（ 上海市同济大学附属肺科医院临床研究支持中心 200433 ）
【摘要】目的：探讨GADD45的单核苷酸多态性与肺癌病人的化疗与生存的关系。方法：在以一线铂类化疗方案的972例肺癌患者中对其GADD45的8个SNP位点进行检测。在可评估的肺癌患者中，分析GADD45的SNP位点与铂类化疗结果的关系。结果：在不同病理分型的肺癌患者中选择含紫杉醇类或不含紫杉醇类化疗方案，GADD45的rs3783468和rs681673以及GADD45B的rs14384的基因多态性对总生存期有显著影响（P<0.05）。结论：临床上运用对GADD45的SNP分型，对肺癌患者进行有目的选择化疗方案治疗，能够提高部分肺癌患者的总生存期。
【关键词】肺癌、GADD45、SNP、临床效果
肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤，而且在癌症死亡率中呈逐渐上升趋势[1-2]。由于肺癌早期检出困难和症状不明显，导致患者发现时已是晚期，因此对于晚期肺癌的治疗一般以化疗为主。现行的肺癌化疗多以基础用药加铂联合化疗，根据不同的病理分型来决定化疗方案。虽然现行以铂类为基础的化疗方案是治疗晚期肺癌的基本策略，但缺乏足够的生物标志物来提高化疗的效果。对ERCC1[3],RRM1[4]，XPD[5]等基因的多态性与铂类联合化疗关系的研究显示，这些基因的的基因多态性与化疗疗效有一定的关联性。但基本都是以某个易突变的位点为基础来研究或者研究样本量较小，其多态性对化疗疗效的影响仍然有争议。GADD45家族蛋白在DNA修复、细胞周期、细胞凋亡中以及各种压力刺激如紫外辐射、氧化应激、致癌压力下的细胞内去甲基化过程中发挥重要的调节作用[6-9]。更有研究显示在肺癌患者中GADD45的mRNA表达量在肿瘤内要比癌旁低大约10倍[10],提示我们GADD45在肺癌的发生，发展和治疗中起着重要的作用。鉴于DNA修复基因GADD45在肺癌中的重要作用，我们研究了GADD45家族中的GADD45A和GADD45B的SNP位点，对SNP位点和肺癌病人的生存期和治疗方案之间的关系进行了探讨。
1.资料和方法
1.1 病例资料
选取在2005年5月至2010年1月在临床诊断中已确诊为肺癌的患者972例，其临床分期为IIIa-IV期。在此项研究中确定：所有的病例年龄均大于18岁；在至少一个病灶中的病理结果可确定为肺癌；一线治疗方案为含铂类的化疗方案；5年内除肺癌外未患有其他恶性肿瘤；且在行化疗前都进行了血常规、肾功能、肝功能和心血管功能检查，符合化疗指标。
1.2 化疗方案
所有入组患者都接受一线铂类为基础的化疗方案：
顺铂75 mg/m2或卡铂每21天治疗周期的第1天第8天的给药与
①诺维本25 mg/m2每21天治疗周期的第1天第8天联合给药组合
②或吉西他滨1250 mg/m2每21天治疗周期的第1天第8天的给药组合
③或紫杉醇175 mg/m2每21天治疗周期的第1天给药组合
④或多西他赛75 mg/m2每21天治疗周期的第1天给药组合，
即NP、NC、GP、GC、TP、TC、DP、DC。
1.3 疗效判定标准
结束治疗后，以实体肿瘤的疗效评价标准(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors-RECIST)1.0版为评判标准评价疗效：
①完全缓解（CR）：肿瘤完全消失并维持4周②部分缓解（PR）：肿瘤缩小50%以上或以上（但未达到CR），维持4周③疾病稳定（SD）：肿瘤面积减少不到50%或增大未超过25%④疾病进展（PD）:肿瘤增大25%或出现新病灶。
1.4 统计学分析
运用SPSS20.0统计软件对本次数据进行处理，运用百分率（%）表示计数资料，以P<0.05表示差异有统计学意义。
1.5 SNP位点选择及基因分型
在SNP DATABASE中初步筛选。其中包括GADD45α的rs581000，rs3783468，rs681673位点以及GADD45β的rs3795024，rs3729535，rs7354，rs14384 ，rs3783501位点。
1.6 标本处理
使用QIAamp DNA Maxi Kit试剂盒提取入组病例的外周血DNA，统一定量后在iSelect HD Bead-Chip(ILLunina)上做基因分型，其数据采用标准为：call rate>0.95;MAF>0.05; GenCall score>0.2。
2.结果
入组病人共972例，病理分期为III期和IV期，均接受了6个周期的一线铂类化疗。其中男性病人690例，女性病人282例。在所选的8个SNP位点中，rs3795024由于MAF不符合未纳入结果分析。同时治疗方案分为非紫杉醇治疗组（NP/NC/GP/GC）和含紫杉醇治疗组（TP/TC/DP/DC）
通过SPSS20.0分析得出：
⑴使用非紫杉醇加铂类治疗方案中非腺癌病例组的rs14384等位基因为AA的总生存期也要高于等位基因是GG/AG（P=0.023）；鳞癌病例组的rs3783468等位基因为GG的总生存期也要高于等位基因是AA/AG（P=0.006）
⑵使用含紫杉醇加铂类治疗方案的中rs681673等位基因为AG的总生存期也要高于等位基因是AA/GG的病人（P=0.008）；rs3783468等位基因为GG的总生存期也要高于等位基因是AA/AG的病人（P=0.005）。
上述3个SNP的等位基因在疾病无进展生存期中无显著差异。
3.讨论
GADD45基因编码一组18kDa蛋白，其蛋白家族由GADD45A、GADD45B、GADD45G三个同源性非常高的蛋白组成。GADD45A基因定位于人染色体1p31.1-21.2上，主要受P53和BRCA1的调节，进而抑制细胞的转化和恶性肿瘤的进展。GADD45B位于人染色体19p13.3上，该区域是反转录病毒的整合位点，可导致多种恶性肿瘤的发生。而GADD45G在目前研究上尚未发现基因发生突变的现象存在。尽管GADD45基因在肿瘤产生和发展时并未发现有很高的突变频率，但是其表达量在不同恶性肿瘤和细胞系中异常，如肝癌[11]、乳腺癌[12]、垂体瘤癌等[13]。
在治疗晚期肺癌的一线方案选择中，常选择含铂的两药联合方案。其作用机理为阻断细胞周期进程、或引起DNA双链断裂和引起细胞凋亡。不同的组织病理分型（如腺癌，鳞癌，鳞腺癌）对于不同类型的铂类治疗方案疗效各有不同。因此，基于此项研究中，我们考虑GADD45的基因多态性可能对铂类化疗的疗效有影响，并可作为有价值的分子标志物。为了解GADD45的基因多态性与晚期肺癌的化疗疗效，我们评估了972例晚期肺癌病人中GADD45家族的8个SNP位点。在这8个位点中，GADD45A的rs3783468和rs681673以及GADD45B的rs14384的基因多态性与总生存期显著相关。
尽管以铂类为基础的化疗方案在肺癌晚期治疗中占主导地位，但其有效性并非令人满意。因此，通过研究与铂类为基础的化疗相关的分子标志物GADD45，能够有针对性的选择化疗方案，切实提高化疗疗效。
[1] Torre LA1, Siegel RL1, Jemal A2. Lung Cancer Statistics. Adv Exp Med Biol. 2016;893:1-19.
[2] Murray CJ, Atkinson C, Bhalla K,et al. The state of US health, 1990-2010: burden of diseases, injuries, and risk factors. JAMA. 2013 Aug 14;310(6)
[3] Lee SY1,2, Hong MJ3,4, Jeon HS3,et al. Functional intronic ERCC1 polymorphism from regulomeDB can predict survival in lung cancer after surgery. Oncotarget. 2015 Sep 15;6(27):24522-32
[4] Yuan ZJ1, Zhou WW, Liu WAssociation of GSTP1 and RRM1 Polymorphisms with the Response and Toxicity of Gemcitabine-cisplatin Combination Chemotherapy in Chinese Patients with Non-small Cell Lung Cancer. Asian Pac J Cancer Prev. 2015;16(10):4347-51
[5] Li P1, Wang YD2, Cheng J,et al. Association between polymorphisms of BAG-1 and XPD and chemotherapy sensitivity in advanced non-small-cell lung cancer patients treated with vinorelbine combined cisplatin regimen. Tumour Biol. 2015 Dec;36(12):9465-73.
[6] Balliet AG1, Hatton KS, Hoffman B,et al．Comparative analysis of the genetic structure and chromosomal location of the murine MyD118 (Gadd45beta) gene. DNA Cell Biol. 2001 Apr;20(4):239-47.
[7] Koonin EV．Cell cycle and apoptosis: possible roles of Gadd45 and MyD118 proteins inferred from their homology to ribosomal proteins．J Mol Med (Berl). 1997 Apr;75(4):236-8.
[8] Zhang W1,Hoffman B, Liebermann DA.Ectopic expression of MyD118/Gadd45/CR6 (Gadd45beta/alpha/gamma) sensitizes neoplastic cells to genotoxic stress-induced apoptosis. Int J Oncol. 2001 Apr;18(4):749-57.
[9] Li Z1, Gu TP1, Weber AR ,et al Gadd45a promotes DNA demethylation through TDG. Nucleic Acids Res. 2015 Apr 30;43(8):3986-97
[10]Higashi H1, Vallb?hmer D, Warnecke-Eberz U , et al. Down-regulation of Gadd45 expression is associated with tumor differentiation in non-small cell lung cancer. Anticancer Res. 2006 May-Jun;26(3A):2143-7
[11] Higgs MR1, Lerat H, Pawlotsky JM. Downregulation of Gadd45beta expression by hepatitis C virus leads to defective cell cycle arrest. Cancer Res. 2010 Jun 15;70(12):4901-11.
[12] Tront JS1, Willis A, Huang Y,et al. Gadd45a levels in human breast cancer are hormone receptor dependentJ Transl Med. 2013 May 24;11:131
[13] Binse I1, Ueberberg B2, Sandalcioglu IE,et al. Expression analysis of GADD45γ, MEG3, and p8 in pituitary adenomas. Horm Metab Res. 2014 Aug;46(9):644-50.
论文作者:张颉 唐亮
论文发表刊物:《医师在线》2016年1月第1期
论文发表时间:2016/5/19
标签：肺癌论文; 多态性论文; 基因论文; 紫杉醇论文; 疗效论文; 方案论文; 位点论文; 《医师在线》2016年1月第1期论文;