长兴县妇幼保健院 313100
摘要：随着社会经济的不断发展与进步，科学技术的不断改革与创新，医学行业发展得到了质的飞跃。血红蛋白检测作为医学发展过程的重中之重，是一个必不可缺的关键部分。血红蛋白作为生物体内红细胞中的一种机能蛋白，生物体的各种生命活动都离不开血红蛋白发挥出的作用，它有效起到了传输氧气、传递电子以及分解二氧化氢的作用。血红蛋白的检测是临床检测的一项重要内容，要运用合理的检测方法，高效分析出血红蛋白的实际情况，从而满足血液的需求。本文将进一步对血红蛋白检测方法展开分析与探讨。
关键词：血红蛋白；检测方法；含量测定
0.引言
当前是一个经济全球化的时代，医学行业发展要与时俱进，跟上时代前进的脚步。血红蛋白检测作为医学界的热点研究内容，受到了越来越多研究人员的重视和关注。血红蛋白本身是一种重要的生物大分子，高等生物体的生命活动过程离不开血红蛋白的作用。为了最大化满足血液的需求，就必须积极开展对血红蛋白类“人工血液”的研究分析，运用先进的检测方法，例如被广泛应用的荧光法、电化学法以及光度法，通过结合血红蛋白的实际特点，有针对性的展开检测方法实践应用探讨。
1.电化学法在血红蛋白检测中的应用
电化学法最显著的特征就是其高效率、实时以及适宜微量化等。这些特点都有利于展开对血红蛋白的检测分析。然而，在早期发展过程中，由于血红蛋白自身的体积结构较大，容易造成钝化电极现象，从而影响到血红蛋白对电化学信息号的接收，裸电极无法发挥出其实际检测作用。随着时间的推移，研究人员对电极进行了一系列的改进工作，极大提高了血红蛋白的电极反应[1]。
1.1运用Hb的类酶作用的电化学检测
因为Hb的内部结构与HRP存在着类似的活性基团，从而证明了Hb也具备了酶催化活性和过氧化物酶特征。因此，血红蛋白检测人员可以通过运用Hb催化反应作用对其进行测定实验。例如，孙伟在Hb的催化活性作用下，有效创新设计出了电化学分析测定Hb的方法，通过利用Hb催化二氧化氢同时氧化邻联茴香胺的氧化反应，利用线性扫描二阶导数极谱法测定催化反应的产物，在测定过程中可以清晰发现反应产物会在-0.56V处形成一个峰形良好的极谱还原峰，工作人员可以有效根据峰电流的实际大小测定出Hb的含量。
1.2电合成检测方法
检测人员通过运用电合成方法于玻碳电极便面制备出聚硫堇薄膜，同时采用石英子微天平和电化学方法分析其对血红蛋白的吸附作用。在吸附作用下血红蛋白能够有效发生电化学反应，血红蛋白的含量会与氧化还原电流呈现出正比例关系，从而证明出其可以用在血液中血红蛋白的含量测定试验。
2.光度法在血红蛋白检测中的应用
光度法的应用原理是通过在血红蛋白和某些试剂相互反应而产生可以稳定存在的显色物质，研究人员对显色物质在某一特定波长下对光的特征吸收进行分析，能够科学准确计算出血红蛋白的实际含量。
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2.1氧合血红蛋白法
检测人员通过利用氧合血红蛋白法，有效把血红蛋白转化为氧合血红蛋白，接着合理使用血细胞的计数设备获得血红蛋白的浓度。氧合血红蛋白检测方法的优点在于其安全稳定性，然而在实际操作过程中，该方法容易受到外界因素的影响，无法将高铁血红蛋白有效转化为氧合血红蛋白，从而一定程度上限制了其发展。
2.2氰化高铁法
在氰化高铁法的作用下，血红蛋白会与铁氰化钾反应生成高铁血红蛋白，然后与氰化钾反应生成氰化高铁血红蛋白。我们可以看出氰化高铁血红蛋白呈现出红色，状态较为稳定，检测工作人员将其放在540nm波长下，通过使用分光光度法测定其光密度，对比实际测量出的光密度与标准品的光密度，最终获得准确的血红蛋白含量。氰化高铁法获得世界卫生组织和国际血液标准化委员会的认可，将其当做血红蛋白测定的标准化参考方法，具体化学反应式如下所示：Hb+K3Fe（CN）6 →Hi；Hi+CN- →HiCN。
2.3氧化法
由于Hb中含有一定量的亚铁血红素，其能够使邻-甲联苯胺氧化呈现出蓝色状态，在酸反应后呈现出黄色，吸收峰维持在435nm，检测人员通过检测不一样浓度的标准血红蛋白和邻-甲联苯胺反应后的吸光度，从而最终明确出氧化法的线性范围。接着去除线性范围内的低、中、高和最低的4个血红蛋白浓度的样品各6份，通过采取测定其回收率明确定量限。邻-甲联苯胺法的最大特点就是方便简捷、科学准确，能够适用于牛血清中的血红蛋白含量检测。
3.荧光法在血红蛋白检测中的应用
前述讲过血红蛋白的内部结构与HRP存在着相似的特点，因此血红蛋白具备了类似过氧化酶的催化活性。检测人员能够将其作为过氧化物的模拟酶，合理选择出一种适宜的酶催化氧化底物，可以让两种在特定的条件下发生充分的反应，然后运用荧光法对反应产物进行分析，科学计算出血红蛋白的浓度[2]。
林玲[3]等通过研究分析，有效设计出了一种能够直接测定血红蛋白的新方法。检测人员使用表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵和Zn2+对血红蛋白的荧光强度有显著的提升作用，采用荧光光谱法可以有效定量出人体血清中的实际血红蛋白。
王全林等基于血红蛋白的过氧化物酶活性，他们根据催化过氧化氢氧化对甲基酚的反应体系，成功发现了表面活性剂SDS对该体系反应速率有显著的增强反应，从而有效研究设计出了高灵敏测定Hb的催化荧光分析法。基于1.5×10-3 mol/L SDS调价下，测定Hb的线性范围为1×10-9～8×10-8mol/ L，工作人员检出限为3.4×10-10mol/L，适用在尿中的Hb测定，能够获得较好的检测效果。针对其对甲基酚存在一定的毒性，因此研究者又设计出了以EBT作为其氢供底物时的酶动力学行为，有效建立了测定血红蛋白的催化动力学光度法。
4.结束语
综上所述，随着现代化技术的不断创新发展，血红蛋白的检测分析已经基本实现了自动化，检测人员能够运用各种高科技设备对其进行检测工作，例如被广泛应用的血气分析仪、血细胞计数仪等。然而这些仪器设备成本都较为昂贵，未能够得到有力普及。因此，要想有效降低血红蛋白检测分析成本，还须进一步的对检测仪器和手段进行改进完善，帮助社会创造出更多的现时价值，促进整个社会和谐稳定的发展。
参考文献：
[1]杨胜科，费晓华，任远强.无氰化物测定血红蛋白的方法研究[J].分析科学学报，2013，19（2）：127-129.
[2]王全林，吕功煊.基于血红蛋白的过氧化物酶特性测定其在血浆中游离态含量[J].分析化学研究简报，2014，31（8）：945-949.
[3]林琳，张珂，冶保献，等.在四甲基氯化铵促进下血红蛋白在裸银电极上的电化学行为及分析应用[J].分析化学，2013，24（11）：1281-1283.
论文作者:陈亚萍
论文发表刊物:《健康世界》2016年第17期
论文发表时间:2016/9/30
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