岳阳楼区疾病预防控制中心检验科 湖南岳阳 414000
【摘 要】目的 探讨不同检测技术在冷冻加工食品沙门氏菌检测中的应用价值。方法 随机抽取2014年3月~2016年3月我地区菜市场和超市的冷冻柜台300份不同冷冻食品作为样本，分别采用抗体夹心技术（Reveal）、DNA杂交探针试剂盒法（DNA）和Vidas自动酶标免疫测试仪（Vidas）对样本食品的7株菌种进行检测。结果 本研究抽检的3000份样本中，Reveal、DNA、Vidas技术分别检测出阳性样品14个、3个、4个，三种技术联合检测阳性样品3个。进一步分析显示，Reveal技术敏感性高（100.00%），但特异性、准确率均不高（95.97%、96.15%）；Vidas技术敏感性、特异性、准确度均不高；DNA敏感性高（100.00%），特异性强（100.00%），准确度也较好（99.68%），三种技术联合检测敏感性、特异性、准确率均达到100.00%。结论 DNA杂交探针试剂盒法在冷冻加工食品沙门氏茵检测中敏感性强，特异性、准确度相对较高，其与其它技术联合检测可以提高其特异性和准确度，因此可在行业检验中推广应用。
【关键词】Reveal；DNA；Vidas；沙门氏菌；检测
[Abstract] objective to explore the different detection technologies in frozen food processing value of salmonella detection. Methods randomly in March 2014 to March 2016 in my frozen vegetable market and the supermarket counter 300 different frozen food as samples，respectively with antibody sandwich technique（pass Reveal），DNA hybridization probe kit（DNA）and Vidas automatic enzyme mark immune tester（Vidas）to test the sample food the 7 strains of bacteria. 3000 samples，the results of this study sampling pass Reveal，DNA，Vidas technology respectively to detect the positive samples 14，three，four，three kinds of joint detection technology three positive samples. Further analysis showed that pass Reveal technology high sensitivity（100.00%），but the specificity and accuracy is not high（95.97%，96.15%）；Vidas technology sensitivity，specificity and accuracy is not high；DNA high sensitivity（100.00%），specificity（100.00%），there is a better accuracy（99.68%），three kinds of joint detection sensitivity，specificity and accuracy achieves 100.00%. Conclusion DNA hybridization probe kit method in frozen food processing salmonella detection sensitivity is strong，specificity，accuracy is relatively high，its and other joint detection technology can improve the specificity and accuracy，thus can be applied in the industry inspection.
[Key words] pass Reveal；DNA；Vidas. Salmonella；detection
沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌，其病原沙门氏菌属肠道细菌科，对人、家畜、禽兽都可以产生致病性，是一种常见的人畜共患病，具有较强的传染性[1]。据相关资料报道，在世界各国包括我国内陆地区发生的细菌性食物中毒事件中以沙门氏菌引起的食物中毒为首位，对沙门氏菌菌属进行快速、准确诊断非常重要[2]。常用的沙门氏菌检测技术主要有传统培养生化技术（SN）、抗体夹心技术（Reveal）、DNA杂交探针试剂盒法（DNA）和Vidas自动酶标免疫测试仪（Vidas）四种，而传统SN法因操作繁琐、耗时长已无法满足高速经济发展的需要。本研究采用Revea、DNA、Vidas三种检测技术分别对样本食品的10株菌种进行检测研究，旨在探寻三种不同检测技术在冷冻加工食品中检测沙门氏菌的应用价值，现报道如下。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1样品与菌株
随机抽取2014年3月~2016年3月我地区菜市场和超市的冷冻柜台300份不同冷冻食品作为样本，主要包括冻海鱼、冻生虾、冻鸡翅、冻鸡瓜、冻猪蹄、冻牛肉串等6个品种。参考菌种：猪霍乱沙门氏菌50191-1、约特沙门氏菌7582由中国医学细菌保藏管理中心提供；肠炎沙门菌CIcc21482CMCC由中国工业微生物菌种保藏管理中心提供；伤寒沙门氏菌CMCC（B）50071由广东省食品微生物安全工程技术研究开发中心提供；鼠伤寒沙门氏菌CMCC（B）50115由北京博易汇科生物有限公司提供，鸡沙门氏菌（50770）、猪霍乱沙门氏菌9183均为我实验室保存菌种。
1.1.2仪器与试剂
Vidas荧光免疫分析仪由法玛西亚-生物梅里埃工程有限公司生产提供并配套专用试剂；沙门氏菌试剂盒（Reveal）由北京西化仪科技有限公司提供；GeneQuence沙门氏菌DNA杂交探针试剂盒由美国Neogen公司上海办事处提供；培养基、生化试剂由上海西宝生物科技股份有限公司提供；沙门氏诊断血清由广东环凯试剂有限公司提供。以上所有试剂使用均在有效期内。
2方法[3]
2.1检测方法
Reveal试剂盒法：取 reveal沙门氏菌检测试剂盒内25g培养基和免疫检测条放入RV增菌液225ml样袋内，36℃培养4h后放入100mlSC增菌液样袋内，42℃培养18~24h后取出冷却。样袋内采取120uL增菌液置入测试条样孔并留置15min左右，观察检测结果。
若T区无蓝色条而C区有则为阴性；若T区和C区均出现蓝色条则为阳性；若T区和C区均未出现蓝色条带则无效，需重复以上实验。?DNA探针试剂盒法：取增菌液、对照质控液0.2ml和酶裂解液0.1ml一同置入无菌试管内，65℃静置5min。采取150ul裂解液至试剂盒内的微孔板内，取125ul探针溶液混合均匀，45℃静置1h后洗脱5次；再加入150ul显色液，静置20min后加入终止液50ul，450nm波长下观察吸光度值，以OD450大于0.1判定为阳性。?Vidas免疫分析仪：取增菌液5ml，100℃水浴15min，采取灭活菌液500uL置入检测条样孔，并将其静置于反应窗内45min，打印结果并计算TV值。当TV小于0.23即为阴性；大于0.23即为阳性。
2.2样品试验
严格参照行业检验标准进行采样，参照reveal沙门氏菌检测试剂使用说明进行细菌培养，测试条初筛试验结果若为阴性，则划线接种BS和DHL平板。若两平板均报告为阴性，则未检出，若报告为阳性，进行Vidas和DNA杂交针探试验。Vidas和DNA试验结果报告为阴性，则未检出，若其中任意一个或两个结果报告为阳性，再划线接种BS和DHL平板，每组接种不少于4个平板，最后选取可疑菌落进行血清学和生化试验并记录最终检测结果。将11株菌种分别接种于营养肉汤。37℃培养16-18h，选取十倍三个稀释度稀释各菌株培养物，取1ml常规平板接种，观察接种的活菌数量。同上方法分别进行4个测试。
2.3评价方法
观察并记录四种检样结果，分别对四种检测方法的敏感性、特异性、符合率进行评定。
3结果
3.1 三种检测技术检测冷冻加工食品沙门氏菌阳性结果
抽检的3000份样本中，Reveal、DNA、Vidas技术分别检测出阳性样品14个、3个、4个，三种技术联合检测阳性样品3个。见表1。
注：假阳性，单一检测为阳性，但联合检测为阴性；假阴性，单一检测为阴性，但联合检测为阳性。
3 讨论
自1885年沙门氏等在霍乱流行时分离到猪霍乱沙门氏菌，因此定名为沙门氏菌属。临床上感染沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染食品，均会导致食物中毒事件的发生，据统计沙门氏菌引起的食物中毒在世界各国的种类细菌性食物中毒事件中常列榜首，而我国内陆地区也以沙门氏菌为首位。因此采取切实有效且准确率高的检测方法在食物检测中的意义极为重要[4]。
本研究抽检的3000份样本中，Reveal、DNA、Vidas技术分别检测出阳性样品14个、3个、4个，三种技术联合检测阳性样品3个。进一步分析显示，Reveal技术敏感性高（100.00%），但特异性、准确率均不高（95.97%、96.15%）；Vidas技术敏感性、特异性、准确度均不高；DNA敏感性高（100.00%），特异性强（100.00%），准确度也较好（99.68%），三种技术联合检测敏感性、特异性、准确率均达到100.00%。这也与黄宝莹等[5]的研究结果相一致。
综上所述，DNA杂交探针试剂盒法在冷冻加工食品沙门氏茵检测中敏感性强，特异性、准确度相对较高，其与其它技术联合检测可以提高其特异性和准确度，因此可在行业检验中推广应用。
参考文献：
[1] 陈玲，张菊梅，杨小鹃，等. 沙门氏菌分型研究进展[J]. 微生物学通报，2016，43（3）：648-654.
[2] 尹德凤，张莉，张大文，等. 食品中沙门氏菌污染研究现状[J]. 江西农业学报，2015，27（11）：55-60.
[3] 张萍，冯芳. 沙门氏菌的检测技术和方法的研究进展[J]. 食品安全质量检测学报，2015，6（5）：1834-1841.
[4] 谢建华，周莉，侯亚丽，等. 重庆市畜禽产品中沙门氏菌污染状况调查分析[J]. 中国动物检疫，2016，33（8）：27-30.
[5] 黄宝莹，佘之蕴，林耀文，等. 四种方法检测食品中沙门氏菌的比较[J]. 食品工业科技，2014，35（15）：185-187.
论文作者:漆红利
论文发表刊物:《中国蒙医药》2017年第5期
论文发表时间:2017/5/17
标签：沙门氏菌论文; 阳性论文; 特异性论文; 技术论文; 准确度论文; 阴性论文; 三种论文; 《中国蒙医药》2017年第5期论文;