冯仁田[1]2000年在《衰老的免疫学研究：自然衰老的免疫系统变化和氧化应激对免疫系统的影响》文中研究表明众所周知，机体衰老或老化伴有免疫系统退化和活性氧(ROS)产生增加。在众多衰老学说中，氧化应激学说(自由基学说)和免疫学说一直占有重要地位。氧自由基(现已归入“活性氧”的概念中)的产生可由体内外因素所引起，一般情况下，活性氧可被机体内源性的抗氧化防护体系所抑制或淬灭。若自由基产生过多，或机体的清除机制及其损伤修复功能下降的话，就可对生物大分子造成严重氧化损伤，形成多种“氧化中间体”，进而对各系统的细胞功能产生影响。比如，细胞膜上的脂质过氧化、DNA氧化损伤、蛋白质巯基丢失。这种损伤的增龄性累积可使机体各系统功能下降，进而促使机体老化。衰老的免疫学假说则认为免疫系统从根本上参加了正常脊椎动物的老化过程，是该过程的调节装置。衰老过程中，特异性和非特异性免疫应答水平降低，T细胞发育所依赖的胸腺器官在青春期后快速萎缩，这些免疫细胞和分子水平的退化性改变，使免疫系统无法通过正常的应答过程有效行使其免疫监视功能。尽管有关衰老时免疫系统的改变已积累很多资料，但关于引起免疫系统退化的机制探讨较少。有证据表明，活性氧可对免疫系统造成损害，在氧化应激状态下，机体免疫系统究竟发生了哪些变化?活性氧是否引起免疫老化(immunosenescence)的原因?氧化损伤学说是否与免疫学说有内在联系?这些问题正是本文研究的目的所在。 目前，有关氧化应激对免疫系统的作用研究较少，体内试验及其机制探讨更不多见，为了全面评价活性氧的生物学效应，深入探讨衰老免疫学的机理，本文从衰老与免疫、氧化应激与免疫、氧化应激与胸腺细胞发育、氧化应激与特异性免疫应答等方面进行了探讨。 一．Balb／C小鼠免疫系统结构与功能的增龄性变化 为了观察和证实Balb／C小鼠在自然衰老过程中免疫系统结构与功能的增龄性变化，对不同月龄小鼠的胸腺和脾脏组织结构、功能及其细胞表型做了系统的研究。采用~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入法、噻唑兰(MTT)法、IL-2依赖细胞株(CTLL-2)测定等实验，检测1、5、10和19月龄小鼠脾细胞表面抗原表达及免疫功能，并用苏木精伊红(HE)染色检测免疫器官的组织学变化。随着增龄，小鼠胸腺皮、髓质比例减小，界限消失，有分泌液泡形成；脾脏白髓结构不规则。与1月龄小鼠相比，19月龄小鼠T细胞增殖能力、NK和LAK细胞活性及脾细胞诱生IL-2的能力分别下降95％、45％、49％和61％，碘化丙啶染色检测显示，脾脏和胸腺的S期细胞随增龄而减少。免疫荧光染色显示，1、5、10月龄小鼠脾
曹湘博[2]2006年在《V_E干预D-半乳糖亚急性中毒拟衰老模型鼠免疫衰老实验研究》文中提出为深入探讨D-半乳糖亚急性中毒拟衰老鼠模型的免疫衰老的相关指标变化与机制及V_E对免疫衰老的干预作用。首先本课题采用D-半乳糖皮下注射方式建立了D-半乳糖亚急性中毒衰老鼠模型,并应用免疫学与生物化学检测方法对与免疫系统相关功能、氧自由基及血液生化指标等进行了检测。结果表明:衰老模型鼠胸腺指数下降;免疫细胞凋亡增加;T淋巴细胞增殖能力降低;IL-2、INF-γ、TNF细胞因子活性下降;杀伤细胞活性降低;氧化损伤加剧及血糖血脂升高。另外为研究V_E对衰老模型鼠免疫衰老的影响,对上述动物模型进行V_E药物干预实验,结果发现,与模型组小鼠比较V_E喂饲组小鼠的胸腺指数,免疫细胞凋亡,T淋巴细胞增殖能,IL-2、INF-γ、TNF细胞因子活性,杀伤细胞活性,氧自由基指标,血糖血脂均有适应原样调节作用。上述结果表明,衰老机体免疫功能变化显著,免疫衰老在机体衰老中起重要作用。V_E可通过改善免疫功能及降低氧自由基的损伤发挥延缓衰老作用。
殷复建[3]2012年在《脱氢表雄酮与染料木素对老年大鼠抗氧化及脂代谢的调节作用》文中进行了进一步梳理类固醇激素对动物的生长发育、各种生理机能的调节等各个方面均具有十分重要的作用。随着我国老龄化人群的不断增加,对衰老机制及其调节的研究也逐渐引起人们的关注；在畜牧生产中,因衰老而引起各种生理机能的改变,最终会导致动物的生产性能大幅度下降。因此,对动物衰老问题的研究也变得越来越重要。机体因脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone, DHEA)含量的降低而导致类固醇激素水平的下降是机体自然衰老的重要因素之一。脱氢表雄酮被称为多向性的“激素缓冲剂”,在调节脂肪代谢、提高机体抗氧化和免疫能力、促进动物健康等方面均具有重要的生物学作用。染料木素(Genistein, GS)是来源于豆类植物的一种异黄酮类化合物,其生物学活性多种多样,不但与人类健康有关,且在畜牧生产中可促进动物的生长发育、提高生产性能。近年来对染料木素的抗氧化、抗肿瘤、降血脂、促进生产性等生物学机制的研究表明,染料木素发挥其生物学作用均与其具有雌激素样活性和抗雌激素样活性的双重效应有关。DHEA和GS在欧美已广泛应用于人体保健,但已有的体内、体外对DHEA和GS生物学功能的研究主要集中在成年动物上,对老年动物生理机能影响的研究甚少。因此,本试验在建立自然衰老大鼠模型基础之上,通过分析老年大鼠血清中内分泌激素含量、抗氧化酶活性、脂代谢相关生化指标及与抗氧化和脂代谢相关因子／酶基因表达的变化,揭示灌胃DHEA或GS对老年大鼠的抗氧化及脂代谢的影响,以期为促进动物的健康养殖和人类相关疾病的防控提供理论依据。1自然衰老大鼠生理生化指标的检测本试验选用12只3月龄清洁级雄性SD大鼠为研究对象,自然条件下饲养1周后将6只大鼠进行宰杀作为阴性对照组,其余6只SD大鼠自然条件下饲喂至17个月作为阳性对照组。试验结束后,收集血清、肝脏、心脏、大脑、睾丸、肾脏等样品待测。试剂盒法检测血清、肝脏、心脏、大脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)活性和丙二醛(MDA)含量；放射免疫分析法检测血清中雌二醇、睾酮、胰岛素和胰高血糖素含量。荧光定量PCR法检测谷氧还蛋白(Grx)、血红素加氧酶-1(HO-1)、诱导型一氧化氮合酶(NOS2)的mRNA表达。试验结果表明,阳性对照组大鼠的肝脏、大脑、肾上腺、睾丸、附睾、胸腺的相对重量均极显著低于阴性对照组,且各主要组织器官均表现出了不同程度的生理性萎缩。血清内分泌激素结果显示,阳性对照组血清睾酮含量显著降低,胰高血糖素的含量则显著升高,但雌二醇、胰岛素的含量与阴性对照组相比则无统计学上的显著性差异。与阴性对照组相比,阳性对照组血清、肝脏、大脑、心肌组织中SOD的活性均表现出了明显的降低趋势,且肝脏、大脑组织中T-AOC活性显著降低,MDA的含量显著升高；心肌组织中HO-1mRNA相对表达量显著升高,NOS2mRNA的相对表达量显著降低,Grx mRNA的表达量有升高的趋势。该试验结果分别从组织器官的形态、神经内分泌激素含量和机体抗氧化能力等方面证实,试验所用的阳性对照组大鼠已处于衰老状态。2脱氢表雄酮与染料木素对老年大鼠的抗氧化调节作用试验选用24只3月龄清洁级雄性SD大鼠,适应1周饲养环境后将其中6只大鼠进行宰杀作为阴性对照组(NC组),其余18只大鼠饲养至15月龄后随机分成阳性对照组(PC组)、脱氢表雄酮处理组(DHEA组)和染料木素处理组(GS组)。DHEA组、GS组分别灌胃20mg/Kg·BW和10mg/Kg·BW的DHEA和GS,PC组灌胃等体积的DMSO,试验为期8周。试验结束后采集样品,待测。试验结果显示,DHEA和GS均有延缓雄性自然衰老的大鼠体重降低的效应,且均可提高雄性大鼠的饲料利用率。组织形态学结果显示,DHEA和GS处理可部分逆转雄性大鼠部分主要脏器的生理性萎缩。与PC组相比,DHEA和GS处理组可显著提高老年大鼠血清中睾酮和雌二醇的含量；DHEA和GS处理可提高老年大鼠肝脏、心肌和大脑组织中T-AOC活性,降低心肌组织中MDA含量,但对各组织器官中SOD活性并无显著影响；DHEA处理可显著提高心肌组织中NOS2mRNA的相对表达量,但对Grx和HO-1mRNA相对表达量则无显著性影响；GS处理可显著增加心肌组织中Grx和NOS2mRNA的相对表达量,但对HO-1mRNA的相对表达量则无显著性影响。以上结果提示,DHEA和GS处理可通过调节内分泌激素的含量、抗氧化相关因子含量/活性的变化及调节衰老相关基因的表达而延缓老年大鼠自然衰老的进程。3脱氢表雄酮与染料木素对老年大鼠的脂代谢的调节作用试验设计同上。试验结束后,收集血清、肝脏等样品,待测。试剂盒法检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),肝脏中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的含量以及肝脏中的肝脂酶(HL)的活性；放射免疫分析法检测血清中瘦素、胰高血糖素的含量及胰岛素的含量。荧光定量PCR法检测肝脏中的激素敏感脂肪酶(HSL)、脂肪酸转移酶(FAT/CD)、AMP活性蛋白激酶α-1(AMPKα-1)、AMP活性蛋白激酶α-2(AMPKα-2)、肉碱棕榈转移酶-1(CPT-1)、脂酰辅酶A氧化酶(ACOX) mRNA的相对表达水平。试验结果表明,与PC组相比较,DHEA处理可显著性地升高肝脏组织中HL的活性,但对血清和肝脏组织中TC、TG的含量则无显著性影响；DHEA处理可降低血清中胰岛素、胰高血糖素、胰岛素/胰高血糖素比值,升高瘦素含量的效应,同时可提高肝脏组织中FAT/CD36、AMPK1、AMPK2、 ACOX mRNA的相对表达量,但对HSL、CPT-1mRNA的相对表达量则无显著影响。GS处理可降低血清和肝脏组织中TC、TG的含量、升高肝脏组织中HL活性和血清HDL-C含量及血清中胰岛素、胰高血糖素和瘦素的含量；GS处理可显著升高FAT/CD36mRNA的相对表达量,升高CPT-1、ACOX mRNA相对表达量及降低AMPK1、AMPK2mRNA旧对表达量的趋势。以上结果提示,DHEA和GS处理均可部分地改善老年大鼠的脂代谢,且GS对老年大鼠脂肪代谢的调节作用效应明显优于DHEA。本实验结果揭示,DHEA与GS均能部分地延缓老年大鼠自然衰老的进程,其作用机制可能是增强对机体抗氧化相关因子/酶的表达或活性的保护作用、调节老年大鼠神经内分泌激素及抗氧化相关酶的变化。同时,DHEA和GS均可通过调节脂肪代谢相关因子/酶的表达或活性而不同程度地降低机体脂肪的合成、促进脂肪的分解,进而调节雄性老年大鼠机体的脂肪沉积。
颜亭祥[4]2010年在《“劳倦过度、房事不节”肾阳虚模型下丘脑—垂体—肾上腺皮质—胸腺轴的改变及分子免疫机制的研究》文中研究表明目的：探讨“劳倦过度、房事不节”诱发的肾阳虚模型小鼠细胞和分子免疫调节作用机制,同时,进一步研究该模型对下丘脑-垂体-肾上腺皮质-胸腺轴的影响作用机理。方法：以已经建立的“劳倦过度、房事不节”肾阳虚小鼠为实验动物,将小鼠随机分为三组：正常对照组、劳倦过度、房事不节组(模型组)和金匮肾气丸治疗组。对各组小鼠胸腺组织的形态学进行光学显微镜和电子显微镜观察,并测定小鼠淋巴细胞转化率以及γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-4(IL-4)等Th1/Th2类细胞因子含量；采用原位逆转录多聚酶链反应(RT-PCR),对IFN-γ和IL-4的mRNA转录水平进行检测分析；利用流式细胞术(FACS)对小鼠淋巴细胞的细胞周期和凋亡进行分析。同时用放射免疫方法测定肾上腺轴激素含量；利用基因芯片技术筛选出脑基因表达谱中与免疫相关的上、下调基因。结果：“劳倦过度、房事不节”诱发的肾阳虚模型导致小鼠胸腺组织形态和超微结构发生改变,脾细胞淋巴细胞转化率下降,Th1类细胞因子IL-2和IFN-γ,水平也显著下降,而Th2类细胞因子IL-4活性明显上升,细胞凋亡率升高,下丘脑-垂体-肾上腺轴激素水平降低。同时,从485个脑基因中筛选到36个具有显著性的与免疫相关脑差异表达上、下调基因,并作了进一步分析。而金匮肾气丸对上述这些异常可发挥免疫调节作用。结论：“劳倦过度、房事不节”肾阳虚模型小鼠胸腺组织形态和超微结构被破坏,并通过免疫相关基因的改变而引起Th1类和Th2类细胞因子失衡和细胞周期通路阻滞,导致机体免疫功能发生紊乱。金匮肾气丸可以通过调整细胞因子水平,提高肾上腺轴激素含量,降低淋巴细胞凋亡从而改善胸腺功能,调节免疫功能失调。同时,从器官到细胞直至基因水平上进一步证实中医的肾阳虚证与下丘脑-垂体-肾上腺皮质-胸腺轴功能低下有关。
张丽梅[5]2018年在《紫山药多糖抗衰老活性及其机制研究》文中进行了进一步梳理紫山药是薯蓣科植物薯蓣的干燥根茎,表皮紫褐色,肉质紫色亮丽,因而得“紫山药”一名。紫山药味甘,性平,营养物质丰富,因含有花色苷类化合物,使其具备了高于普通山药数倍的全面高质的营养价值。紫山药具有滋肺益肾、健脾止泻功能,对脾虚腹泻、久痢不愈等病症有一定的食疗作用,是一种具有很大开发潜力的营养原料。本文以紫山药为研究对象,重点研究了紫山药多糖(Purple Yam Polysaccharides,PYPs)的抗衰老生物活性,并对作用机制进行了初步探索,主要研究结果如下:1.PYPs可增强D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老大鼠的肝脏和脑部的抗氧化能力。本研究中以400mg/kg bw对SD大鼠进行衰老模型建立,以不同剂量的PYPs(20、100、500mg/kg bw)对大鼠进行干预,结果表明:PYPs可以显著地降低衰老大鼠肝脏、脑部脂质过氧化产物MDA的产生,同时,能显著升高内源抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px的活力以及总抗氧化能力T-AOC的水平,增加GSH的体内含量;同时观察到PYPs可以保护大鼠肝脑组织,减轻D-gal的氧化损伤,改善肝脏细胞和神经元细胞的状态,验证了 PYPs可通过增强衰老大鼠的抗氧化能力发挥延缓器官衰老的作用。2.PYPs具有延缓免疫衰老的作用。研究结果表明,经PYPs干预后的衰老大鼠血清中细胞因子IL-2因子水平明显升高,IL-6因子明显下降,胸腺指数及脾脏指数随着PYPs处理量变化显著提高(p<0.05),通过HE染色观察发现脾脏形态在PYPs干预后D-gal损伤得到明显改善,红、白髓分界较清楚,白髓区较大,动脉周围淋巴鞘明显,脾小体数量较多。说明PYPs对衰老大鼠免疫系统有保护作用。对大鼠血清中AGEs产物进行检测,发现PYPs处理组的大鼠体内AGEs产物与模型组比较有明显降低的趋势,说明PYPs可以阻止非酶糖基化反应,保护器官不受损害。3.本研究发现,D-gal可以明显增加大鼠肝脑中衰老基因p16、p21的表达量(p<0.01),说明D-gal可通过影响细胞复制性衰老的进程,经PYPs干顶后,衰老大鼠肝脑中衰老基因表达明显下调,且与模型组比较有极显著差异(p<0.01),说明PYPs抗衰老作用可能与调控细胞周期过程中衰老基因表达有关;进一步以免疫印迹检验相关蛋白的表达,结果证实PYPs可以显著地下调大鼠肝脑中p53、p21蛋白的表达,PYPs具有从p53-p21信号通路上抑制衰老发生发展的作用。4.对肝脏细胞HepG2和神经细胞PC 12进行D-gal造模和PYPs干预进行细胞衰老研究,SA-β-gal染色发现PYPs可以有效延缓D-gal诱导的细胞衰老,与模型组比较,各浓度PYPs对细胞衰老的抵抗作用都具有极显著差异(p<0.01);CCK8检测证明PYPs可以改善D-gal导致的细胞活性下降,其改善作用随PYPs浓度增长呈现上升趋势;采用AnnexinV-FITC/PI双染方法检验细胞凋亡,实验结果表明PYPs可有效阻止HepG2、PC12细胞凋亡,且PYPs对细胞的这种保护能力与浓度存在正相关性。为进一步验证PYPs可以从细胞周期的途径延缓细胞衰老的进程,应用Western blot方法对周期调控蛋白p53、p21、pRb表达进行观察,发现D-gal诱导后的细胞中p53、p21、pRb蛋白表达显著下降(p<0.05),PYPs各浓度组细胞中p53、p21、pRb蛋白表达急剧上升,与模型组比较,p53、pRb蛋白表达量有极显著差异(p<0.01),p21蛋白表达有显著差异(p<0.05),说明PYPs延缓细胞衰老的作用可能与p53-p21信号通路有关;经PI染色方法研究细胞周期的结果验证,PYPs干预致使G2/M期细胞量显著增长(p<0.05),细胞周期在G2/M期明显被阻滞,结合蛋白表达结果可推测PYPs是通过p53-p21路径影响CDK2激酶活性,在G2/M期形成检查点,阻滞细胞分裂进程,延缓细胞衰老。5.寿命的延长是延缓衰老的直观指标,以秀丽隐杆线虫为模式生物观察PYPs延缓寿命的活性。结果表明:PYPs可以延长线虫的寿命的24%,可以通过增强线虫运动能力、产卵量和日吞咽次数来改善线虫的生理状态;PYPs可以显著增强线虫的抗热激能力和抗氧化胁迫能力(p<0.05),可通过促进daf-16基因入核并诱导下游基因表达来实现抗衰老的作用。综上所述,PYPs具有明确地抗衰老活性,其机制可能通过PYPs影响细胞周期蛋白p53、p21表达从而调控细胞周期来实现。
彭金娥[6]2016年在《希望Ⅱ号对烟草烟雾暴露诱导小鼠肺损伤的作用及其机理研究》文中研究说明目的：观察希望Ⅱ号对烟草烟雾暴露诱导小鼠肺损伤的血液生化指标、肺组织病理学的影响,应用蛋白质组学技术研究烟草烟雾暴露小鼠肺蛋白质表达变化,并从蛋白组学角度探讨希望Ⅱ号对于烟草烟雾暴露诱导小鼠肺损伤的可能作用机理。方法：156只雄性昆明小鼠按随机数字表方法,随机分为单纯烟草烟雾暴露、停止烟草烟雾暴露(即戒烟)治疗和持续烟草烟雾暴露治疗三部分,共计13组,每组12只。单纯烟草烟雾暴露部分分为①对照组：每天置于自然空气环境中,15d取材；②单纯暴露模型组：每天置于烟熏箱中烟草烟雾暴露72min,15d取材。烟草烟雾暴露-治疗部分分为①对照组：每天置于自然空气环境中,16d开始每日灌胃双蒸水5.49ml·kg-1,45结束造模,取材；②戒烟模型组：每天置于烟熏箱中烟草烟雾暴露72min,连续15d,16d开始置于自然空气环境中,余同对照组；③戒烟治疗原花青素组：16d开始每日灌胃原花青素52mg·kg-1,余同戒烟模型组；④戒烟治疗希望Ⅱ号低、中、高剂量(XwIIL.XwIIM、 XwIIH)组：16d开始每日灌胃1.83ml·kg-1、5.49ml·kg-1、16.47ml·kg-1希望Ⅱ号,余同戒烟模型组。⑤持续暴露模型组：每天置于烟熏箱中烟草烟雾暴露72min,连续45d,余同对照组；⑥持续暴露治疗原花青素组：16d开始每日灌胃原花青素52mg·kg-1,余同持续暴露模型组；⑦持续暴露治疗希望Ⅱ号低、中、高剂量组：16d开始每日灌胃1.83ml·kg-1、5.49ml·kg-1、16.47ml·kg-1希望Ⅱ号,余同持续暴露模型组。取小鼠血清用于测定谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT),过氧化氢酶(CAT),乳酸脱氢酶(LDH),琥珀酸脱氢酶(SDH),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),髓过氧化物酶(MPO),丙二醛(MDA),总超氧化物歧化酶(T-SOD),铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)活性。取肝脏右叶上部、肺脏右上叶、肾匀浆检测T-SOD、Cu/Zn-SOD、MDA水平。取皮肤、肺脏右下叶匀浆检测羟脯氨酸(Hyp)含量。取心脏上部匀浆检测MPO含量。取肝脏左叶、肺脏左上叶,心脏中部,两肩胛至两髂骨之间的背部皮肤、左肾用10%中性缓冲福尔马林固定48小时,然后进行HE常规染色、Masson特殊染色,弹性纤维染色,形态计量肝细胞体积构成比,肺泡体积差,肺泡腔面积与总面积比,平均肺泡数,肺、心、肝、肾胶原纤维体积比,表皮厚度,弹性纤维,转化生长因子-β1的表达,比较组间变化。提取小鼠肺脏蛋白,应用蛋白质组学技术分离和鉴定模型及治疗组与对照组小鼠之间的表达差异蛋白质。结果：①与对照组相比,各模型组小鼠肝、肺组织Cu/Zn-SOD、T-SOD、血清CAT、 SDH、GSH-PX活性均显著性降低；肝、肺组织MDA、肺羟脯氨酸、血清AST、ALT、 LDH、MPO含量均显著性升高。②与戒烟模型组比较,戒烟治疗希望Ⅱ号低、中、高剂量组小鼠肝组织T-SOD、Cu/Zn-SOD、血清GSH-PX、SDH活性均显著性回升；戒烟治疗希望Ⅱ号中剂量组小鼠血清CAT活性显著性回升；戒烟治疗希望Ⅱ号高剂量组小鼠肝、肺组织MDA含量显著性回降；戒烟治疗希望Ⅱ号低、高剂量组小鼠LDH活性显著性回升,戒烟治疗希望Ⅱ号低、中、高剂量组小鼠血清AST、ALT、MPO含量均显著性回降；戒烟治疗希望Ⅱ号低、中、高剂量组小鼠肺组织Cu/Zn-SOD活性显著性回升,MDA含量显著性回降；戒烟治疗希望Ⅱ号中、高剂量组小鼠肺组织总SOD活性显著性回升,肺羟脯氨酸含量显著性回降。③与持续暴露模型组相比,持续暴露治疗希望Ⅱ号低、中、高剂量组小鼠肝组织T-SOD、Cu/Zn-SOD、血清CAT、GSH-PX、SDH活性均显著性回升；持续暴露治疗希望Ⅱ号低、中、高剂量组小鼠肝、肺组织MDA、血清AST、ALT、MPO含量显著性回降；持续暴露治疗希望Ⅱ号中、高剂量组小鼠肺组织Cu/Zn-SOD、总SOD活性显著性回升；持续暴露治疗希望Ⅱ号低、中剂量组小鼠肺羟脯氨酸、血清LDH含量显著性回降。④希望Ⅱ号上调模型小鼠上调TGF-β1的表达。蛋白质组学结果显示希望Ⅱ号对持续暴露模型组与对照组之间差异蛋白表现调节作用,差异蛋白参与氧化还原功能酶,脂肪酸代谢类,参与脂肪酸,心肌收缩及其他代谢过程。结论：希望Ⅱ号对烟草烟雾暴露诱导肺损伤及相关联的皮肤、心脏、肝脏、肾脏损伤具有保护作用。希望Ⅱ号可能是通过提高机体的抗氧化酶含量,维护氧化与抗氧化平衡,调节肺脏氧化酶活性,调节肺脏蛋白质、脂肪酸代谢,从而保护肺脏及其它脏器功能,对抗烟草烟雾暴露的氧化损伤。
凃璨[7]2016年在《滋阴补肾法对衰老大鼠免疫功能及凋亡蛋白酶的影响》文中提出目的:通过动物实验观察滋阴补肾法对衰老大鼠免疫功能及凋亡蛋白酶的影响,并初步探讨滋阴补肾法延缓衰老的可能机制。方法:1.分组:将健康Wistar大鼠40只随机分为四组,正常组(空白组/N组)、模型组(对照组/M组)、阳性对照组(维生素E组/P组)、滋阴补肾组(六味地黄治疗组/NK组),每组10只。2.造模及给药:M组、P组及NK组给予D-半乳糖100mg/kg·d腹腔注射,N组给予同等体积生理盐水注射。随后灌胃给药,P组给予维生素E0.027g/kg·d灌胃,NK组给予六味地黄丸3.24g/kg·d灌胃,N组和M组给予同样体积生理盐水灌胃。3.观察指标及检测方式:每周观察各组大鼠的一般状态并称取体质量,根据体质量调整用药剂量。连续8周。最后一次给药2小时后,采大鼠眼眶血1.5ml。取0.5ml血应用全自动生化分析仪测定大鼠尿素氮(BUN),血肌酐(Scr)。另1ml大鼠血采用硝酸酶还原法(Griess)测定一氧化氮(NO)及一氧化氮合成酶(NOS)值。麻醉并处死大鼠后,剥离各组大鼠胸腺及脾脏称重,胸腺或脾脏重量与体重的百分比分别为免疫器官指数。取各组大鼠肾脏行免疫组化:首先包埋组织石蜡中,切片,脱蜡,EDTA抗原修复液盒中行抗原修复,再将切片放入3%过氧化氢溶液中阻断内源性过氧化物酶,3%BSA封闭,后加入配置好的一抗Bcl-2、Bax及Caspase-3,然后DAB显色并复染细胞核,最后脱水,中性树胶封片,并行显微镜镜下检查,采集图像。制定免疫组化评分评价各组大鼠肾脏组织中凋亡蛋白显像及强弱的差异。统计学分析行正态和方差齐性检验后处理组间采用方差分析,两两比较用LSD-t检验。结果:1.一般情况:N组大鼠摄食正常,毛发浓密有光泽,活泼好动,不易捉取;M组大鼠逐步出现皮毛萎黄,大便稀溏,饮食明显减少,爬行跑动缓慢,反应迟钝等与自然衰老大鼠类似的症状;P组和NK情况介于两者之间。体质量方面,第3周时组间差异具有统计学意义(P<0.05),至第6周时组间差异有显著统计学意义(P<0.01);至第八周结束时,组间差异显著(P<0.01),M组(345.30±12.42)与N组(375.80±5.87)、M组与NK组(371.45±8.48)组间差异显著(P<0.01)。NK组与N组、NK组与P组有统计学差异(P<0.05)。2.各组大鼠用药后肾功能指标比较:BUN(mmol/L)、Scr(μmol/L)两项指标组间比较有显著统计学差异(P<0.01)。再经两两比较示M组(17.3±4.12,101.12±25.67)与N组(7.34±0.55,33.75±5.61)、M组与NK组(12.5±2.31,85.67±17.65)有显著统计学差异(P<0.01),NK组与N组有统计学差异(P<0.05),而NK组与P组(13.1±2.54,87.58±18.97)无明显统计学差异。3.免疫功能:3.1免疫器官指数方面,8周后各组胸腺指数有统计学差异(P<0.05),且两两比较发现M组(0.99±0.27)与N组(1.34±0.19)比较有统计学差异(P<0.05)。脾脏指数差异有统计学意义(P<0.05),且M组(1.67±0.44)与N组(2.19±0.68)比较有显著统计学差异(P<0.01),M组与NK组(2.06±0.52)比较有统计学差异(P<0.05)。3.2各组大鼠血清一氧化氮、一氧化氮合成酶指标的比较:各组一氧化氮(μmol/L)含量差异显著(P<0.01)。其中,M组一氧化氮含量(253.5±31.8)较N组(154.3±32.8)、P组(192.5±35.6)显著升高(P<0.01),较NK组(216.5±32.2)升高(P<0.05);与N组相比,P组及NK组一氧化氮升高也具有统计学意义(P<0.05),而P组与NK组之间比较无明显差异(P>0.05)。各组一氧化氮合成酶(μmol/L)含量具有统计学差异(P<0.05)。其中,M组一氧化氮合成酶含量(44.4±6.7)较N组(29.8±5.6)显著升高(P<0.01),较P组(32.6±4.8)、NK组(33.2±5.1)升高(P<0.05);与N组相比,P组及NK组一氧化氮合成酶升高也具有统计学意义(P<0.05),而P组与NK组之间比较无明显统计学差异(P>0.05)。4.各组大鼠肾脏Bcl-2、Bax及Caspase-3的比较:Bcl-2表达方面,模型组较正常组、阳性对照组、滋阴补肾组表达明显减少,细胞染色浅,阳性细胞数目少,评分有显著统计学差异(P<0.01),而滋阴补肾组与正常组无明显统计学差异(P>0.05)。Bax表达方面,模型组较正常组、阳性对照组、滋阴补肾组表达明显增多,细胞染色深,阳性细胞数目多,评分有显著统计学差异(P<0.01),而滋阴补肾组与阳性对照组无明显差异(P>0.05)。Caspase-3方面,模型组较正常组、滋阴补肾组表达明显增多,细胞染色深,阳性细胞数目多,评分有显著统计学差异(P<0.01),且滋阴补肾组与阳性对照组有统计学差异(P<0.05)。结论:衰老大鼠体质量、肾功能及免疫器官指数等均较正常大鼠减少,相反,一氧化氮、一氧化氮合成酶的分泌及细胞凋亡较正常大鼠增多,而六味地黄丸为代表的滋阴补肾法可延缓衰老大鼠体质量、肾功能及免疫器官指数的下降,抑制一氧化氮、一氧化氮合成酶的分泌及细胞过度凋亡。因而滋阴补肾法可能对衰老大鼠的免疫功能产生一定影响,进而延缓其衰老的进程。
王竹影[8]2007年在《不同模式低氧训练后大鼠的免疫应答及其相关机制研究》文中研究表明近年来,低氧训练正在兴起。研究已经证实,常氧条件下过量运动会导致免疫抑制,低氧环境会损害机体的免疫机能。低氧训练时机体同时承受运动和缺氧的双重刺激,应激程度明显加剧,但目前关于低氧训练及其机理的系统研究还不充分,对低氧训练后机体免疫机能及其变化机制的研究显得尤为薄弱。由于尚缺乏高强度训练模型,目前对高强度低氧训练后免疫机能的变化还未见报导。研究目的:1、建立高强度低氧训练动物模型;2、研究中等及高强度低氧训练、高住低练对提高有氧及无氧运动能力的效果;3、探寻中等及高强度低氧训练、高住低练后机体免疫应答的反应及适应规律,为低氧训练实践中免疫机能监控提供理论依据;4、探讨不同模式低氧训练后免疫机能变化的可能机制;5、探讨不同训练强度下氧环境对机体免疫系统的影响,为科学制定低氧训练计划提供理论依据。研究方法:225只大鼠按氧环境分为常氧、高住低练和低氧三大组,每一大组再按训练强度分为无训练、中等强度训练和高强度训练三小组,取样前根据最后一次运动负荷每小组再分为安静组和定量运动组,共形成24种组合。中强度训练组训练5周,高强度训练组训练6周。取血样进行血细胞分类计数、IL-2、IL-4、应激激素和过氧化水平检测,取脾脏分离淋巴细胞和NK细胞,进行淋巴细胞转化功能、NK细胞活性测定。研究结论:本研究成功地建立了不同低氧训练方式中、高强度训练的动物模型,研究结果证明,HiLo和低氧训练不仅可以提高有氧能力(低氧训练的效果显著好于HiLo),而且能够提高无氧耐力(HiLo与低氧训练效果并无显著差异)。但HiLo和低氧训练在有效提高运动成绩的同时也会带来免疫机能的变化。与常氧训练比,低氧训练对基础状态下的免疫机能影响不大,在定量运动中甚至表现出部分免疫机能的节省化现象;而HiLo训练对基础状态下免疫机能具有明显的损害作用,尤其是HiLo有氧耐力训练。氧环境和训练强度对基础状态下不同免疫机能的影响不同,氧环境对B-SI、训练强度对WBC、B-SI、NK活性均有显著性独立影响。与常氧和HiLo环境比,低氧环境能够刺激B细胞的分化;与无训练和中等强度训练比,高强度训练会显著降低WBC及单核细胞的数量,促进B细胞分化,提高NK细胞活性。WBC及其分类、NK细胞活性、IL-4水平是不同强度低氧训练中反映免疫机能变化的有效指标,可用于免疫机能的监控。由于WBC及其分类检测方便、反应敏感,因此,可作为低氧训练中免疫监控的首选指标。不同模式低氧训练引起免疫机能的诸多变化与神经内分泌、氧化应激水平之间有着密切的关系。皮质激素和ACTH水平的升高、合成激素水平的降低以及高氧化应激压力均与HiLo组的免疫低下有关。
肖凌[9]2012年在《针灸提高大鼠对疫苗的免疫效应及延缓衰老的实验研究》文中研究表明目的：检测“双固一通”电针法延缓D-半乳糖诱导衰老模型大鼠的免疫衰老(实验一)；探讨“双固一通”针灸法对不同浓度百白破疫苗免疫大鼠增强其疫苗免疫效应的作用,摸索针灸提高疫苗免疫效应的最佳疫苗浓度(实验二)；检测D-半乳糖诱导衰老模型大鼠衰老相关指标的改变,鉴定免疫衰老模型构建成功(实验三)；将百白破疫苗免疫衰老模型及正常大鼠,采用“双固一通”针灸法处理,探讨针灸是否能提高大鼠对疫苗的免疫应答效应,发挥疫苗佐剂的作用及延缓免疫衰老的效应(实验四)。方法：实验一：雄性SPF级SD大鼠40只,随机取30只大鼠经皮下注射D-半乳糖42d制作衰老大鼠模型,剩余10只为正常对照组。造模结束后模型组再随机分为双固一通组(“关元”、“后三里”穴接电针,“百会”穴毫针针刺)、针刺对照组(“委中”、“水分”穴接电针,“印堂”穴毫针针刺)、衰老模型组,每组10只大鼠。经3周治疗后处死动物检测脾脏指数、胸腺指数、流式细胞法检测CD8+T细胞占T细胞的百分率及CD8+CD28-T占CD8+T细胞的百分率。实验二：雌性SPF级Wistar大鼠48只,随机分组为六组：1/10疫苗免疫针灸组、1/10疫苗免疫对照组、1/20疫苗免疫针灸组、1/20疫苗免疫对照组、1/40疫苗免疫针灸组、1/40疫苗免疫对照组。每组注射相应浓度的百白破疫苗,针灸组电针刺激大鼠“后三里”、“百会”、“关元”穴,并施以艾灸处理3周,第5周取材,心脏采血分离血清,用Vero细胞法测定白喉抗毒素的效价；MTS比色法检测脾细胞特异性增殖能力；流式细胞法检测CD4+T细胞／CD8*T细胞比值；RT-PCR检测脾细胞热休克蛋白70(HSP70) mRNA的相对表达量(同GAPDH比较)。实验三：雌性SPF级Wistar大鼠20只,随机取10只大鼠皮下注射D-半乳糖42d制作衰老大鼠模型,剩余10只为正常对照组。造模结束后,进行水迷宫实验,实验结束后处死动物,检测血清超氧化物歧化酶(SOD)的活性及甘油三脂(TG),胆固醇(CHOL)的含量,RT-PCR检测脾细胞HSP70mRNA的相对表达量。实验四：雌性SPF级Wistar大鼠40只,随机分成4组：模型免疫针灸组、模型免疫对照组、正常免疫针灸组、正常免疫对照组。模型免疫组用D-半乳糖颈背部皮下注射6周,构建衰老大鼠模型。正常免疫组注射等量生理盐水,第7周所有大鼠注射百白破疫苗,电针刺激大鼠“后三里”、“百会”、“关元”穴,并施以艾灸处理3周,针灸治疗结束后再继续喂养2周,至第12周处死所有大鼠,心脏采血,分离血清检测SOD活性、血脂和蛋白含量,用Vero细胞法测定白喉抗毒素的效价；流式细胞法检测CD4+T细胞／CD8+T细胞比值；RT-PCR检测脾细胞HSP70mRNA的相对表达量。结果：实验一：衰老模型组大鼠脾脏指数、胸腺指数低于正常对照组(P<0.05); CD8+CD28-T细胞占CD8+T细胞百分率衰老模型组明显高于正常对照组(P<0.01)；CD8+T细胞占T细胞百分率衰老模型组亦明显高于正常对照组(P<0.01)。双固一通组脾脏指数、胸腺指数较衰老模型组升高(P<0.05),而CD8+CD28T细胞占CD8+T细胞百分率显著降低(P<0.01)；针刺对照组CD8+CD28-T细胞占CD8+T细胞的百分率较衰老模型组亦降低(P<0.01)；但双固一通组比针刺对照组的CD8+CD28-T细胞占CD8+T细胞比值降低得更为显著(P<0.05)。实验二：1/20疫苗免疫针灸组的抗体效价明显高于1/20疫苗免疫对照组(P<0.01)；1/10疫苗免疫针灸组和1/10疫苗免疫对照组抗体效价均高,无明显差异；而1/40疫苗免疫针灸组和1/40疫苗免疫对照组抗体效价亦无明显差异。脾细胞增殖实验表明疫苗本身对细胞有毒性,不适宜做特异性增殖实验,流式细胞法检测1/20疫苗免疫针灸组CD4+T细胞/CD8+T细胞比值较其对照组略有增加(P>0.05)；RT-PCR结果显示1/20疫苗针灸组脾细胞HSP70mRNA的相对表达量较其对照组略有升高(P>0.05)。实验三：衰老模型组大鼠水迷宫实验(空间探索实验)经过平台次数(P<0.05)和有效区停留时间(P<0.01)明显少于正常对照组；血清SOD活性明显低于正常对照组(P<0.01),TG和CHOL含量高于正常对照组(P<0.05)；脾细胞HSP70mRNA相对表达量低于正常对照组(P<0.05)。实验四：模型免疫对照组较正常免疫对照组的SOD活性明显降低(P<0.01)；TG和CHOL的含量升高(P<0.05)；总蛋白(TP)和球蛋白(GLB)含量降低(P<0.05)；抗体效价明显降低(P<0.01)；CD4+T细胞／CD8+T细胞比值明显降低(P<0.01)；脾细胞HSP70mRNA的相对表达量明显降低(P<0.01)。模型免疫针灸组较模型免疫对照组的SOD活性升高(P<0.05)；TG和CHOL含量降低(P<0.05)；TP和GLB含量升高(P<0.05)；抗体效价明显升高(P<0.01)；CD4+T细胞/CD8+T细胞比值升高(P<0.05)；脾细胞HSP70mRNA的相对表达量升高(P<0.05)。正常免疫针灸组较正常免疫对照组的TG和CHOL含量降低(P<0.05)；TP和GLB含量升高(P<0.05)；抗体效价升高(P<0.05)。结论：实验一：电针可通过提高胸腺指数、脾脏指数及调节T细胞亚群的比例,延缓D-半乳糖诱导衰老模型大鼠的免疫衰老。实验二：针灸能提高大鼠对百白破疫苗的免疫效应,且最佳疫苗免疫浓度为1/20倍,具有作为新型疫苗佐剂的潜能。实验三：D-半乳糖能降低大鼠认知水平,增高血脂,降低氧化应激水平及应激蛋白HSP70mRNA表达,是一种构建衰老动物模型的较好方法。实验四：针灸能改善衰老大鼠的衰老相关生化指标,且能提高衰老机体对百白破疫苗的体液免疫和细胞免疫应答效应,其机制可能与通过增加内源性佐剂物质HSP70mRNA表达有关。综上所述,针灸能有效延缓免疫衰老,且能通过诱生内源性佐剂HSP70的表达,提高衰老模型大鼠和正常大鼠对百白破疫苗的体液免疫应答和细胞免疫应答效应,发挥疫苗佐剂的效用及延缓免疫衰老的作用。
汪继兵[10]2010年在《自控锻炼对癌症长期生存者的健康状况及生活质量影响的研究》文中研究说明研究目的：癌症的发生、发展过程受到多种因素的影响,如何界定在诸多因素中锻炼所发挥的作用,以及锻炼通过哪些可能途径或机制影响到癌症的发生和发展,这是关于锻炼与癌症研究需要首先克服的重要问题。因此,本研究以癌症长期生存者为对象,在准确衡量自控锻炼负荷的基础上,探讨自控锻炼对癌症长期生存的影响及其机制,为癌症的治疗与康复提供一定的理论依据和参考。研究方法：借鉴流行病学匹配病例对照研究设计,从上海市癌症康复学校20000余名会员中选取参加自控锻炼10年以上,患癌症后生存10年以上的癌症长期生存者40名为锻炼组,另选取在年龄、性别、癌症类型、治疗方式、患癌症后生存时间等方面与锻炼组每名受试者一对一匹配,但不参加自控锻炼和其他形式规律性锻炼的40名为对照组,共40对,80人。知情自愿采集血样的受试者69名,配对30对,60人。采用问卷调查锻炼组和对照组受试者的详细病史、健康状况、主观幸福感、体力活动情况；采用开放式间接测热法测定静息代谢、自控锻炼和日常步行过程中的气体和能量代谢；测定受试者的血常规,直接免疫荧光标记全血溶血法测定淋巴细胞表面抗原CD3/CD4/CD8/CD19/CD16+56的表达和调节性T细胞表面抗原CD4/CD25的表达；化学比色法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)。研究结果：1)气体代谢：自然走阶段VO2和VO2/Kg分别为913.06ml/min和14.10ml/min/kg,接近预备势V02和VO2/Kg的2.4倍,收势时VO2 (535.11ml/min)和VO2/Kg (8.26ml/min/kg)的1.6倍,预备势、自然走、收势和自然步行中的Rf、VE、VO2、VO2/HR的变化与VO2/Kg的变化趋势和幅度较为一致,具有性别差异,男性高于女性,各阶段VT、VE/VO、VE/VCO2较为稳定,仅有微小波动,VE/VO2、VE/VCO2没有明显的性别差异,VT有性别差异。2)免疫功能：在不配对和配对条件下,锻炼组CD3+T细胞百分比和绝对值均有高于对照组的趋势,但无统计学意义；不配对时锻炼组CD4+/CD8+显著低于对照组,配对时无显著性差异；CD4+CD25+T细胞百分比非常显著低于对照组,CD4+CD25+T细胞绝对值显著低于对照组；锻炼组和对照组CD19+比较无显著性差异；锻炼组CD(16+56)+在配对和不配对条件下有高于对照组的趋势,均值差别比较明显,但未见统计学显著性,变异系数为0.53;CD4+CD25+Tr与CD(16+56)+和淋巴细胞总数呈负相关。3)自由基代谢：锻炼组血清SOD、T-AOC和MDA在配对和不配对条件下都高于对照组；MDA和SOD之间呈正关联关系。4)静息代谢：锻炼组REE均值低于对照组,无统计学意义。5)生活质量：锻炼组生活满意度指数A得分显著高于对照组,生活满意度指数B得分非常显著高于对照组；锻炼组总体幸福感总分显著高于对照组,在精力、忧郁和快乐的心境、对情感和行为的控制三个分量表上的得分显著高于对照组；锻炼组在幸福感指数总分,总体情感指数得分,生活满意度问卷得分显著高于对照组。6)各指标间相互关系：CD3+与GWB、IWB呈正关联关系；未观察到免疫指标、自由基代谢指标、静息代谢指标间的关联。研究结论：1)自控锻炼属于中等强度的有氧运动,自控锻炼各阶段V02/HR的变化不能说明锻炼者的动脉血氧饱和度增加,因此无直接依据证明该锻炼方式的益处在于“大量吸氧”。2)癌症长期生存者CD19+B细胞仅占外周血淋巴细胞亚群的10.94%,CD3+和CD(16+56)+分别占62.81%和21.47%,提示癌症长期生存者的免疫功能仍以细胞免疫为主。锻炼组CD4+CD25+低于对照组,CD4+CD25+与CD(16+56)+和淋巴细胞总数呈负相关,提示自控锻炼增加了以NK细胞和T细胞介导的细胞免疫功能,降低了调节性T细胞对T细胞和NK细胞介导的细胞免疫和淋巴细胞总数量的抑制、下调作用。3)锻炼组MDA、SOD、GSH-Px均高于对照组,提示锻炼组自由基的生成和清除速度增快,代谢速率有所提高,但总体上氧化应激保持在动态平衡状态。4)参加自控锻炼的癌症长期生存者REE略低于对照组。5)自控锻炼提高了癌症生存者的主观幸福感水平,锻炼者的生活质量更高,更为幸福满足。6)研究发现免疫系统组分CD3+与主观幸福感量表GWB、IWB总分之间呈正性关联,推测自控锻炼通过对免疫系统和心理状态的直接作用和相互作用,共同影响癌症生存者的身心健康和生活质量。
参考文献：
[1]. 衰老的免疫学研究：自然衰老的免疫系统变化和氧化应激对免疫系统的影响[D]. 冯仁田. 中国协和医科大学. 2000
[2]. V_E干预D-半乳糖亚急性中毒拟衰老模型鼠免疫衰老实验研究[D]. 曹湘博. 吉林大学. 2006
[3]. 脱氢表雄酮与染料木素对老年大鼠抗氧化及脂代谢的调节作用[D]. 殷复建. 南京农业大学. 2012
[4]. “劳倦过度、房事不节”肾阳虚模型下丘脑—垂体—肾上腺皮质—胸腺轴的改变及分子免疫机制的研究[D]. 颜亭祥. 山东中医药大学. 2010
[5]. 紫山药多糖抗衰老活性及其机制研究[D]. 张丽梅. 中国农业大学. 2018
[6]. 希望Ⅱ号对烟草烟雾暴露诱导小鼠肺损伤的作用及其机理研究[D]. 彭金娥. 北京中医药大学. 2016
[7]. 滋阴补肾法对衰老大鼠免疫功能及凋亡蛋白酶的影响[D]. 凃璨. 湖北中医药大学. 2016
[8]. 不同模式低氧训练后大鼠的免疫应答及其相关机制研究[D]. 王竹影. 苏州大学. 2007
[9]. 针灸提高大鼠对疫苗的免疫效应及延缓衰老的实验研究[D]. 肖凌. 湖北中医药大学. 2012
[10]. 自控锻炼对癌症长期生存者的健康状况及生活质量影响的研究[D]. 汪继兵. 上海体育学院. 2010
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