋巴细胞中PD-L1的表达及其意义[J]．临床与实验病理学杂志，2017，33（1）：63-67．
[9] 潘贝晶，徐程，平国强，等.PD-L1在三阴性乳腺癌中的表达及其与预后的相关性[J].中华病理学杂志，2017，46（12）：822-826.
[10] 汪新茹，李朵璐，杨盟，等．不同人乳腺癌细胞系中程序性死亡-配体1 的表达[J]．郑州大学学报（医学版），2017，52（5）：602-605．
论文作者:黄德妤1 杨建国1贾茂1 谭清国1 黄代勇1 黄江1周姝雯2
论文发表刊物:《中国医学人文》2019年12期
论文发表时间:2020/1/2
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