周婷婷[1]2007年在《氟对体外培养成骨细胞增殖和TM9SF1基因表达的影响》文中研究表明目的:在进行成骨细胞培养的基础上,探讨不同剂量氟对体外培养乳鼠成骨细胞增殖的影响;检测氟对成骨细胞TM9SF1mRNA基因表达及分布的影响;同时检测氟对人成骨细胞中TM9SF1mRNA表达量的影响。方法:进行成骨细胞的原代培养并通过碱性磷酸酶和钙结节染色方法进行细胞来源鉴定;染氟组按照剂量分为5组,即0.0mg/L(对照组),2.5、5.0、10.0、20.0mg/L组,在MTT法中增加了5组分别为40.0、60.0、80.0、100.0、120.0 mg/L组;采用MTT的方法检测染氟后成骨细胞的增殖情况;采用原位杂交、半定量RT-PCR的方法检测染氟后小鼠成骨细胞中TM9SF1mRNA表达量的变化;采用Real-time PCR的方法测定染氟后人成骨细胞中TM9SF1mRNA表达量的变化。结果:成骨细胞生长稳定、纯化效果好,完全适合建立氟中毒的体外模型;氟对成骨细胞的增殖的影响:低剂量的氟化钠能够促进成骨细胞的增殖,高剂量的氟化钠则抑制成骨细胞的增殖;小鼠成骨细胞染氟10天后各剂量组成骨细胞中TM9SF1基因均有阳性表达,染氟组表达明显高于对照组,表达范围也明显大于对照组;半定量RT-PCR法显示:TM9SF1mRNA基因表达量为2.5mg/L组大于对照组也大于其它剂量组;TM9SF1mRNA相对定量显示,人的各组成骨细胞中均有TM9SF1mRNA存在,但染氟后影响了各组细胞中TM9SF1mRNA的表达量,以2.5、5.0mg/L组最高,分别是对照组的1.04、1.03倍,随着剂量的增高,TM9SF1mRNA的表达量呈现下降趋势。结论:低剂量的氟可以促进小鼠成骨细胞的增殖,高剂量的氟则表现抑制作用。氟作用于成骨细胞后可以影响TM9SF1mRNA基因表达的分布和含量,说明染氟剂量不同对TM9SF1基因表达有影响,低剂量的氟能促进TM9SF1mRNA基因的表达,而高剂量的氟则使TM9SF1mRNA基因的表达减弱。TM9SF1基因表达强弱与成骨细胞的增殖高低有相同的趋势,提示低剂量的氟能够使成骨细胞增殖活跃,可能是由于氟的作用下致使TM9SF1的存在而造成的,在氟骨症患者中TM9SF1基因有可能促进成骨细胞的增殖,从而促使成骨细胞生长旺盛,功能增强,在体内表现为骨质增加等一系列骨病变,对此还应该做进一步研究。
刘凤[2]2004年在《氟化物对体外培养乳鼠成骨细胞的影响》文中进行了进一步梳理目的:探讨氟对成骨细胞的影响。方法:采用wister乳鼠颅盖骨成骨细胞原代培养的方法,观察不同剂量的氟化钠(NaF,10~(-7)mol/L～10~(-3)mol/L)对成骨细胞的细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、培养液中骨钙素(BGP)含量、细胞蛋白质含量、转化生长因子β_1基因(TGF-β_1mRNA)表达和Ⅰ型胶原基因(COL-1mRNA)表达的影响。结果:低剂量NaF(10-7mol/L～10~(-5)mol/L)可刺激细胞增殖,促进细胞ALP活性,增加细胞蛋白质合成(P<0.05);高剂量NaF(10~(-4)mol/L、10~(-3)mol/L)则抑制细胞增殖、降低细胞ALP活性,减少蛋白质合成(P<0.05)。各浓度NaF均促进细胞骨钙素分泌,与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。各浓度NaF对TGF-β_1mRNA的表达均无影响(P>0.05),但随浓度的改变TGF-β_1mRNA的表达仍有变化趋势,即低剂量提高TGF-β_1mRNA的表达,高剂量降低TGF-β_1mRNA的表达,但无统计学意义。10_(-7)mol/L、10~(-6)mol/LNaF对COL-1mRNA的表达无影响(P>0.05),但当NaF为10_(-5)mol/L时,COL-1mRNA的表达明显高于对照组(P<0.05);NaF为10~(-4)mol/L、10~(-3)mol/L时,COL-1mRNA的表达明显低于对照组(P<0.05),且有统计学意义。结论:NaF对成骨细胞增殖、早期分化及蛋白质合所抢医年斗大学医学币眨士掌位创势文成量呈双向调节,即小剂量呈现促进作用,大剂量为抑制作用。但对其晚期分化呈一致性,即促进作用。10一smol/L的NaF促进COL一lmRNA的表达,而过量氟则抑制COL一lmRNA的表达。关键词:氟化钠;成骨细胞;增殖;碱性磷酸酶;骨钙素;蛋白质合成;TGF一plmRNA;COL一lmRNAThe EffeCt of FIUoride on Osteoblasts ofNew Born RatS in ViroPostgraduate:Liu Feng SuPervisor:Liu kai一tai(DePartment of OeeuPational and Environmental Hygiene,sehool of Publie Health,Xinjiang Medieal University)AbstraCt objeetive:To study the effect of fluoride on osteoblasts.Methods:Osteoblasts were obtained from the ealvaria of 24一hnew born wister rat by using Primary eulture.The effeet ofNaF(一。一7mol/L一xo一3mol/L)on the eell proli化rati。n,the aetivityof alkaline PhosPhatase(ALP),Osteroealein,the eell Protein,theexPression level of TGF一p,mRNA and COL一1 mRNA ofosteoblasts were observed.Results:Low doses ofNaF(10一7mo一/L一10一smolzL)promoted prozireration,ALPaetivity and eontent of Protein of osteoblasts(P<0.05):whileh igh doses of NaF(一。一4mo一/L,10一3mol/L)deereased them(尸<
李丹, 李艳辉, 范哲, 李广生[3]2006年在《氟对大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原表达的影响》文中研究指明目的研究不同剂量的氟对体外培养大鼠乳鼠成骨细胞中Ⅰ型胶原表达的影响。方法体外培养Wistar大鼠乳鼠成骨细胞,给予不同剂量的氟,提取RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ⅰ型胶原mRNA:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测培养液上清中的Ⅰ型胶原蛋白质。结果与对照组相比,1、2及4 mg／L F-均能促进Ⅰ型胶原表达,但在蛋白质表达方面培养48 h后只有2、4 mg／L F-组与正常对照组差异有统计学意义(P<0．05),而在培养72 h后各加氟组与正常对照组相比差异均有统计学意义(P< 0．01);在mRNA表达方面培养48 h后只有2 mg／L F-组与正常对照组差异有统计学意义(P<0．01),而在培养 72 h后2 mg／L F-和4 mg／L F-组与正常对照组相比差异均有统计学意义(P<0．01)。结论氟可促进成骨细胞Ⅰ型胶原的表达,且与氟化物水平以及作用时间有关。
刘岳强, 刘开泰, 杨晓燕, 刘继文, 钟近洁[4]2008年在《氟对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响》文中研究表明目的:研究不同浓度的氟化物对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响。方法:采用酶消化法分离乳鼠成骨细胞,经剂量分别为0、2.5、5.0、10.0和20.0mg/L的氟化钠(NaF)作用后,采用免疫组织化学法和Western blot法检测染氟后小鼠成骨细胞中Ras蛋白表达水平。结果:免疫组织化学法结果显示0、2.5及5.0mg/L实验组成骨细胞中Ras均有较强阳性表达,其余实验组的为弱阳性表达;各染氟组阳性表达细胞数与0mg/L比较差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠细胞的Ras蛋白相对定量结果显示:2.5、5.0mg/L染氟组大于0mg/L,其它染氟组均小于0mg/L,染氟组的蛋白相对表达量有随着剂量增加而逐渐降低的趋势。结论:氟作用于成骨细胞后可以影响Ras蛋白的表达,表现为双向作用,即低剂量的氟促进Ras的蛋白表达,高剂量抑制Ras的蛋白表达。
许骏, 陈建伟, 蔡红梅, 曹玉广[5]2004年在《氟对鼠成骨细胞BMP表达的影响及锌的拮抗作用》文中进行了进一步梳理目的研究氟对大鼠成骨细胞中骨形态发生蛋白(BMP鄄2)表达的影响以及锌制剂能否拮抗氟化物的作用。方法体外培养SD乳鼠成骨细胞,给予不同剂量氟或/和锌制剂,测定细胞增殖及AKP活性,通过免疫组化方法对各组成骨细胞表达BMP鄄2进行定量分析。结果10鄄4mol/LZnSO4及10鄄5mol/LNaF能促进细胞增殖,增强AKP活性;10鄄3mol/LNaF则抑制细胞增殖及AKP活性;高氟(10鄄3mol/L)可促进BMP鄄2表达,但10鄄4mol/LZnSO4加入高氟组后未发现有抑制BMP鄄2表达的作用。结论高氟可促进成骨细胞BMP鄄2表达,锌制剂能拮抗高氟的毒性作用,但对BMP鄄2的表达无拮抗作用。
华坤, 计国义, 李广生[6]2003年在《氟化物对成骨细胞OPGL mRNA和M-CSF mRNA表达的影响》文中指出目的 探讨氟对成骨细胞的骨保护蛋白配体 (OPGL)mRNA和巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)mR NA表达的影响。方法 应用酶消化法分离小鼠乳鼠成骨细胞 ,取第 3代成骨细胞 ,加入不同浓度的氟 6h ,提取细胞总RNA ,通过逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,观察成骨细胞分泌的OPGL和M CSF表达的变化。结果 在氟的作用下 ,成骨细胞的OPGLmRNA和M CSFmRNA的表达呈上升趋势 ,但未达到统计学差异水平。结论 氟有可能通过上调OPGL和M CSF的表达 ,提高破骨细胞的骨吸收活性
李红[7]2006年在《骨髓间充质干细胞诱导分化模型的建立及其在环境化学物骨质损伤机制研究中的应用》文中进行了进一步梳理目的 1、建立和完善小鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)的体外培养体系，最大限度地获得BMSCs。2、建立BMSCs的体外诱导分化模型。3、探讨氟化钠和酒精对间充质干细胞的毒性作用的机制，从而为防治氟骨病和酒精引起的股骨头坏死、骨质疏松等损伤机制研究提供科学依据。 方法 1、无菌取C57／BL6小鼠骨髓，用全骨髓培养方法体外扩增BMSCs，免疫组织化学染色鉴定BMSCs的阳性表面标志物CD90和阴性表面标志物的CD34，绘制细胞的生长曲线。2、以含地塞米松、β-磷酸甘油钠和维生素C的a-MEM培养液诱导BMSCs向成骨细胞方向分化，分别于不同时间收获细胞进行成骨细胞的早、中、晚期指标鉴定。以含地塞米松和胰岛素的a-MEM培养液诱导BMSCs向脂肪细胞方向分化，油红O染色鉴定脂肪细胞。3、分别用含不同浓度的NaF、Et和Ach的基础培养液染毒细胞，3天后收获细胞行MTT试验、c-fos免疫组织化学染色检测毒物对细胞的毒性；分别用含NaF、Et或Ach的成骨诱导培养液染毒细胞，于3，8，15天后分别行ALP含量测定，VEGF、TAZ、OPG、Collagen type Ⅰ、PPAR γ
钟近洁[8]2006年在《氟对成骨细胞增殖及其MCM3基因表达的影响》文中研究指明目的：我国是一个地方性氟中毒病情严重的国家，病的类型多，分布广，病情重，受威胁人口多。随着相关研究工作的深入，如果能够从基础医学多学科的角度，利用新的先进技术手段，探索对地方性氟中毒(地氟病)发病机制的认识，尤其是从分子水平阐明氟中毒发生、发展的机制，将为地氟病的防治提供新的科学理论或思路。在前期课题的基础上，我们选择了氟骨症相关基因MCM3(minichromosome maintenance deficient 3(S．cerevisiae))进行分子机制的实验研究。MCM3是一种与细胞DNA复制密切相关的基因，其在细胞中含量的多少以及在细胞内分布位置的不同可以反映细胞的生长状态。本课题在验证及改良小鼠成骨细胞原代培养常用方法的基础上，测定了成骨细胞处于不同浓度氟环境、不同作用时间时氟离子在细胞内的分布情况和浓度变化趋势；观察不同剂量氟作用于体外培养小鼠成骨细胞后其增殖情况；检测氟对成骨细胞中MCM3蛋白表达水平的影响及mRNA分布情况；同时检测氟对成骨细胞中MCM3mRNA量的影响。 方法：(1)建立与改良小鼠成骨细胞的原代培养方法，并通过碱性磷酸酶和钙结节染色方法进行细胞来源鉴定。(2)建立核磁共振波谱法检测成骨细胞内氟离子的方法，观察染氟后成骨细胞中氟离子在细胞内的分布趋势。(3)染氟组按照剂量分为5组，即0、5、10、20、40mg／L组，采用电镜、绘制生长曲线、MTT法、流式细胞仪的方法观察成骨细胞的增殖情况。(4)免疫组化、原位杂交的方法检测染氟后成骨细胞中MCM3蛋白质表达和mRNA的分布。(5)采用Real Time RT-PCR的方法测定染氟后小鼠和人成骨细胞内MCM3mRNA量的变化。
参考文献：
[1]. 氟对体外培养成骨细胞增殖和TM9SF1基因表达的影响[D]. 周婷婷. 新疆医科大学. 2007
[2]. 氟化物对体外培养乳鼠成骨细胞的影响[D]. 刘凤. 新疆医科大学. 2004
[3]. 氟对大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原表达的影响[J]. 李丹, 李艳辉, 范哲, 李广生. 中国地方病学杂志. 2006
[4]. 氟对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响[J]. 刘岳强, 刘开泰, 杨晓燕, 刘继文, 钟近洁. 新疆医科大学学报. 2008
[5]. 氟对鼠成骨细胞BMP表达的影响及锌的拮抗作用[J]. 许骏, 陈建伟, 蔡红梅, 曹玉广. 中国地方病学杂志. 2004
[6]. 氟化物对成骨细胞OPGL mRNA和M-CSF mRNA表达的影响[J]. 华坤, 计国义, 李广生. 中国地方病学杂志. 2003
[7]. 骨髓间充质干细胞诱导分化模型的建立及其在环境化学物骨质损伤机制研究中的应用[D]. 李红. 四川大学. 2006
[8]. 氟对成骨细胞增殖及其MCM3基因表达的影响[D]. 钟近洁. 新疆医科大学. 2006
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