朱婷婷1 张旭1 吴思菲1 胡慧心1 何鑫1 张涛2 肖俊会2 王家宁2 简斌2（通讯作者）
（1湖北医药学院第三临床学院2011级 湖北 十堰 442000）
（2湖北医药学院附属人民医院心脏中心心内科三病区 湖北 十堰 442000）
【摘要】 目的：调查鄂西北地区健康汉族人群 CYP2C19 基因多态性分布特征。方法：采用基因芯片法（DNA microarray）对96例鄂西北地区（十堰市）健康汉族人群CYP2C19基因多态性进行分析。结果：鄂西北地区健康汉族人群CYP2C19 *1/*1、CYP2C19*1 /*2、CYP2C19*1/*3、CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3和CYP2C19*3/*3基因型出现频率分别为 41.7%、37.5%、6.3%、10.4%、3.1% 和1.0%。结论：鄂西北地区健康汉族人群基因型分布与我国的藏族、蒙古族相似，与维吾尔族、回族、哈萨克族人明显不同。
【关键词】 鄂西北地区； CYP2C19基因；基因多态性
【中图分类号】R195 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）12-0351-03
冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary heart disease，CHD）是当今世界威胁人类健康最重要的心血管疾病之一。氯吡格雷是临床使用最广泛的抗血小板药物，其联合阿司匹林广泛用于冠心病的Ⅰ级及Ⅱ级预防，可显著减低不良心血管事件的发生率，降低支架内血栓的形成。然而，由于患者对抗血小板药物的反应存在显著差异，部分患者服用氯吡格雷后血小板功能未得到有效抑制，仍反复发生血栓性事件，称之为氯吡格雷抵抗（clopidogrel resistance，CR），并认为其代谢相关基因CYP2C19多态性是导致这种现象的重要原因[1]。且该基因多态性分布存在明显地区和种族差异，因此，我们初步探索了本地区汉族人群CYP2C19基因多态性的分布特征，为本地区汉族人群的临床合理用药提供理论指导。
1.材料
1.1 研究对象
随机选取在十堰市人民医院心内科体检的鄂西北地区十堰籍汉族无亲缘关系的健康人群96例作为研究对象，其中男性51例，女性45例，年龄18岁～55岁。入选标准：无亲缘关系； 经体格检查及常规检查确定健康状况良好；无长期服药史，无慢性病病史；无家族肿瘤遗传史；无接受放化疗史；无职业性接触放射线物质、有毒气体等致癌物史。
1.2 试剂与仪器
dNTP、DNA Marker、CYP2C19基因检测试剂盒（DNA微阵列芯片法）、DNA提取纯化试剂盒、PCR仪CYP2C19* 2，CYP2C19 * 3引物合成、PCR仪、e-Hyb全自动杂交仪、生物芯片识读仪等主要试剂与仪器均由上海百傲科技有限公司提供。
2.方法
2.1 基因组DNA的提取
早晨8点抽取空腹外周静脉血3mL，应用DNA提取试剂盒(中国上海百傲科技有限公司)，从外周血中提取基因组全血 DNA，将提取的 DNA 在-20℃存储备用。利用“CYP2C19 基因芯片检测系统”(中国上海百傲科技有限公司)检测目的基因的基因型：全血DNA提取、目的基因PCＲ扩增、芯片杂交显色、将芯片上的色斑经信号放大，通过基因芯片图像分析软件Array Doctor V2.0对结果进行扫描和自动判读，给出CYP2C19基因SNP信息，并设阳性及阴性对照，进行质量控制。以上步骤严格按照仪器和试剂盒标准操作规程操作。
2.2 统计学处理
将所获数据作 Hardy-Weinberg 定律的吻合度测验 (χ2检验)，验证数据的准确性和群体代表性。基因型分布和等位基因频率的组间比较采用χ2检验。
3.结果
3.1 基本资料
入选96例汉族无血缘关系的健康体检者（男性51例，女性45例，年龄18岁～55岁），经询问、记录入选患者家族史均无血缘关系，所有受试者无严重疾病史，体格检查及血、尿常规、肝肾功能、心电图等常规检查均正常。
3.2 Hardy-weinberg 平衡检验
CYP2C19等位基因分布符合Hardy-weinberg平衡定律（P>0.05），说明该人群CYP2C19的检测结果具有代表性。
3.3 等位基因分布情况
CYP2C19野生型（* 1）和两个等位基因 (* 2、* 3) 分布仍然以野生型为主，CYP2C19* 2次之，CYP2C19* 3最少，三者所占比例分别为63.6%、30.7% 和5.7%，见表1。
4.讨论
位于肝细胞微粒体的依赖细胞色素P450的加单氧酶系（Cytochrome P450，CYP450）是肝脏生物转化第一相反应最重要的酶，是目前已知底物最广泛的生物转化酶类，参与了人体内 40％～50％ 的药物代谢，在药物代谢过程中起着重要的作用。CYP450 基因多态性对药物代谢的影响，也是药物遗传学研究的最早对象之一。其包含CYP3A、CYP2C、CYP1A2、CYP2E1、CYP2A6、CYP2D6、CYP2B6 等诸多家族，有60种不同的CYP基因（57种功能基因和58种假基因），呈高度的多态性[7,8]。CYP参与许多药物如类固醇、胆汁酸、脂肪酸、前列腺素、生物胺类和维A酸等在体内的氧化、超氧化和还原代谢。同时，其参与的生物转化过程也将一些“前体药物（如氯吡格雷）”等转化成有药理学活性的代谢物，从而发挥临床治疗作用。
氯吡格雷在小肠的吸收受ABCB1基因编码的质子泵P糖蛋白调控，大部分(约85%) 经酯酶代谢为无活性的代谢产物，经肠道排出，只有不到15%给药剂量的氯吡咯雷被肝细胞色素P450（CYP450）系统经2步氧化为有效的活性代谢物。第一步主要由CYP2C19（约占45%）、CYP1A2（约占36%）、CYP2B6（约占19%）等基因编码的CYP450酶将氯吡咯雷的噻吩环氧化形成2-氧-氯吡格雷 (2-oxo-clopidogrel)；第二步主要由CYP3A4（约占40%）、CYP2B6（约占33%）、CYP2C19（约占20%）、CYP2C9（约占7%）等基因编码的CYP450酶将2-氧-氯吡格雷进一步被氧化，使噻吩环打开，形成一个羧基和巯基，生成具有药理学活性的代谢物[9]。其活性代谢产物的巯基与血小板膜表面二磷酸腺苷 (adenosine diphosphate，ADP) P2Y12受体的半胱氨酸之间形成一个二硫键，进而不可逆地阻断P2Y12受体，发挥阻断ADP与血小板受体结合，抑制纤维蛋白原受体（Ⅱ b / Ⅲ a 受体）参与的血小板聚集，从而降低栓形成的发生率，减少死亡、再发心梗等不良心血管事件的发生。
目前，国内外多个研究项目研究结果显示CYP2C19基因上的多个等位基因多态位点与氯吡格雷的抗血小板反应多样性密切相关[10-12]。且这种多态性分布特点存在明显的地区和种族间的差异[13]。白种人慢代谢型发生率与沙特阿拉伯人相近为3%～5%，黑人介于白种人与东方人之间，而东方人PM的发生率在13%～23%。
本实验结果表明，鄂西北地区健康汉族人群CYP2C19等位基因CYP2C19*1、*2、*3 3种等位基因的发生频率分别为63.6%、30.7%和5.7%；CYP2C19代谢表型以中间代谢型的频率最高(43.8%)，其次是快代谢型（41.7%），慢代谢型(14.5%)最低，与维吾尔族、回族、哈萨克族分布明显不同。目前，国内已有多个地区关于CYP2C19基因多态性分布的相关研究，鄂西北地区处于划分我国南北方的秦岭以南，有着特殊的地域环境和人口特征，对本地区汉族人群 CYP2C19基因多态性的收集和分析，填补了本地区汉族人群CYP2C19基因多态性分布的空白，也为优化临床相关药物的治疗，指导临床医生合理用药提供一定的参考价值。
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基金项目：湖北省高等学校大学生创新创业训练计划项目（201410929016）
通讯作者：简斌，男，医学硕士，主治医师
论文作者:朱婷婷1,张旭1,吴思菲1,胡慧心1,何鑫1,张涛
论文发表刊物:《医药前沿》2016年4月第12期
论文发表时间:2016/5/20
标签：基因论文; 多态性论文; 汉族论文; 人群论文; 格雷论文; 药物论文; 地区论文; 《医药前沿》2016年4月第12期论文;