1．长沙市第四医院 长沙 410006；2.中南大学湘雅三医院 长沙 410013；3.湖南中医药大学第一附属医院 长沙 410007
【摘 要】目的 研究“杜仲木脂素胶囊” 对大鼠连续灌胃给药所产生的毒性反应，为拟定人用安全剂量提供实验数据和临床安全用药提供依据。方法 将正常SD大鼠随机分成空白对照组、“杜仲木脂素胶囊”低、中、高剂量组（低、中、高剂量组分别相当于成人剂量的10、40、120倍），空白对照组给予蒸馏水灌胃，各给药组给予相应浓度的杜仲木脂素胶囊内容物混悬液灌胃，分别于连续灌胃5周及停药恢复2周后检查各组大鼠血液学、血液生化、脏器系数、主要组织器官病理组织学指标。结果 给药期及恢复期，各组大鼠一般情况、饮食、活动、毛色光泽、二便正常。大鼠体重、血液学、血液生化、脏器系数及主要组织器官病理组织学观察与空白对照组比较无显著差异（P＞0.05）。结论 实验提示本药物口服无明显的毒性反应。
【关键词】杜仲；杜仲木脂素；胶囊；长期毒性试验
Abstract：Objective Research "Eucommia lignans Capsule" on toxicity in rats produced by continuous oral administration，to provide experimental data for the formulation and provide the basis for clinical drug safety with safe dose.Methods The SD rats were randomly divided into normal control group，" Eucommia lignans capsule " low，medium and high dose groups（Low，medium，high dose group were equivalent to adult doses of 10，40，120 times），The control group were given distilled water，Each treatment group to give the corresponding concentrations of Eucommia lignans suspension administered capsule contents，In continuous intragastric administration for 5 weeks and stop drug recovery check blood rats，blood biochemistry，organ coefficient，the main tissue and organ histopathological indexes in 2 weeks.Results The appetite，activity and excretion of rats were normal in the term of taking drugs and following observation for 2 weeks.Rat body weight，hematology，blood biochemistry，organ coefficient and major organs histological observation showed no significant difference between the control group（P＞0.05）Conclusion The experiment indicated that the Eucommia lignans capsule have No obvious toxic reaction of oral
Key words：Cortex Eucommiae；Eucommia lignans；Capsule，Long-term Toxicity test
“杜仲木脂素胶囊”以杜仲为原料提取制备而成，用于防治糖尿病并发症的药物。研究显示具有很好的抑制醛糖还原酶作用，可以较好防治糖尿病慢性并发症[1]。本研究以国家药品食品监督管理局颁布的《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》[2]为依据，观察“杜仲木脂素胶囊”对大鼠连续灌胃给药所产生的毒性反应、首先出现的症状和严重程度，靶器官的损伤及恢复和发展情况以及是否会有由于药物蓄积而对机体产生毒性反应，确定无毒性反应剂量，为拟定人用安全剂量提供实验数据和临床安全用药提供依据。现报道如下。
1 材料
1.1 实验动物 SPF级SD大鼠，体质量110~140g，雌雄各半，80只，购于湖南斯莱克景达实验动物生产有限公司（合格证号SCXK（湘）2009-0004）。饲养环境：SPF级屏障环境，雌雄分笼饲料，每笼5只；室温：（20-25）℃，相对湿度：（50-60）%，标准饲料全营养喂养，自由饮水，实验前动物在实验饲养房内观察6d。
1.2 药物和试剂 “杜仲木脂素胶囊”由湖南中医药大学第一附属医院制剂中心提供，批号20101201。胶囊内容物重0.4g，相当于生药杜仲4.8g。血液学指标和血液生化指标所用试剂盒均为美国雅培生产，由湖南中医药大学第一附属医院检验科代购并检测。
1.3 仪器 CELL-DYN1400型全自动血球计数仪，美国雅培；CL-7200型全自动生化分析仪，日本岛津；SHIMADZU-AY120电子天平，日本岛津；生物显微镜，江南光学仪器厂；普通切片机由湖南中医药大学病理教研室提供；
2 方法
2.1 分组及给药 动物先按性别分层，再按再Excel随机函数“RAND（）”随机[3]分成4组，即空白对照组、“杜仲木脂素胶囊”低剂量组、“杜仲木脂素胶囊”中剂量组、“杜仲木脂素胶囊”高剂量组，每组20只，雌雄各半。空白对照组：给予同体积蒸馏水；“杜仲木脂素胶囊”低、中、高剂量组浓度分别相当于60kg成人剂量（0.053g/kg）的10、40、120倍，即0.53g/kg、2.12/kg、6.36g/kg，给药体积20mL/kg，按上述剂量给药，每日1次，定时给药，连续给药5周。于末次给药后当晚禁食不禁水12h，次日称重，各组随机处死10只动物，雌雄各半，腹腔注射20%乌拉坦溶液0.5mL/100g麻醉，腹主动脉插管取血，检测血液学指标和血液生化指标。立即取脑、肝、肺、肾上腺、子宫、心、脾、肾、胸腺、卵巢、附睾、睾丸除去上述器官周围的脂肪和筋膜，用滤纸吸尽脏器表面的血液和水分后称重。左右肺、左右睾丸、左右肾上腺、左右附睾合并称重。称重后放入10%甲醛溶液，做HE染色，观察病理改变。余下动物停药饲养观察2周后，全部处死，检测指标同上。
2.2检测指标 每天记录动物外观体征、行为活动、饮食、粪便性状等；每周定期测定1次体质量和饮水摄食量；进行血液学及血液生化指标的测定[4-5]；测定脑、肝、肺、肾上腺、子宫、心、脾、肾、胸腺、卵巢、附睾、睾丸脏器系数后用10%甲醛固定，做病理组织学检查。
2.3 统计学处理 所有资料均经SPSS18.0统计软件进行统计分析，计量资料用均数±标准差（x±S）表示。符合正态分布和方差齐性者，组间比较采用单因素方差分析；两组比较采用t检验，多组比较采用LSD或者SNK检验，多组与同一组比较用Dunnett法检验。P＜0.05即认为所检验的差别有显著性统计学意义，P＜0.01即认为所检验的差别有非常显著性统计学意义。
3结果
3.1 一般情况 “杜仲木脂素胶囊”连续给药5周及停药观察2周，对给药各组与空白组动物比较观察：各组动物毛色均匀，活动灵活，饮食正常，大小便未见异常。
3.2 “杜仲木脂素胶囊”对大鼠摄食饮水的影响 各笼摄食量和饮水量随周龄逐渐增多，至第4周增长缓慢，第5周基本稳定，各笼雄性大鼠以及雌性大鼠无显著性差异（P＞0.05），结果分别见图1、图2
3.3 “杜仲木脂素胶囊”对体质量的影响 连续给药5周及停药观察2周后，各组动物随周龄的增长，体质量变化呈正相增长。雄性大鼠较比雌性大鼠体质量增长快，但各组雄性大鼠及雌性大鼠之间体质量变化无显著性差异（P＞0.05）即药物低、中、高剂量对大鼠的生长发育（体质量增长）无明显影响。结果见图3
3.4 “杜仲木脂素胶囊”对实验大鼠脏器系数的影响 “杜仲木脂素胶囊”连续给药5周后及停药观察2周后，各组雄性大鼠及雌性大鼠之间脏器系数无显著性差异（P＞0.05），结果见表1、表2。
3.5 “杜仲木脂素胶囊”对实验大鼠主要血液学指标的影响 “杜仲木脂素胶囊”连续给药5周后及停药观察2周，各组大鼠红细胞总数（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）、红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白（MCH）、平均血红蛋白浓度（MCHC）、网织红细胞总数（Ret）、血小板总数（PLT）、凝血酶原时间（PT）、白细胞总数（WBC）无显著性差异（P＞0.05），结果见表3、表4。
3.6 “杜仲木脂素胶囊”对大鼠主要血液生化指标的影响 “杜仲木脂素胶囊”连续给药5周后及停药观察2周后，各组大鼠血液生化指标谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、总胆红素（TBIL）、总胆固醇（TCHO）、甘油三酯（TG）、肌酸激酶（CK）、无显著性差异（P＞0.05），结果见表5、表6。
3.7 大体解剖及病理组织学观察
3.7.1 大体解剖观察结果 各组动物大体解剖观察未见明显异常改变。
3.7.2 病理形态学观察：给药5周后及停药2周后各组动物脏器标本用10%甲醛固定，石蜡包埋，间断连续切片，HE染色，光镜下观察，各组动物各组织和脏器未见病理异常改变。
4 讨论
根据国家药品食品监督管理局颁布的《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》，对“杜仲木脂素胶囊”进行连续给药5周及停药2周的大鼠长期毒性试验，试验结果表明，给药组动物生长状况良好，动物体质量、血液学指标、生化指标均无异常改变，动物大体解剖观察未见明显异常改变，病理组织学检查未见异常改变。提示本药物口服无明显的毒性反应，提示临床用药安全。
参考文献：
[1]欧阳冬生.杜仲木脂素及其提取物在防治糖尿病并发症上的应用[P].中国：CN101138578A.2008.03.12
[2]国家药品食品监督管理局《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》2005
[3]李志春，桂立辉.利用Excel实现对实验对象随机分组的应用[J].毒理学杂志，2005，19（3）：235-236.
[4]陈奇，中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，2006.112
[5]袁佰俊，王治乔.新药临床前安全性评价与实践[M].北京：军事医学科学出版社，1997.155
作者简介：
刘金玲，女，本科，副主任药师，主要从事医院临床药学研究。
基金项目：长沙市科技计划项目；湖南省科技厅项目（NO.2012SK3011）
论文作者:刘金玲, 彭向东, 肖瑞飞
论文发表刊物:《航空军医》2015年16期
论文发表时间:2016/3/10
标签：杜仲论文; 胶囊论文; 大鼠论文; 给药论文; 剂量论文; 毒性论文; 血液学论文; 《航空军医》2015年16期论文;