邓飞[1]2003年在《异种脱细胞基质支架制备及其移植修补膀胱的实验研究》文中认为组织工程和再生医学是人类治疗组织、器官功能衰退和缺失的两项最新技术。这两项技术的基础之一是需要适宜的细胞支架。许多研究表明，最佳的支架是该组织的天然细胞外基质(ECM)。同种异体的同一组织之间ECM的构成和成分是相同的；某些不同种群之间，例如：猪与人类许多组织、器官的ECM成分和结构是相近的。因此，制备源于猪的天然ECM作为支架进行异体移植替代修复人类组织、器官缺损是细胞生物基质研究的重要方向。 本项课题以猪的组织为原料研究了两种脱细胞基质的制备及制作支架的方法，一种是真皮脱细胞基质(DAM)支架，另一种是膀胱脱细胞基质(BAM)支架。DAM支架使用了胰蛋白酶或Dispase溶液处理后，十二烷基磺酸钠(SDS)或曲拉通-100(Triton X-100)溶液洗涤后进行制作。BAM支架是在常用的Meezan方法基础上进行了改进，加入了RNAse配合DNAse溶解洗脱细胞。经过病理切片HE染色，光镜观察及其它检验证实这两种脱细胞基质支架无细胞及细胞碎片残留，只留下ECM成分，免疫组织化学检查证实其不具有明显的抗原性，能够满足异体移植的要求。 以研制的这两种脱细胞基质支架作为膀胱补片，我们进行了兔膀胱缺损异种移植修补的实验研究。通过检查膀胱组织再生情况和新生膀胱的功能，研究的主要目的是检验脱细胞基质支架能否作为有效的细胞支架用于膀胱组织的再生修复和重建。我们的研究中采用膀胱部分切除术制作兔子膀胱缺损的实验动物模型，将动物模型兔子分为3组进行了膀胱修补手术：实验组1为DAM支架组；实验组2为BAM支架组；实验组3为对照组，只进行单纯膀胱部分切除术。实验结果显示，在手术后的3月时间内，3组兔子的术后反应情况、生长情况、排尿情况及化验检查包括血常规、尿常规、电解质、肾功能均无明显差异。统计学分析兔子的膀胱容量变化情况，以α=0.05检验水准进行方差分析和q检验。统计结论为实验组的膀天津医科大学硕士学位论文2以】)级泌尿外科专业胧容量术后大于术前，对照组的膀胧容量术后小于术前;两实验组之间相比术后膀胧容量无统计学差异性，术后两实验组膀肤容量均大于对照组，有显着的统计学差异性。 按实验设计的不同时间处死兔子，解剖膀胧标本，观察膀胧组织与基质支架结合处的情况，可见新生的细胞、组织从植人支架的边缘向中心生长，随时间逐渐会合，形成新生的膀胧组织，同时支架逐渐降解、吸收被重建的膀胧组织替代，膀胧完成修复重建。实验利用病理切片HE染色及免疫组织化学方法检查显示了膀肤各层组织随时间再生修复重建的过程。镜下观察对照组兔子膀胧修复过程表现为普通的手术切口愈合修复过程，实验组与对照组有所不同，但在两实验组之间无明显差异。实验组兔子膀胧的修复过程:1周时，基质支架边缘区域已有移行L皮细胞和平滑肌细胞长人，其腔表面约有一半覆盖泌尿上皮，支架中心区域未见细胞，支架与膀胧组织结合处出现红细胞、白细胞和单核细胞浸润。2周时，支架边缘区域已有大量移行上皮和平滑肌细胞再生，移行上皮开始分层，覆盖在腔表面上，支架中心区域仅见少量细胞。3周时，支架边缘分层的移行上皮细胞继续分化，增殖，支架中心区域细胞增多。1月时，支架边缘区域基本形成多层移行上皮细胞结构，与正常的泌尿上皮细胞差异不大，支架中心区域长满移行上皮细胞，只有少量白细胞和淋巴细胞。2月时，植入的基质支架已修复成正常的膀胧壁组织结构，支架边缘区域细胞密度较高，趋向中心减少。3月时，膀肤各层组织基本完全再生，基本完成膀胧的修复重建过程。 实验利用免疫组织化学染色方法进行了平滑肌a一actin(a一肌动蛋白)染色，检查膀肤平滑肌和血管平滑肌的生长情况。当植入1周时，有平滑肌细胞长人基质支架，但杂乱无方向，开始形成血管。2周时，平滑肌细胞再生开始有方向性，血管形成明显，可以检测到a一actin。3周时，平滑肌细胞开始分化、组织、排列，血管数量增加。1月时，平滑肌细胞继续增殖，分化，成组排列，肌纤维稳定，血管稳定、逐渐增粗，血管壁逐渐平衡分布。2月时，平滑肌细胞大量再生，组织化，成组密集排列，肌纤天津医科大学硕士学位论文2仪刃级泌尿外科专业维更加稳定，方向性生长，肌纤维束的直径向支架中心方向减小，血管数量开始减少，但血管内径增大，血管壁更加平衡分布生长，血管形成在基质支架边缘和中心区域表现明显。3月时，平滑肌立体重建，再生的平滑肌类似与正常的平滑肌，出现正常的供应血管，并且支架内血管分布较多。 病理切片及免疫组织化学检查显示DAM支架组、BAM支架组、实验对照组的3组兔子都能成功地完成膀胧组织再生修复重建。膀胧修复重建后，膀胧容量及修复时间经统计学对比，猪DAM支架组和猪BAM支架组二者之间并无显着性差异。因此，猪DAM支架和猪BAM支架都可以在异种移植中修补膀胧缺损，进行膀胧扩大成形术，完成膀胧组织的修复重建和膀胧功能的替代。 但是，与猪BAM支架相比，猪DAM支架更具有其特有的优点:来源广泛，费用低廉，制备方法简单，脱?
李泸平[2]2016年在《组织工程化尿道构建及尿道缺损修复的实验性研究》文中指出研究背景及目的先天性尿道下裂以及尿道外伤、肿瘤、尿道狭窄等疾病的发生目前有逐年增高趋势,其有效解决办法还依赖于外科手术治疗。传统的外科手术处理,多应用自身包皮、阴囊组织原位修复,或者应用颊粘膜、膀胱粘膜等自体组织移植修复处理。但明显的缺陷就是容易并发术后尿道瘘、尿道再狭窄、尿道结石等,且对于再次手术、尿道缺损较长的病例,容易因自身修复材料不足而令临床医生产生治疗上的无奈。随着医学技术和相关学科的发展,组织工程学首先在骨科及皮肤科等领域出现并取得了一定的研究进展。这也为目前面临的尿道修复材料来源难题提供了一种全新的解决思路。目前国内外学者已经进行了该领域的实验性研究及少部分临床应用的尝试,取得了一定成就,也不同程度地暴露出了一些问题和弊端。特别是在种子细胞的选择方面,仍存在不少争议。研究发现,骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)具有多向分化潜能,可定向分化为外胚层的神经元和神经胶质细胞、中胚层的成骨细胞和脂肪细胞、内胚层的肝细胞等。BMSCs具备与ECM的良好生物相容性,在组织工程研究中得到了广泛的应用,并首先在组织工程骨组织的构建试验中取得了很大的成功。另有研究证实,干细胞与尿道上皮细胞的直接接触可以诱导其向尿路上皮定向分化,但具体机制尚不明确。BMSCs的体外分离与培养主要采用以下几种方式:(1)贴壁筛选法;(2)密度梯度离心法;(3)免疫磁珠筛选法;(4)流式细胞仪分选法。尿路上皮细胞是较难培养的上皮细胞之一,既往人们曾经认为尿路上皮细胞会自然衰老凋亡,正常的尿路上皮细胞可以在体外存活,但时间短,很难在体外培养、传代,且无证据表明细胞有数量的增加。随着细胞培养技术的不断完善和细胞培养条件的优化,尿路上皮细胞的培养研究逐步展开并不断获得成功。动物实验表明,膀胱来源的尿路上皮细胞可在体外培养传代至3~12代。国外的研究随后证实,人膀胱移行上皮细胞的体外培养方面的研究也获得了成功。膀胱来源的尿路上皮细胞的分离方法有酶消化法、组织块法及刮削法3种。本实验拟通过应用干细胞(骨髓间充质干细胞)和成体细胞(尿路上皮细胞)联合脱细胞基质材料的体外培养,并应用于长段尿道缺损的修复研究。通过比较实验结果,以期寻找更为理想的种子细胞,进一步推动尿道组织工程的发展。方法1.种子细胞的制备、筛选及鉴定1.1骨髓间充质干细胞的制备、筛选与鉴定选取雄性新西兰白兔为实验对象,抽取双下肢骨髓,利用密度梯度离心法分离提取骨髓间充质干细胞,体外培养、扩增、传代。应用流式细胞仪检测细胞表面CD34、CD44的表达,鉴定确认为骨髓间充质干细胞。将其作为实验用种子细胞之一。1.2尿路上皮细胞的制备、筛选与鉴定以雄性新西兰白兔为实验动物,机械分离法及酶消化法分离提取膀胱黏膜组织中的尿路上皮细胞,进行体外培养、传代。应用免疫荧光法鉴定尿路上皮细胞表面特异性表达因子及标记物——细胞角蛋白-18(CK-18)与和尿溶蛋白-2(UP2)的表达水平,鉴定确认尿路上皮细胞,并作为另外一种实验用种子细胞。2.种子细胞—脱细胞基质材料的复合培养与标记2.1骨髓间充质干细胞(BMSC)—脱细胞基质的制备选取培养传代后已接近90%融合的第4代BMSC,加入含有0.2%5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)的无血清低糖DMEM溶液培养标记,然后应用移液器将制备好的细胞悬液均匀滴加到脱细胞基质粘膜面。联合培养制备复合材料备用。2.2尿路上皮细胞—脱细胞基质的制备选取传代培养后已接近90%融合的第4代尿路上皮细胞备用,0.2%5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)共同培养标记。应用移液器将制备好的细胞悬液均匀滴加到脱细胞基质粘膜面,联合培养制备复合材料备用。3.尿道缺损模型的制作与修复3.1尿道缺损模型的制作全麻下游离雄性新西兰白兔尿道,切除中段尿道长约3cm,人工制作尿道缺损动物模型,备用。3.2尿道缺损的修复56只雄性成年新西兰兔,应用随机数字法分组,分为4组,每组14只。具体分组及修复操作如下:A组(无细胞对照组)即:单纯应用异种脱细胞基质修复组。应用空白脱细胞基质材料直接制作管状尿道,用于尿道缺损模型的尿道修复与重建;B组(假手术组)即:假手术对照组。尿道缺损模型制作成功后,将尿道缺损后的两个尿道断端直接行端端吻合,恢复尿道连续性;C组(BMSCs组)即:BMSC复合异种脱细胞基质手术修复组。将BMSCs联合脱细胞基质材料联合培养后,用于尿道缺损模型的尿道修复与重建,作为实验组之一;D组(尿路上皮细胞组)即:为尿路上皮细胞复合脱细胞基质手术修复组。将尿路上皮细胞联合脱细胞基质材料联合培养后,用于尿道缺损模型的尿道修复与重建,作为另一实验组。结果1.BMSCs呈贴壁式生长,由短梭形逐渐演变为长梭形外观。应用流式细胞仪检测传代至第4代的BMSC,可见其表达CD44阳性,而CD34的表达则为阴性,符合间充质干细胞特征;2.尿路上皮细胞呈贴壁式生长,呈圆形、类圆形外观,逐渐融合形成铺路石样外观。免疫荧光实验结果显示所培养的细胞表达CK-18与UP2呈阳性;3.BMSCs及尿路上皮细胞接种后脱细胞基质材料透明度降低,细胞均呈集落样生长,形成网状结构。4.四组试验动物均全部存活,B组修复后恢复最为顺利,A组修复效果最差,C、D组实验动物观察至术后12周修复效果相当,经统计学检验处理,两组差异无统计学意义。结论1.成功分离获得BMSCs,操作简单且来源丰富,可作为尿道组织工程种子细胞备选;2.成功分离获得尿路上皮细胞,细胞数量多,浓度高,可作为尿道组织工程种子细胞备选;3.BMSCs及尿路上皮细胞均能在脱细胞基质材料上贴附生长,形成立体网状结构,可以作为尿道缺损替代修复材料;4.`BMSCs和尿路上皮细胞均可作为种子细胞应用于组织工程化尿道的构建和长段尿道缺损的修复。
周逸丹[3]2009年在《异种脱细胞基质材料在阴道重建及盆底修复中的动物实验研究》文中认为研究目的利用异种(猪皮、牛心包)来源的ATM组织工程补片,在实验动物中国小型实验猪体内建立阴道重建及阴道粘膜下生物补片埋植的动物模型,针对重建后人工阴道进行组织病理学评价,针对阴道埋植模型进行补片功能学、组织相容性及降解率评估。以期判定异种ATM补片是否为人工阴道重建及盆底修复手术的理想材料,从而为人工阴道成型术及盆底修复手术开辟新的道路。材料及方法1、动物实验：1)选取中国小型实验猪为实验动物,建立其阴道缺损及利用异种(B型牛心包来源和P型猪皮来源)来源的ATM补片重建新阴道模型,对小型猪围手术期、术后恢复情况以及人工重建之阴道的生长情况进行观察。2)另取一组中国小型实验猪,将其阴道粘膜前后壁全层分离,并在其内埋植ATM补片(B型牛心包来源和P型猪皮来源)和人工合成补片,制成叁种材料的在体模型,并对小型猪围手术期、术后恢复情况以及补片代谢情况进行观察。2、人工阴道重建模型组织学观察：1)阴道重建术后1周、2周、4周、6周、8周分别阴道全层取材,并以其中2只小型实验猪模型构建时手术中取材的正常阴道组织作为对照。2)取材后进行大体观察、HE染色、VG染色和免疫组化染色,从组织学水平动态评价新生阴道变化并运用免疫组化技术在蛋白水平对新生阴道粘膜及平滑肌进行鉴定。免疫组织化学染色标记层粘连蛋白Laminin单克隆抗体,证明新生阴道粘膜是否具有基底膜成分。3)在透射电镜下观察第1周时ATM补片的立体结构、胶原成分与周围反应的变化情况。3、在ATM补片和人工合成补片植入小型猪体内之前,在力学试验机上进行拉伸试验,考察叁种材料初始断裂强度和断裂伸长率等力学特性；4、盆底修复动物模型观察：1)B型、P型ATM组分别在术后2周、4周、6周、8周、12周,人工补片对照在分别在术后2周、4周、8周各1只取材,取材范围包括全层阴道2)取材后进行大体、HE染色、ET+VG染色,动态观察补片在动物体内分解代谢、与周围基质相互转化情况,以及补片周围粘膜反应。3)在透射电镜下观察6周和8周时残存ATM补片的立体结构与周围反应的变化情况。结果1、小型猪阴道重建手术建模成功,手术切口全部如期愈合,未见感染、血肿、排斥等并发症。在预期时间段取材,未见阴道狭窄、塌陷或补片脱出等,再生阴道组织生长良好。2、P型ATM补片重建之阴道与前人利用同种异体ATM补片进行阴道重建结果基本一致,但初始上皮化的时间略晚。P型ATM补片重建阴道2周观察时才出现清晰的新生粘膜,阴道3/4已有粘膜覆盖,上段1/4仍可见少量补片残存,测量新生阴道长度5cm；镜下可见上皮层数少,在2—4层左右,平坦,极向不明确。4—6周时阴道内腔继续上皮化,外观渐接近正常阴道粘膜,补片结构肉眼不可见；镜下可见粘膜上皮层数逐渐增多,极向恢复,接近正常上皮层结构。8周时新生阴道从外观上和组织形态学检查与正常阴道已无明显差异。上皮光谱角蛋白单克隆抗体AE1/AE3免疫组织化学染色证明阴道内腔有上皮组织存在,且从重建第2周开始出现阳性,其结果与HE染色观察结果一致。VG染色及平滑肌肌动蛋白单克隆抗体α-actin的免疫组织化学染色显示,自阴道重建后第4周,基质中就开始出现散在、分布不规则的平滑肌肌细胞,此后随着时间延长,渐形成排列均匀的肌束。3、VG染色在阴道重建第1周,可见残存补片结构以胶原纤维和弹性纤维为主；2周时,在阴道重建取材的基质中,胶原纤维排列疏松,之后随着时间推移,胶原纤维排列渐致密,8周时胶原纤维排列致密。基质中层粘连蛋白单克隆抗体Laminin内免疫组化染色阳性,提示新生阴道粘膜具有基底膜成分,证明了新生阴道粘膜的完整性。B型补片因其本身的质地韧且较厚实,无法与穴道四壁贴合紧密,血供不佳,影响补片的支架作用,故上皮化效果差,认为不适宜作为阴道重建之材料。4、在将材料植入动物阴道粘膜下层之前对叁种补片的力学特性进行了比较,结果显示：B型补片(牛心包来源)的平均抗拉强度为8.18MPa,平均断裂伸长率为60.93%；P型补片(猪真皮来源)平均抗拉强度为12.64MPa,平均断裂伸长率为7.66%；人工合成补片的平均抗拉强度为8.51MPa,平均断裂伸长率为98.82%。说明B型和P型补片在离体情况下,抗拉强度均与人工合成补片的水平相当。但P型补片韧性较差。5、小型猪阴道粘膜下ATM补片埋植模型建模顺利,手术切口全部如期愈合,未见感染、血肿、排斥等并发症,观察期内叁种补片均无补片脱出、阴道侵蚀等现象。6、大体和组织学观察B、P两型ATM补片在动物体内都存在降解,且大致规律相同,在体内均引起异物反应,这可能是造成降解的原因。电镜下可以观察到ATM补片与宿主基质交错排列,两侧新生肉芽丰富。与ATM材料相比,人工合成补片的反应较为均一,宿主组织较好的融合进入补片网眼之间,周围可见新生胶原纤维、成纤维细胞、血管和弹力纤维。结论1、进一步完善实验动物小型猪构建阴道缺损模型制备,首次在实验动物小型猪体内建立阴道内补片埋植模型,以此模拟动物阴道粘膜周围环境,得到补片及其周围结构变化的组织学证据。模型构建稳定可靠,证明实验用小型猪是进行妇科缺损性疾病研究的理想实验动物。2、从实验动物围手术期和术后短期观察结果以及新生阴道的大体和组织形态学观察,证明利用异种P型(猪皮)来源ATM材料进行阴道重建,可以取得与同种异体(人尸皮)来源ATM类似的效果,可以作为阴道重建术的修补材料,且因其制作原料为猪皮,来源广泛,价格低廉,具有广阔的应用前景。B型(牛心包来源)补片因其物理性质较为坚韧,难以与阴道造穴贴合,不适合作为阴道重建之材料。3、从植入动物体内之前对人工合成聚丙烯网片、P型猪皮来源及B型牛心包来源ATM补片进行拉力测试的结果分析：B型(牛心包)、P(猪皮)型ATM补片的早期抗强度与人工合成补片水平相当,但P型补片韧性较差。4、在术后最长3个月的观察期内,大体和组织形态学证据表明：异种ATM补片周围存在异物反应,且呈明显降解,远期会造成补片生物力学的消减,是导致术后复发率高的原因；人工合成补片与宿主基质容受良好,无代谢痕迹。因此,作为盆底修复手术的材料,人工合成补片更有优势,而ATM补片需对其降解率进行调整才能适应修复要求。
高长华[4]2012年在《异种脱细胞真皮基质修复结膜缺损的实验研究》文中指出目的观察异种（鼠）脱细胞真皮基质作为移植材料修复兔结膜缺损的效果，探讨异种脱细胞真皮基质应用于结膜缺损修复的可行性。方法60只健康新西兰大白兔随机分为实验组(n=30)和对照组(n=30)。制备结膜缺损模型，游离去除实验兔术眼眼球上方的部分球结膜、筋膜，面积约10mm×8mm。实验组和对照组分别移植异种（鼠）脱细胞真皮基质植片和同种异体巩膜植片。术后大体观察植片变化及结膜修复情况；于术后1周、2周、4周、8周、12周采集实验兔耳动脉血，离心后行酶联免疫吸附法检测血清白介素-2（IL-2）、白介素-10（IL-10）浓度，同时取移植区组织行HE染色光镜下观察植片组织学变化。结果实验组和对照组植片均存活，植片表面结膜上皮生长，实验组和对照组结膜缺损修复时间分别为16.330.77天、15.780.88天，两组时间差异无统计学意义(P=0.056)，术后无睑球粘连、无结膜囊狭窄。组织学检查显示实验组术后2周植片细胞浸润较明显，同时新生血管长入；对照组术后1周植片大量细胞浸润。术后12周异种脱细胞真皮基质植片被重建，而异体巩膜植片则被逐渐吸收。比较分析术后1周、2周、4周、8周、12周实验组与对照组外周血清IL-2、IL-10浓度，差异均无统计学意义（Pa1=0.822、Pa2=0.405、Pa3=0.591、Pa4=0.898、Pa5=0.986、Pb1=0.880、Pb2=0.394、Pb3=0.883、Pb4=0.816、Pb5=0.603）；实验组术前及术后外周血清IL-2、IL-10浓度无明显变化，差异无统计学意义（P1=0.825，P2=0.717）。结论异种脱细胞真皮基质免疫原性低，血管化快，组织相容性好。采用异种脱细胞真皮基质作为结膜缺损修复材料，可支持结膜生长，无睑球粘连，无结膜囊狭窄。异种脱细胞真皮基质可能成为一种理想的结膜缺损修复移植材料。
张敬坤[5]2016年在《脱细胞基质材料复合脂肪间充质干细胞构建大鼠组织工程阴道的研究》文中研究表明第一部分:猪SIS、UBM和AVM的制备和检测目的:摸索制备猪SIS、UBM和AVM的有效方法,并对比其生物力学性能和生长因子含量。方法:应用物理、化学和酶学相结合的方法制备猪SIS、UBM和AVM,而后通过HE染色、DAPI染色和DNA含量及片断大小的分析评估脱细胞方法是否有效。通过拉伸试验对比其生物力学性能、ELISA法对比其生长因子含量。结果:应用物理、化学和酶学相结合的方法,我们成功制备了脱细胞基质材料SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk,它们在组织结构、生物力学和生长因子含量上均存在一定的差异。5%过氧乙酸在增加材料孔隙率的同时,也降低了材料的生物力学性能,并大大降低了材料的生长因子含量。结论:应用物理、化学和酶学相结合的方法可成功制备SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk六种脱细胞基质材料。第二部分:大鼠脂肪干细胞的分离、培养和鉴定及脱细胞基质材料的生物相容性目的:建立一套分离培养大鼠ASCs的稳定的培养方法。评估SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk六种脱细胞基质材料的生物相容性。方法:应用0.1%Ⅰ型胶原酶消化法分离培养大鼠腹股沟处ASCs,并应用流式检测其细胞表面标记物,成脂成骨定向诱导分化检测其多向分化潜能。应用直接接触MTT定量检测法和激光共聚焦显微镜观察细胞形态的定性检测方法对六种支架材料进行体外细胞毒性实验。应用皮下移植,组织学观察法对六种支架材料进行体内相容性检测。结果:应用酶消化法成功分离培养了大鼠腹股沟处ASCs,其表面标记物的表达符合ASCs的表达,具有成脂和成骨分化的潜能。ASCs在六种支架材料上生长状态良好,打孔材料上的细胞生长优于未打孔材料,SISk、AVMk和AVM的促细胞生长状况最好。皮下移植试验也显示六种支架材料均具有良好的生物相容性。结论:应用酶消化法可成功分离培养大鼠腹股沟处ASCs。SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk六种脱细胞基质材料均具有良好的生物相容性,以SISk、AVMk和AVM最优。第叁部分:不同脱细胞基质材料构建大鼠阴道的比较目的:构建大鼠阴道部分切除手术模型。验证SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk能否成功构建组织工程阴道,并对其进行比较。方法:通过切除大鼠全子宫及部分阴道组织构建大鼠阴道部分切除手术模型。应用SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk对其进行组织工程阴道重建,并利用大体形态观察、一般微观形态观察及免疫组化方法对新阴道进行形态学评估;应用组织浴槽法对新阴道进行功能学评估。结果:应用SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk可成功构建大鼠组织工程阴道。打孔支架材料的形态学评估优于非打孔支架材料。SISk组、UBM组、UBMk组、AVM组和AVMk组对药物的收缩和舒张作用要强于SIS组。AVMk组无论从形态学还是功能学来说均优于其他组。结论:SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk六种脱细胞基质材料均可成功构建大鼠组织工程阴道。AVMk构建的组织工程阴道形态结构和功能最好。第四部分:脂肪间充质干细胞复合AVMk构建大鼠组织工程阴道目的:构建大鼠阴道全切手术模型。验证ASCs复合AVMk构建的大鼠组织工程阴道是否优于单纯应用AVMk。方法:通过阴式切除大鼠全阴道构建大鼠阴道全切手术模型。应用AVMk复合或不复合ASCs构建大鼠组织工程阴道。并利用大体形态观察、一般微观形态观察对新阴道进行形态学评估;应用免疫荧光方法检测移植ASCs的增殖分化作用;应用组织浴槽法对新阴道进行功能学评估。结果:应用AVMk复合或不复合ASCs均可成功构建大鼠组织工程阴道。ASCs可分化为肌细胞、成纤维细胞、神经细胞及雌激素受体表达细胞,可能分化为血管内皮细胞,促进组织的再生。AVMk复合ASCs构建的组织工程阴道无论从形态学还是功能学来说均优于未种细胞组。结论:ASCs通过直接分化作用可促进组织工程阴道的重建。
杜昆峰[6]2016年在《脂肪干细胞联合血管内皮细胞修复兔尿道缺损的实验研究》文中研究表明研究背景先天性尿道下裂、尿道损伤、尿道狭窄等是泌尿外科常见疾病,其有效解决办法仍然依赖于外科手术治疗,而尿道成形及重建术是主要的治疗方式。尿道成形术及重建术种类较多,目前将近有300余种,并且众多学者和医学工作者还一直在对其进行改良和创新。然而,对于长段尿道缺损、尿道狭窄及复杂型尿道损伤的患者而言,术后出现尿瘘、尿道狭窄等并发症的情况还仍然较高,成为令泌尿外科医师颇为头疼的问题。相关研究表明,术后尿道的血液供应情况与上述并发症的发生也存在的一定的联系。随着组织工程技术和干细胞技术的发展,理想的尿道修复支架材料和良好的种子细胞在基础研究及临床上取得了令人满意的成果。脂肪干细胞(Adipose derived stem cell,ADSCs)来源较广泛、取材方便、再生能力较强且具有向骨组织、软骨组织、心肌组织及上皮组织分化的潜能等优点,使其在组织工程领域种子细胞的研究中逐渐成为众多研究者研究的热点。同时,血管内皮细胞(Vascular endothelial cell,VEC)是一种多功能的细胞,位于血管内壁,许多机体的发病过程均有其参与。大量动物实验及临床资料表明,VEC在改善机体缺血部位和损伤部位的血供方面有着得天独厚的优势。近年来,ADSCs和VEC分别单独联合支架材料用来修复尿道的研究报道逐渐增多,且取得了一定的成果。然而“脂肪干细胞联合血管内皮细胞修复兔尿道缺损”的文献尚未见报道。研究目的探讨应用“脂肪干细胞(ADSCs)和血管内皮细胞(VEC)体外共培养,联合脱细胞基质材料构建人工尿道”修复兔尿道缺损的效果。方法1.种子细胞的获取1.1体外分离、培养、扩增兔脂肪干细胞,并利用流式细胞仪进行鉴定;1.2血管内皮细胞的提取、培养及鉴定;1.3 ADSCs与VEC进行共培养。2.分别将ADSCs、VEC以及二者共培养细胞分别与脱细胞基质结合,构建组织工程化尿道。3.将60只雄性成年新西兰兔随机数字法分为5组,分别将其阴茎腹侧尿道制作成缺损长度为2.0cm的动物模型。A组(无细胞对照组)即:单纯应用异种脱细胞基质修复组。B组(假手术组)即:尿道缺损模型制作成功后,将尿道缺损后的两个尿道断端直接行端端吻合;C组(ADSCs组)即:脂肪干细胞复合异种脱细胞基质手术修复组;D组(VEC组)即:血管内皮细胞复合脱细胞基质手术修复组;E组(ADSCs与VEC共培养组)即:ADSCs与VEC共培养后复合异种脱细胞基质手术修复组。4.术后于第1W、2W、4W、12W分别取A、B、C、D、E组实验动物的重建尿道组织,行组织学及免疫组化观察分析。5.术后12W时分别对各组实验动物行逆行尿道造影及尿动力学检查。结果1.体外培养、扩增的ADSCs为梭形。应用流式细胞仪检测表型CD44、CD105阳性,而CD34阴性,符合间充质干细胞特征;VEC原代细胞呈贴壁生长,细胞形态多样,圆形、椭圆形、长梭形或多角形,传代内皮呈铺路石样;共培养细胞7天时部分细胞仍保留原有的梭形,另外一部分细胞形态不同于前者,可呈多角形,巢样分布,14天时观察可见细胞间存在许多相互连接的突触,并且部分细胞可融合成团块状;2.E组检测尿路上皮血管内皮细胞因子(FⅧ)、平滑肌肌动蛋白(a-SMA)均为阳性,与脱细胞基质复合均生长良好。3.术后1W、2W、4W、12W时分别对各组兔子尿道行组织学观察,可见E组毛细血管数目及平滑肌明显多于C、D组;4.统计学结果显示C、D、E叁组和A组相比术后出现并发症的几率低;而C、D、E叁组之间相比术后并发症发生率则无明显差异。结论1.ADSCs和VEC经体外共培养后可作为种子细胞应用于组织工程化尿道的构建和长段尿道缺损的修复。2.VEC可支持ADSCs向尿道上皮方向的转变,并且还可以加快血管的发生;
汲婧, 刘子源, 张晶, 李学民, 王薇[7]2014年在《脱细胞真皮基质在角膜中植入性的生物力学研究》文中研究表明对脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)囊袋植入兔角膜后的生物相容性、生物学转归及组织结构改变进行生物力学研究,以探讨其作为组织工程角膜支架材料的可行性.对ADM进行了系统的组织微观结构观察和植入性实验研究,组织结构观察包括HE染色、胶原染色、免疫荧光染色和透射电镜观察.在植入实验中,将ADM按不同预处理方法分为无干预组、脱水组和复水组,将3组ADM囊袋植入兔角膜,观察其术后不同时期在体和离体的生物相容性和组织学特性.结果发现:ADM由横纵交替、排列疏松的Ⅰ和Ⅲ型胶原纤维束构成,未见细胞结构;囊袋植入角膜后有不同程度的炎症反应,部分植片透明;组织学观察显示3组ADM植入角膜后均有细胞长入,并进行了胶原纤维重塑.研究工作表明,经适当预处理且结构致密的脱细胞真皮基质植入后可以长期稳定存留于角膜内,是一种比较理想的组织工程角膜支架.
参考文献：
[1]. 异种脱细胞基质支架制备及其移植修补膀胱的实验研究[D]. 邓飞. 天津医科大学. 2003
[2]. 组织工程化尿道构建及尿道缺损修复的实验性研究[D]. 李泸平. 郑州大学. 2016
[3]. 异种脱细胞基质材料在阴道重建及盆底修复中的动物实验研究[D]. 周逸丹. 北京协和医学院. 2009
[4]. 异种脱细胞真皮基质修复结膜缺损的实验研究[D]. 高长华. 南昌大学. 2012
[5]. 脱细胞基质材料复合脂肪间充质干细胞构建大鼠组织工程阴道的研究[D]. 张敬坤. 河北医科大学. 2016
[6]. 脂肪干细胞联合血管内皮细胞修复兔尿道缺损的实验研究[D]. 杜昆峰. 郑州大学. 2016
[7]. 脱细胞真皮基质在角膜中植入性的生物力学研究[J]. 汲婧, 刘子源, 张晶, 李学民, 王薇. 力学学报. 2014
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