范存晖 李娟 通讯作者
（中国药科大学药剂教研室；江苏南京210009）
【摘要】目的：制备长循环紫杉醇脂质体，提高紫杉醇药物在体循环时间。方法：磷脂PEG2000-DSPE使脂质体表面PEG化，避免内皮网状吞噬细胞识别而增加药物在体循环时间，使用薄膜分散-超声法制备长循环紫杉醇脂质体。以SD大鼠为研究对象，随机分为实验组和对照组，实验组尾静脉注射PEG化的紫杉醇脂质体，对照组注射普通紫杉醇脂质体。给药剂量为10mg/kg。结果：大鼠体内药动学研究表明，PEG化的紫杉醇脂质体，CL和AUC0-t分别提高了116.7%和102.6%，具有明显的长效功能。
【关键词】紫杉醇；脂质体；长循环；药动学
[ 中图分类号 ]R2[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165（2019）04-0231-01
紫杉醇作为一线抗肿瘤药物，对卵巢癌和乳腺癌具有较好的治疗效果，其通过促进和诱导微管蛋白聚合，使细胞有丝分裂时不能形成纺锤体和纺锤丝，从而达到抑制细胞分裂和增殖的效果。但紫杉醇药物本身毒副作用大，常规脂质体体内清除速率速度快，肿瘤部位不能有效蓄积，故而不能很好的发挥治疗效果。本实验通过制备PEG化的长循环紫杉醇脂质体，提高紫杉醇药物的生物利用度和治疗效果。
1实验试剂及仪器
1 仪器与材料
1.1 实验仪器
LC-10AD高效液相色谱仪（日本岛津公司）；BS110S电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；TGL-16C高速离心机（常州国华电器有限公司）；HH-2恒温水浴锅（国华电器有限公司）；KQ2200超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司)；WH-3微型旋涡混合仪（上海泸西分析仪器厂有限公司）。
1.2 材料和试剂
紫杉醇（上海三维制药有限公司）；合成磷脂PEG2000-DSPE （上海亚亦生物科技有限公司）；卵磷脂（艾韦特医药科技有限公司）胆固醇（阿拉丁试剂有限公司）；乙醚、无水乙醇均为分析纯；甲醇为分析纯。
2实验内容
2.1紫杉醇长循环脂质体的制备
实验采用薄膜分散-超声法制备紫杉醇脂质体，具体操作如下，分别称取一定量的磷脂、胆固醇和紫杉醇于茄形瓶中，加入无水乙醇，超声震荡至完全溶解后，置于旋转蒸发仪上，恒温水浴减压旋转蒸发形成均匀的薄膜，而后加入一定量pH7.4的PBS缓冲液进行孵育，超声过膜，即得目标制剂。
2.2血浆中紫杉醇药物分析方法学的建立
2.2.1色谱条件
流动相:甲醇：水（70:30，v/v）；色谱柱：C18柱（250mm × 4.6 mm, 5 μm）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样体积：20 µL；检测波长：227nm。
2.2.2血浆样品处理
大鼠眼眶部位取血至肝素化的离心管中，高速离心分离得血浆。在血浆中加入内标液混匀后，加入乙醚涡旋振荡，离心取上清，氮气吹干，流动相复溶混匀，离心后取上清进样进行色谱分析。
2.2.3方法专属性考察
取空白大鼠血浆，按“2.2.2”项操作，考察血浆对内标物质和紫杉醇测定的影响。
2.2.4绘制标准曲线
将大鼠空白血浆和紫杉醇储备液混匀，制备系列血药浓度，加入内标溶液，按“2.2.2”项操作处理，记录紫杉醇峰面积和内标峰面积，绘制标准曲线。
2.2.5 回收率及精密度试验考察
取低、中、高三个浓度的血浆样品，按“2.2.2”项操作。测定并计算日内、日间精密度和回收率。
2.3动物实验方法
将健康状况良好的SD大鼠10只随机分为2组，禁食12h后。一组尾静脉注射普通紫杉醇脂质体，一组注射长循环紫杉醇脂质体。给药剂量为10mg/kg。给药后，分别于0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12、24h于大鼠眼眶取血0.5mL，将血样置于肝素抗凝管中，离心取上清血浆，按“2.2.2”项操作，计算药物血药浓度。
2.4数据处理
利用药动学软件PKSolver，进行非房室模型拟合，计算药动学参数。采用t检验法进行组间参数检验，以*p<0.05作为显著性差异标志。
3实验结果
3.1血浆中紫杉醇药物分析方法学的验证
3.1.1方法专属性
取空白血浆，紫杉醇+空白血浆，内标物+空白血浆和紫杉醇+内标物+空白血浆，HPLC图见图1。
图1.药物在血浆中的HPLC图
由表1可知，紫杉醇长循环脂质体和紫杉醇脂质体的t1/2分体，PEG化的长循环脂质体在体循环驻留时间明显延长。
4讨论
脂质体作为一种性能优异的递药系统，对其本身性能和功能的改变，一直是到医药领域关注的热点。PEG化后的隐形脂质体，避免了网状内皮系统的识别，阻止了脂质体与血浆蛋白的相互作用，使药物体内循环时间和驻留时间明显延长，从而降低药物不良反应，提高治疗效果，对紫杉醇药物临床的进一步开发具有较好的指导意义。
参考文献
[1]安飞, 刘德杰, 冷佳蔚. 紫杉醇纳米制剂的研究进展[J]. 药学研究, 2018, 37(10):51-55.
[2]紫杉醇脂质体用于乳腺癌新辅助化疗的疗效与安全性[J]. 中国医院用药评价与分析, 2017(8):1058-1060.
[3]张亮. 长循环脂质体递送系统在肿瘤诊断和治疗中的应用[J]. 医药导报, 2017, 36(5):463-468.
[4]陈正, 李凌冰. 新型荷载紫杉醇的脂质体的制备及体外评价[J]. 药物生物技术, 2018, v.25(2):17-22.
[5]高洁凡, 王东晖, 李倩,等. 紫杉醇脂质体对大鼠卵巢癌的抑制疗效[J]. 中国医药导刊, 2017, 19(4).
论文作者:范存晖 李娟 通讯作者
论文发表刊物:《医师在线》2019年2月4期
论文发表时间:2019/4/11
标签：紫杉醇论文; 血浆论文; 脂质体论文; 药物论文; 大鼠论文; 超声论文; 体循环论文; 《医师在线》2019年2月4期论文;