（1.温州医科大学附属二院 肾内科 浙江 温州 325027；2.温州医科大学基础医学院病生教研室 浙江 温州 325027）
（3.温州医科大学附属第二医院消化内科 浙江 温州 325027）
【摘 要】目的：研究分析在细胞凋亡中肾缺血再灌注损伤对其的影响作用。方法：选取90只健康雄性Wistar大鼠，并将其随机分为假手术组、α-硫辛酸组、肾缺血再灌注损伤组（I-R组），每组30只，对其进行检测。结果：I-R组3、6、24小时的BUN、Scr、MDA水平明显高于另外两组，而GSH明显低于另外两组，差异显著（P<0.05)，具有统计学意义。结论：由于肾缺血再灌注损伤时，其大鼠体内的氧自由基会逐渐增加，以及肿瘤坏死因子相关受体6也会增加，从而就会导致其细胞的凋亡。
【关键词】肾缺血；再灌注损伤；细胞凋亡；影响
【中图分类号】R692 【文献标识码】A 【文章编号】1004-6194（2015）02-0025-02
【Abstract】Objective: To study the effect of renal ischemia reperfusion injury in apoptosis of cells.. ) (6 rats each group I-R methods: 90 healthy male Wistar rats were selected and randomly divided into sham operation group, alpha - alpha acid group, renal ischemia reperfusion injury group (I-R group), 30 rats in each group.Results: the levels of MDA, Scr, BUN in group 3, 6 and 24 hours of I-R were significantly higher than those in the other two groups, while GSH was significantly lower than the other two groups, and the difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion: due to renal ischemia reperfusion injury, oxygen free radical in vivo in rats will gradually increase, and tumor necrosis factor receptor associated 6 will also increase, which will lead to the apoptosis of the cells.
【Keywords】renal ischemia reperfusion injury apoptosis effect
通常在肾移植手术以及严重创伤之后，会出现肾缺血再灌注损伤现象，其中主要是由于多种因素以及机制参与共同作用下导致肾缺血再灌注损伤现象的发生，炎性因子、活性氧以及细胞凋亡等因素均参与其中，并且细胞凋亡是关键环节[1-2]。本研究通过对90只健康雄性Wistar大鼠进行研究分析，现报告如下。
1 资料与方法
1.1一般资料
本研究主要选取的是90只健康雄性Wistar大鼠，体重为200-225g，这些大鼠主要购自动物实验中心。
1.2方法
1.2.1动物模型的建立与分组
将90只健康雄性Wistar大鼠喂养1星期之后，随机分为假手术组、α-硫辛酸组、肾缺血再灌注损伤组（I-R组），每组30只。所有大鼠称质量之后进行麻醉处理，以300mg/kg水合氯醛腹腔注射，并将其固定在手术台上，沿着腹中线暴露腹腔。α-硫辛酸组与肾缺血再灌注损伤组在I-R前20分钟腹腔注射100mg/kgα-硫辛酸方法，两侧肾动静脉使用玻璃分针进行细致的分离处理，并且使用无创动脉夹对其进行关闭处理，其颜色由暗紫转变为红色后进行再灌注。成功后使用生理盐水（37℃）在腹腔进行灌洗，并且依次关闭腹腔[3-4]。
1.2.2检验标本的收集与检测指标
（1）检验标本的收集
处死大鼠后，取心脏血约2ml，低温离心十分钟，血清放在冰箱中保存，温度为-20℃，检测BUN、Scr水平。取血成功之后摘取左侧肾脏，确保速度就要快，生理盐水(4℃预冷）冲洗，肾组织分成两半，在—80℃冻存一半肾组织，40g/l多聚甲醛固定液固定另一半。行脱水、浸蜡、包埋等处理。
（2）肾功能检测
检测各时间段BUN、Scr水平，检测仪器为全自动生化分析仪。
（3）GSH、MDA水平检测
肾组织的质量准确称取后，GSH、MDA水平检测需要根据试剂盒说明书要求执行。
（4）Caspasre-3抗体、TRAF 6抗体检测
Caspasre-3抗体、TRAF 6抗体主要采用SP法检测，随机选取5个高倍视野对其蛋白表达进行IHS评分，记录各个阶段的Caspasre-3、TRAF 6表达。
1.3统计学分析
采用SPSS19.0数据统计软件包对本研究中的所有数据进行统计学处理，计量资料记作，经t检验，计数资料记作百分数形式，经X2检验，用P<0.05表示有统计学意义[5]。
2 结果
2.1各组血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）水平分析，见表1所示。
注：*表示与α-硫辛酸组、假手术组比较，P<0.05；#表示与假手术比较，P<0.05。
3 讨论
肾I-R损伤具有十分复杂的发生机制，笔者以大鼠为研究对象进行建模，且获得成功，表现为大鼠的肾功能降低，血Scr及BUN升高显著，明显出现病理损害。
分析实验研究得知，机体在I-R过程中会出现许多活性氧，在参与进组织损伤的同时，还会让活性氧以第二信使身份参与到肾凋亡的转导通路过程中。此外，许多肾小管的上皮细胞会在肾I-R过程中出现凋亡，因而在肾I-R损伤中，细胞的凋亡具有重大作用。
TRAF6同时参与到了TNF1L-1R/TLR等超家族的信号转导中。有研究表明，在因活性氧引发的细胞凋亡中，TRAF6的表达减少时，便会有效减少细胞凋亡的出现，说明TRAF6与活性氧联系紧密。此外，在早期肾I-R损伤阶段，当RNA164a的含量出现微小的降低时，IRAK1及TRAF6的表达就会增多，导致肝细胞凋亡现象的发生。而作为因线粒及死亡受体而介导的细胞发生凋亡的必然过程，Caspasre-3的表达升高时，即表示机体细胞不可逆凋亡的即将发生。调查研究已证实，Caspasre-3抑制剂实现肾脏I-R损伤减轻的原因便是对黏附因子及细胞凋亡的指数进行减少。有关学者经研究发现，在脑I-R不同损伤的时间点中，Caspasre-3与TRAF6会发生一致性的变化，其表达随着再灌注时间的逐步延长而出现减少的情况，再一次证明了细胞凋亡过程中，TRAF6作用巨大，且极有可能在应氧化应激而导致的细胞凋亡过程中，扮演着桥梁的角色。此外，还显示α-硫辛酸对体内的活性氧可产生降低作用，大大降低了细胞的凋亡，因而其对肾I-R损伤可起着一定的保护功效。在本研究中，肾I-R组与其他两组相比，其3、6、24小时的Caspasre-3、TRAF6以及MAD含量升高明显，而GSH的含量则出现显著下降。
综上所述，TRAF6为肾I-R损伤过程中的，细胞凋亡与氧化应激之间的桥梁，其表达随着氧自由基的增多而增多，进而引发细胞的凋亡。这一研究结果为降低肾I-R损伤发生率提供了可靠的分子基础及依据。
参考文献：
[1]刘燕，夏晓红，苗智慧，等.硫辛酸对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响[J].中国病理生理杂志，2013，25（12）：185-186.
[2]王占坤，孙立江，李旭东.Caspasre-3抑制剂对肾缺血再灌注损伤的保护作用[J].青岛大学医学院学报，2014，17（06）：247-248.
[3]王艳，姬怀雪，郑骏年，等.亚硒酸钠对肾缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡的影响[J].中国新药与临床杂志，2012，28（08）：586-587.
[4]孙立江，李玉军，石景森.川芎嗪对缺血再灌注损伤肾脏细胞凋亡的影响[J].第四军医大学学报，2012，36（21）：259-261.
论文作者:陈辉乐1,王方岩2,徐昌隆3（通讯作者）
论文发表刊物:《中国慢性病预防与控制》2015年8月第2期供稿
论文发表时间:2016/3/17
标签：损伤论文; 凋亡论文; 细胞论文; 活性氧论文; 大鼠论文; 温州论文; 腹腔论文; 《中国慢性病预防与控制》2015年8月第2期供稿论文;