阳宁
衡阳市南华大学附属第二医院 湖南衡阳 421001
【摘 要】目的：分析microRNAs在前列腺癌组织中的表达。方法：选取我院2014年1月～2015年1月良性前列腺增生手术切除石蜡标本50例、前列腺癌切除石蜡标本50例，检测其中miR-98、let-7d、let-7g的表达情况，探讨用于前列腺癌早期诊断和分类分级的可能性。结果：与良性前列腺增生相比，miR-98、let-7d、let-7g在前列腺癌组织中的表达例数明显减少，差异具有统计学意义（P＜0.05）。let-7d、let-7g在前列腺癌组织中的表达例数与患者年龄、AJCC/UICC分期、PSA水平无关，差异不具有统计学意义（P＞0.05），与患者病理组织分型有关，差异具有统计学意义（P＜0.05）。此外，miR-98在前列腺癌组织中的表达例数与患者病理组织分型、AJCC/UICC分期有关，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：miR-98、let-7d、let-7g的表达情况可在一定程度上反映前列腺癌的进展，可能可以作为一项重要指标，用于前列腺癌早期诊断和预后评估。
【关键词】前列腺癌；microRNA；miR-98；let-7d；let-7g
Abstract：Objective：to analyze the expression of microRNAs in prostate cancer. Methods：50 cases of benign prostatic hyperplasia and 50 cases of prostate cancer were selected from January 2014 to January 2015 in our hospital. The expression of let-7d，let-7g and miR-98 were detected，and the possibility of early diagnosis and classification of prostate cancer was discussed. Results：the expression of let-7d，miR-182 and miR-96 in prostate cancer tissues was significantly decreased，and the difference was statistically significant（P < 0.05）. The expression of let-7d and let-7g in prostate cancer tissues had no statistical significance（P > 0.05），and the difference was statistically significant（P < 0.05）. In addition，the expression of miR-98 in prostate cancer tissues was related to the pathological type，AJCC/UICC staging，and the difference was statistically significant（P < 0.05）. Conclusion：the expression of let-7d，let-7g and miR-98 can reflect the progress of prostate cancer to a certain extent，and may be used as an important index for early diagnosis and prognosis of prostate cancer.
Keywords：prostate cancer；microRNA；miR-98；let-7d；let-7g
前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤，近年来，其发病率逐渐增高。前列腺癌的发生、发展受多因素多过程的影响[1]。miRNA是一类小分子单链RNA，约18～24个核苷酸，研究显示许多肿瘤发生发展过程中都存在miRNA表达水平的改变[2，3]。本研究采用PCR技术检测BPH和前列腺癌组织中miR-98、let-7d、let-7g的表达情况，并进一步分析前列腺癌组织中6种miRNAs表达的相关性，以期为前列腺癌的早期诊断提供新的参考指标.
1资料与方法
1.1一般资料 选取我院2014年1月～2015年1月良性前列腺增生手术切除石蜡标本50例、前列腺癌切除石蜡标本50例。所有标本经l0%的福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚度切片，HE染色。其中，前列腺癌标本组织学类型均为腺癌，石蜡标本均在化疗前采集制作。前列腺癌切除患者年龄52～79岁，平均73.34±4.52岁；体重48～72㎏，平均61.35±6.70㎏。良性前列腺增生手术标本患者年龄53～80岁，平均74.02±5.11岁。体重50～74㎏，平均63.77±6.91㎏。两组一般资料均无无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。
1.2方法（1）DNA提取：采用大连宝生物工程有限公司生产的石蜡切片DNA提取试剂盒，按照说明书规范操作。操作步骤为：将1～3枚4μm厚度的石蜡包埋组织放入1.5ml Microtube 中，加入颠倒混匀的DEXPAT试剂0.5ml。盖上Microtube盖，100℃加热处理10分钟后，以12，000rpm的离心速度，4℃的离心温度离心10分钟。用移液枪吸取水层，采用紫外分光光度计检测提取与纯化得到的DNA片段的浓度与纯度，检测标准为：RNA在OD260处有显著吸收峰，OD260/OD280比值在1.9-2.1范围内。（2）PCR反应：PCR反应：采用针对miR-98、let-7d、let-7g基因序列的引物，由美国Anderson有限公司合成，见表1。
反应体系包括PCR缓冲液2μl，10.0mmol/L dNTP 0.8μl，基因上下游引物各0.4μl，模板DNA 1μl，Taq酶0.15μl，加水至总体积20μl。循环条件：先95℃预变性10min，然后以95℃变性15sec，60℃退火延伸60sec的循环条件作40个循环，最后40℃延伸10min。③基因多态性测定：采用适当的限制性内切酶消化PCR产物后进行电泳分析，电泳条件为琼脂糖浓度1%，电压200V，30min，通过观察条带的反应情况确定相关基因多态性。
1.3统计学分析 所有数据均采用SPSS19.0统计软件对本研究相关数据进行统计学分析，计数资料用卡方检验，采用Fisher确切概率法，以P＜0.05作为差异具有统计学意义的标准。
2.2 miRNAs的表达与临床各项参数的关系：见表3。由表中数据可见，let-7d、let-7g在前列腺癌组织中的表达例数与患者年龄、AJCC/UICC分期、PSA水平无关，差异不具有统计学意义（P＞0.05），与患者病理组织分型有关，差异具有统计学意义（P＜0.05）。此外，miR-98在前列腺癌组织中的表达例数与患者病理组织分型、AJCC/UICC分期有关，差异具有统计学意义（P＜0.05）。
3讨论
前列腺癌特异抗原（PSA）作为前列腺癌的早期检测和预后评估的指标广泛应用于临床，但实际操作中发现，其敏感性和特异性并不理想[4]。寻找一种高敏感性、高特异性的评价指标一直是前列腺癌研究的热点。miRNA是一类小分子RNA，通过参与调控基因表达，在细胞生长、分化、凋亡甚至癌变中发挥了重要作用[5-7]。目前已知一半以上的人类miRNA基因位于肿瘤相关基因区域，有研究证明miRNA的表达情况可在一定程度上反映肿瘤进展和分化的状态，并有研究利用miRNA成功培养出低分化肿瘤[8-10]。近年来，人们对存在与前列腺癌和良性前列腺增生组织中的miRNA进行监测，结果提示某些miRNA（如miR-98等）可能可以作为特异性标记物，应用于前列腺癌的鉴别诊断和分类分级[11]。miRNA的检测和功能分析不仅可以辅助前列腺癌的早期诊断，也可以辅助我们理解前列腺癌的发生发展过程。
本研究通过对50例前列腺癌和50例良性前列腺增生组织的石蜡标本进行miR-96、let-7d、let-7d的表达情况检测，探究miR-96、let-7d、let-7d对前列腺癌诊断和预后判断的意义。miR-98、let-7d、let-7g分别位于人类性染色体X、第9号染色体、第3号染色体，隶属于let-7基因家族。而let-7家族编码的miRNAs是第一个被发现的致癌miRNA，通过调节癌基因ras表达发挥作用。本研究结果显示，相比于良性前列腺增生组织，miR-98、let-7d、let-7g在前列腺癌中的表达水平显著降低，差异具有统计学意义（P＜0.05），与国外相关研究结果相符，提示前列腺癌进展过程中let-7基因家族（如miR-98、let-7d、let-7g等）发挥了抑癌基因的作用。此外，本研究通过进一步分析miR-98、let-7d、let-7g的表达与前列腺癌临床各项指标之间的关系，结果发现miR-98、let-7d、let-7g与病理组织类型均具有相关性。其中，miR-98还与前列腺癌的临床分期具有相关性。这提示miR-98、let-7d、let-7g应用于前列腺癌的鉴别诊断和分类分级具有一定的价值。
综上所述，miR-98、let-7d、let-7g的表达情况可在一定程度上反映前列腺癌的进展，可能可以作为一项重要指标，用于前列腺癌早期诊断和预后评估。
参考文献：
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论文作者:阳宁
论文发表刊物:《航空军医》2016年第11期
论文发表时间:2016/7/25
标签：前列腺癌论文; 组织论文; 统计学论文; 石蜡论文; 基因论文; 标本论文; 患者论文; 《航空军医》2016年第11期论文;