邵阳市第一人民医院 湖南邵阳 422001
【摘 要】目的：探讨复方白花前胡对大鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2、Bax的影响。方法：将60只大鼠随机分为2组，复发白花前胡组和模型组，线栓法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型，复发白花前胡组给予复方白花前胡液灌服，每天2次，疗程为3天，模型组不予以使用。结果：复发白花前胡组和模型组术后3天Bcl-2、Bax水平结果比较有差异（P<0.05）；复发白花前胡组和模型组术后1天、2天、3天神经功能行为学评分结果比较有差异（P<0.05）。结论：复方白花前胡能够抑制脑缺血再灌注损伤大鼠细胞的凋亡，可能途径与调节Bcl-2、Bax水平有关。
【关键词】复方白花前胡；大鼠；脑缺血再灌注损伤；Bcl-2；Bax
ABSTRACT：OBJECTIVE To expolre the influence of Compound Peucedanum pracruptorum Dunn（CPd）on brain I/R injury in rat. Methods 60 rats were randomly divided into two groups，CPd group and model group，the middle cerebral artery ischeminc reperfusion mode was made by using the Longa`s method，CPd group to give Compound Peucedanum pracruptorum Dunn liquid，2 times a day，treatment for 3 days，the control group not taking. RESULT Bcl-2 and Bax levels in two group were differences obviously after 3 days（p<0.05）；nerve function behavior integral in two group were differences obviously after 1、2、3 days（p<0.05）. CONCLUSION CPd can reduded brain ischemia reperfusion injury in rats of cell apoptosis，possible ways related to regulating the Bcl - 2，Bax levels.
脑缺血再灌注损伤后由多种基因编码的产物参与细胞的凋亡与调控，其中以Bcl-2家族及Caspase家族成员为主。白花前胡是中药前胡的一种，具有补气活血、化痰通络等作用。主治外感风热、肺热痰郁、咳喘痰多、痰黄稠粘等症状。药理学研究显示白花前胡对于缩小脑梗死面积和改善脑缺血症状有较好的疗效。因此本次研究制作大鼠脑缺血模型，探讨复方白花前胡对大鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2、Bax的影响。
1 资料与方法
1.1 模型选择 清洁级大鼠100只，雌雄不限，体重250～300 g，购买于广西医科大学动物基础实验室。
1.2 药物来源 复方白花前胡由我院药剂科提供，白花前胡系全根干品，产地浙江；川芎产地都江堰；黄芪产地甘肃陇西。将生药500 g（白花前胡150 g，川芎150 g，黄芪200 g）煎煮、浓缩，加无水乙醇提取后浓缩成100%复方白花前胡（每毫升含生药1 g），pH4.9，置4 ℃保存。
1.3 试剂来源 Bcl-2免疫组化染色试剂盒购自美国 BPB公司。Bax免疫组化染色试剂盒购于天津艾康生物有限公司。
1.4 动物分组方法 随机将清洁级大鼠分为2组：复发白花前胡组和模型组，每组50只，复发白花前胡组平均体重（264.8±23.5）g，雌28只，雄22只。模型组平均体重（270.9±24.5）g，雌25只，雄25只。2组性别，体重无差异。
1.2 模型的建立 通过肠缺血-再灌注联合盲肠结扎穿孔法建立大鼠内毒素血症模型。具体步骤如下：对大鼠禁食24小时，水合氯醛（30 mg/100 g）麻醉，腹部脱毛，铺巾后切口腹部，夹闭肠系膜上动脉，找到盲肠与回结肠交界处，4号丝线结扎回盲动脉，向腹腔注射5 mg/kg 内毒素，建成内毒素血症模型。
1.3 模型制作方法 大鼠禁食12小时，麻醉后，颈正中切开，分离并结扎左侧颈外动脉近心端及左侧颈总动脉，将左侧颈总动脉切口0.2mm口子，向颈内动脉方向插入尼龙线（直径0.25，长度5cm），发现大鼠左眼虹膜颜色变浅时，作为缺血起始点。2小时候拔出尼龙线缝合皮肤。
1.4 治疗方法 术后复发白花前胡组给予复方白花前胡液灌服（剂量：10 ml/kg），每天2次，疗程为3天。模型组不给予服用。
1.5 评价标准 对比（1）复发白花前胡组和模型组术后3天Bcl-2、Bax水平。（2）复发白花前胡组和模型组术后1天、2天、3天神经功能行为学评分。
1.5.1 Bcl-2、Bax测定方法 在大鼠制作模型成功后3天，统一麻醉后断头取脑，将脑组织切成组织块石蜡包埋，3%过氧化氢灭活内源性酶，随后进行热修复抗原，恒温水浴10分钟后滴加抗原修复液，在光镜400倍视野下观察Bcl-2、Bax阳性率。
1.5.2 神经功能行为学评分 参考Bederson［1］的标准，分为0~4级，等级越高症状越严重。
1.6 统计学 研究数据录入 SPSS18.0分析系统，计量资料采用（x±s）表示，采用使用Student's t检验。当P<0.05，判断有统计学意义。
2 结 果
2.1 复发白花前胡组和模型组术后3天Bcl-2、Bax水平对比 复发白花前胡组和模型组术后3天Bcl-2、Bax水平结果比较有差异（P<0.05），见表1。
3 讨 论
脑是机体对缺氧最为敏感的器官，脑组织缺血将会导致局部脑组织及其功能的损害，短期不完全性缺血引起脑部可逆性损害，而长时间的完全缺血再灌注后会引起能量耗竭、Ca2+内流、炎症因子释放、细胞死亡等反应[1]。脑缺血再灌注损伤发生后，脑细胞逐步会产生自主性凋亡，这一过中有众多基因的参与。如P53、myc，ced-3，ced-4，Fas，ICE，Bax，Bcl-xs，Bcl-2，Bcl-xl等。有学者指出Bcl-2被Caspase-3特异性酶水解后，通过激活神经传导途径，诱导热休克蛋白调节脑细胞对缺血的耐受度，可抑制神经元的凋亡。而Bcl-2为诱导凋亡发生的诱导基因，可激活内皮细胞粘附分子，使大量炎性细胞粘附于血管内皮，并逐步向神经内移行，加快炎症的进程及血栓周围炎症程度，并促进血栓形成[2]。
复方白花前胡由白花前胡、川芎、黄芪三种药物组成。白花前胡苦，微寒，根有解热，镇咳，祛痰的作用，主治：风热咳嗽，涕唾稠粘，痰稠喘满及呕逆等症。清代汪昂在《本草备药》 称：“肝胆经风痰非前胡不能除。川芎辛温香燥，走而不守，既能行散，上行可达巅顶；又入血分，下行可达血海。具有活血祛瘀、行气开郁、祛风止痛的作用。黄芪性甘温，归肺经，有补气升阳、益卫固表之功能。具补气益卫、利水消肿之功效。可以看出三种药物配伍具有补气活血、化痰通络，使正气得培、痰瘀得化、心窍得开的作用。
同样现代药理学指出复方白花前胡具有以下疗效：（1）增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压。（2）减轻脑缺血后引发神经毒性，修复原发性损伤和再灌注期的继发性损伤。（3）过降低急性脑缺血再灌注损伤大鼠组织中Glu含量，减少NMDA-R 1的过度激活。（4）降低氨基酸及多种神经毒素引起神经细胞变性死亡[3]。
因此，本次研究认为复方白花前胡能够抑制脑缺血再灌注损伤大鼠细胞的凋亡，可能途径与调节Bcl-2、Bax水平有关。
参考文献：
[1]Bederson J B，Pitts L H，Tsuji M，etal. Ratmiddle cerebral artery occlu－sion：evaluation of the mode and de－velopment of a neurologic examination［J］.Stroke，1986（17）：472-477.
[2]车艳艳，向军，张春燕.中药抗脑缺血再灌注损伤的实验研究概况.中国康复，2007，22（6）：433- 434.
[3]凃欣，王晋明，周小莉，等.白花前胡提取物对大脑中动脉梗塞大鼠IL-6及IL-8的影响［J］.中国药师，2004，7（3）：163-165.
论文作者:陶丽红,阳巍
论文发表刊物:《中国蒙医药》2017年第5期
论文发表时间:2017/5/17
标签：白花论文; 模型论文; 大鼠论文; 复方论文; 损伤论文; 脑缺血论文; 术后论文; 《中国蒙医药》2017年第5期论文;