长沙市第四医院病理科 湖南长沙 410006
【摘 要】目的：探讨生长抑制因子（ING2）和突变型P53蛋白与胃癌病理特征的关系和临床意义。方法：选取我院和省肿瘤医院2013年1月-2018年5月收治的98例胃癌患者，回顾性分析临床治疗资料和病理检查资料，观察ING2和突变型P53蛋白在胃癌组织中的表达状况。结果：在98例胃癌组织中，ING2阳性表达率为67.35%，TNM分期、浸润深度和淋巴结转移状况是ING2阳性表达的影响因素，差异对比有统计学意义（P＜0.05）；突变型P53蛋白阳性表达率为71.43%，淋巴结转移状况和分化程度是突变型P53蛋白阳性表达的影响因素，差异对比有统计学意义（P＜0.05）；多因素分析显示，TNM分期、肿瘤转移情况、ING2与突变型P53蛋白表达均为影响胃癌患者死亡的独立危险因素。结论：通过检测ING2和突变型P53蛋白在癌变组织中的表达水平，可对胃癌的诊断、严重程度、治疗及预后提供较为准确评估参考。
【关键词】生长抑制因子ING2；突变型P53蛋白；胃癌；病理特征
Relationship between growth inhibitory factor and mutant P53 protein and pathological features of gastric cancer and its clinical significance
【Abstract】Objective：To investigate the relationship between the growth inhibitory factor（ING2）and mutant P53 protein and the pathological features of gastric cancer. Methods：98 patients with gastric cancer admitted to our hospital and the Provincial Cancer Hospital from January to May 2018 were retrospectively analyzed. Clinical data and pathological data were analyzed to observe the expression of ING2 and mutant P53 protein in gastric cancer. Results：In 98 cases of gastric cancer，the positive expression rate of ING2 was 67.35%. The TNM stage，depth of invasion and lymph node metastasis were the influencing factors of ING2 positive expression. The difference was statistically significant（P<0.05）. Mutant P53 protein The positive expression rate was 71.43%. The lymph node metastasis status and differentiation degree were the influencing factors of the positive expression of mutant P53 protein. The difference was statistically significant（P<0.05）. Multivariate analysis showed that TNM stage，tumor metastasis，ING2 and Mutant P53 protein expression is an independent risk factor for the death of gastric cancer patients. Conclusion：By detecting the expression level of ING2 and mutant P53 protein in cancerous tissues，it can provide a more accurate evaluation reference for the diagnosis，severity，treatment and prognosis of gastric cancer.
Key words：Growth inhibitory factor ING2；Mutant P53 protein；Gastric cancer；Pathological characteristics；
胃癌是起源于胃粘膜上皮的恶性肿瘤，是我国发病率最高的恶性肿瘤，近年来，随着社会的不断发展，人们的生活方式和饮食结构等都发生了很大的变化，我国胃癌患者呈年轻化的趋势。胃癌大部分属于腺癌，可发生于胃的各个部位，如胃前后壁、大小弯以及胃窦部等。早期胃癌无明显症状，偶尔出现上腹隐痛、胀满、食欲下降等，与胃溃疡、胃炎等具有相似的症状，因此易被忽略。研究显示，若早期胃癌患者得到及时有效的手术治疗，5年后的生存率可超过95%[1]。越来越多的专家和医疗工作者发现，生长抑制因子ING2和P53蛋白对癌细胞的繁殖有较好的抑制作用，减缓或阻止癌细胞的生长和扩散，同时发现，P53蛋白发生突变时会转换为癌基因[2]。本文主要研究ING2和突变型P53蛋白与胃癌病理特征的关系，报道如下。
1资料和方法
1.1一般资料
选取我院和省肿瘤医院2013年1月-2018年5月收治的98例胃癌患者作为研究对象，年龄31-68岁，平均年龄（52.7±5.1）岁，男63例，女35例，生存时间3~72个月，平均12.6±2.8个月，其中2年生存28例（28.6%），3年生存9例（9.2%），5年生存5例（5.1%），按照AJCC标准（2016第八版）对胃癌TNM分期，Ⅰ-Ⅱ期46例，Ⅲ-Ⅳ期52例；浸润未至浆膜层37例，透过浆膜层61例；淋巴结转移55例，未转移43例；分化程度高41例，分化程度低57例；远处转移39例，未转移59例。
1.2试剂和方法
①试剂和设备，兔抗人ING4多克隆抗体（Sigma?Aldrich公司），鼠抗人P53单克隆抗体（上海酶联生物研究所生产），免疫组化试剂盒选择通用型二步法（PV9000），显色试剂为二氨基联苯（DAB），试剂盒和显色剂均为北京中杉金桥生物有限公司生产。其它相关仪器设备：石蜡切片机（德国SLEE）、显微镜（德国Leica）等。按照说明书进行相应的检验操作，所有标记均设阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。
②方法，将98例患者胃癌手术切除的病变组织制成标本，再将标本制作成蜡块用于病理学检查。将蜡块连续切片，厚度4μm，然后进行脱蜡和水化，用PBS冲洗3次，3min/次，采用高压热法抗原修复；加入3%过氧化氢溶液，在室温下静置至少10min，以封闭内源性过氧化物酶；再次用PBS冲洗3次，3min/次，加入一抗，室温下静置至少1h；用PBS冲洗5次，3min/次，加入聚合物增强剂，室温静置至少20min；用PBS冲洗3次，3min/次；加入酶标抗鼠聚合物，静置30min；用PBS冲洗3次，3min/次；加入DAB显色剂，置于光学显微镜下观察，以棕黄色为阳性判定标准；清水冲洗后，加入苏木素试剂复染，用0.1%的盐酸分化，水冲洗后用PBS返蓝；用连续梯度乙醇使组织脱水，用中性树脂封片，用显微镜观察ING2和突变P53在胃癌组织中的表达状况。
1.3判断标准
对每例胃癌组织用盲法随机选取2个高倍视野，每个视野计数100个细胞。采用半定量计分法划分阳性表达等级，以细胞染色强度为A，分为4个强度等级，无色计0分；浅黄色计1分；棕黄色计2分；棕褐色计3分。以染色细胞占同类细胞百分比为B，弱阳性细胞＜5%或阴性细胞计0分；阳性细胞5-25%计1分；阳性细胞25-50%计2分；阳性细胞51-75%计3分；阳性细胞＞75%计4分，按A×B所得分数判定阳性等级，0分表示阴性（-）；1-4分表示弱阳性（+）；5-8分表示中度阳性（++）；9-12分表示强阳性（+++）。
1.4观察指标
生长抑制因子ING2和突变型P53蛋白在不同病理特征因素下的表达状况，本研究所选胃癌病理特征主要为肿瘤大小、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移状况、分化程度以及远处转移状况。
1.4统计学分析
本研究所有数据均采用SPSS13.0统计软件进行数据统计，对于单因素分析有意义的变量进行Cox多因素回归分析，得出胃癌预后独立危险因素。计量资料用（`x±s）表示，采用t进行检验，计数资料用%表示，采用x2检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。
2结果
2.1 ING2阳性表达与胃癌病理特征关系
98例胃癌中，有66例ING2呈阳性表达，其阳性率为67.35%。将98例患者胃癌病理检查数据进行统计对比，结果显示，ING2与TNM分期、浸润深度和淋巴结转移状况存在密切的关系，在TNM分期Ⅰ-Ⅱ、浸润未至浆膜层、淋巴结未转移中ING2阳性表达率分别为80.43%、81.08%和81.40%，在TNM分期Ⅲ-Ⅳ、浸润透过浆膜层、淋巴结移动中ING2阳性表达率分别为50.77%、59.02%和56.36%，上述各项差异对比均有统计学意义（P＜0.05）。其它因素差异对比无统计学意义（P＞0.05）。见表1。
2.3胃癌组织中ING2与突变型P53蛋白表达关系
在98例胃癌组织中，ING2与突变型P53蛋白表达有相关性，等级相关系数rk=0.267，P＜0.01。见表3
3讨论
ING2是2001年发现的一种生长因子，是脂酰肌醇-5-磷酸盐核受体，当受到超氧化物刺激和紫外线照射时，其含量增加，位于核内的ING2可感应到这种变化，增强核定位，减弱胞质定位，有研究认为，ING2可作为抗癌药物靶点[3-4]。ING2可与去乙酰化酶和组蛋白乙酰转移酶等结合成复合体，ING2与前者结合后，在其他辅助因子的协同作用下可造成转录沉默以及组蛋白发生去乙酰化反应，ING2与后者结合可促使组蛋白赖氨酸发生乙酯化反应从而激活转录[5]。
在健康细胞中，有一种视黄醇结合蛋白能通过抑癌基因Rb家族槽蛋白募集mSin3A-HDAC复合物，诱导细胞周期停滞，在癌变细胞中，ING2蛋白可抑制视黄醇结合蛋白相关的mSin3A-HDAC的活性，促进细胞繁殖，且ING2上调会抑制p53的功能，从而促进癌症的恶化。目前，大量临床实践发现，在人体发生的各类肿瘤如结直肠癌、基底细胞癌以及肝细胞癌中均存在表达异常的ING2，提示ING2可能在多种癌变中发挥作用[6]。ING2在癌变细胞组织中的表达与TNM分期、浸润深度和淋巴结转移状况有关，在Ⅰ-Ⅱ期、浸润未至浆膜层和淋巴结未转移胃癌中表达率明显更高，而在Ⅲ-Ⅳ期、浸润程度较深以及淋巴结转移的癌变恶化严重的胃癌患者中表达较低，说明ING2对癌细胞的生长有抑制作用。且本组研究中，多因素分析显示，TNM分期、肿瘤转移情况、ING2与突变型P53蛋白表达均为影响胃癌患者死亡的独立危险因素，由于ING2启动子含有两个P53结合序列，P53能直接与ING2结合调控其转录，本研究显示，ING2与突变型P53蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关，其原因可能ING2上调使突变型P53蛋白增多，从而促进癌症的恶化[7]。
P53基因是一种人体抑癌基因，其编码蛋白质是一种转录因子，对细胞周期的启动有控制作用。许多有关细胞健康的信号都会发送至P53蛋白，决定是否开启细胞分裂。当此细胞受损，不能得到正常的修复，P53蛋白将介入启动过程，使这个细胞在细胞在衰弱中死去[8]。而突变P53蛋白则失去对细胞的启动控制，甚至在不利条件下可能继续分裂[9]。有研究显示，在超过50%的癌变组织中可发现突变的P53蛋白，由于其空间构象发生改变，失去了对细胞生长、凋亡和DNA修复的调控作用，P53基因由抑癌基因转变为癌基因[10]。在本次研究中，突变P53蛋白在癌变细胞组织中的表达与淋巴结是否转移和分化程度有关，在发生淋巴结转移和分化程度低的胃癌患者中其阳性表达率明显更高，说明其表达率越高，胃癌严重程度越高[11-12]。
综上所述，生长抑制因子ING2和突变型P53蛋白与胃癌病理特征存在密切的联系，在胃癌的临床检查和治疗上，通过检测ING2和突变型P53蛋白在癌变组织中的表达水平，可对胃癌的诊断、严重程度、治疗及预后提供较为准确的评估参考，值得临床推广应用。
参考文献：
[1]程海燕. 生长抑制因子4在人胃癌中的表达及其意义[J]. 温州医科大学学报，2016，46（4）：284-286.
[2]陈飞，李俊. 胃癌患者幽门螺杆菌感染与蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子表达增强的相关性[J]. 中华实验和临床感染病杂志（电子版），2017，11（2）：185-189.
[3]吴小微. 血管内皮生长因子、低氧诱导因子1α和生长抑制因子4在胃癌组织中的表达[J]. 新乡医学院学报，2015，32（10）：934-936.
[4]赖军，罗林. MGMT和Ki67及P53蛋白在脑胶质瘤中表达及意义[J]. 国际肿瘤学杂志，2015，42（3）：169-171
[5]赵大航. 生长抑制因子-4抗肿瘤作用[J]. 国际肿瘤学杂志，2012，39（6）：422-424
[6] 何国林，冯向先. 存活蛋白突变型p53和细胞周期蛋白D1在胃癌中的表达及临床意义[J]. 中国药物与临床，2016，16（3）：339-341.
[7] 程海燕，沈哲. Ad-ING4对人胃癌AGS细胞凋亡及其p53基因表达的影响[J]. 浙江医学，2016，38（18）：1501-1503.
[8]宋魏，张建波，马杰，等. microRNA-92a的表达及其与胃癌病理特征的关联[J]. 癌症进展，2017，15（5）：565-568.
[9]Zhen-Hua Liu，Gui-Feng Zhang，Zheng Chen et al.Prussian blue-doped nanogold microspheres for enzyme-free electrocatalytic immunoassay of p53 protein[J].Mikrochimica Acta：An International Journal for Physical and Chemical Methods of Analysis，2014，181（5/6）：581-588.
[10]徐燕，蔡媛，荆娟，等. 胃癌组织中HER2基因及p53蛋白表达及其临床意义[J]. 现代生物医学进展，2016，16（24）：4750-4752.
[11]赖妙玲，郝卓芳，黄世章，等. 胶质瘤LDHA和突变型p53蛋白联合表达的临床病理学意义[J]. 实用医学杂志，2017，33（14）：2275-2280.
[12]李翔，田国庆，袁会军，等. 胃癌的病理特征分析[J]. 临床医药文献电子杂志，2016，3（14）：2717-2717.
论文作者:陈国群,周亚东*
论文发表刊物:《中国结合医学杂志》2019年7期
论文发表时间:2019/9/4
标签：胃癌论文; 蛋白论文; 突变论文; 阳性论文; 细胞论文; 淋巴结论文; 因子论文; 《中国结合医学杂志》2019年7期论文;