微生态制剂对南美白对虾生长和非特异性免疫因子影响的研究

微生态制剂对南美白对虾生长和非特异性免疫因子影响的研究

隋大鹏[1]2003年在《微生态制剂对南美白对虾生长和非特异性免疫因子影响的研究》文中指出从海水和养殖对虾体表及体内分离纯化得到223株细菌。从中筛选出若干生长旺盛、特征明显、消化酶活性较强且对弧菌有一定拮抗性的菌株,保种备用。临用时按一定比例制备成微生态制剂。 以南美白对虾(Penaeus vannamei Boone)为试验材料,将微生态制剂定期加入养殖水体,定期测量对虾体长和体重,并抽取虾血,计数血细胞数量并研究其组成,并测定对虾血清中的酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)、抗菌活力(Ua)及溶菌活力(Ul)。同时,定期取试验组和对照组对虾的类淋巴器,制备显微光镜切片和超微电镜切片,观察并摄影。 结果显示,对虾体长和体重的增长速度明显加快,试验组体长增长率(13.27%)显着高于对照组(9.33%)(P<0.05),试验组体重增长率(73.65%)显着高于对照组(63.17%)(P<0.05)。试验组对虾颗粒细胞数比对照组增加63.92%,小颗粒细胞数增加61.5%,血细胞总数增加29.04%。试验组各项免疫指标均比对照组有所增强。其中效果明显的是酚氧化酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶、抗菌活力和溶菌活力。结合其他研究者的研究成果,建议将酚氧化酶、超氧化物歧化酶、抗菌活力和溶菌活力作为衡量对虾免疫功能强弱的指标。类淋巴器观察结果表明:光镜下,试验组类淋巴器明显比对照组大,第二种小管明显多于对照组的,且血细胞数目明显较多;电镜下,试验组颗粒细胞和小颗粒细胞明显多于对照组。 综上可知,微生态制剂可以促进南美白对虾的生长,并通过增加血细胞数量和改善其组成增强其防病抗病能力,通过促进类淋巴器的发育来增强其非特异性免疫功能,可以增强与非特异性免疫有关的酶活力值和免疫因子活力,从而更好的预防和抵抗疾病。使用微生态制剂进行对虾健康养殖,有着良好的应用前景。 本次试验在研究微生态制剂对南美白对虾生长和免疫的影响方面进行了有中国海洋大学硕士论文微生态制剂对南美白对虾生长和非特异性免疫因子影响的研究益的尝试。较为细致地观察了南美白对虾类淋巴器的形态结构。初步掌握了几个对非特异性免疫有关的酶活的变化规律,确定了以酚氧化酶、超氧化物岐化酶、抗菌活力和溶菌活力作为衡量对虾健康状况和免疫机能强弱的指标,为对虾的病害防治工作提供了参照。试验操作中采用了与分子生物学相关的试验技术,如96孔酶标板法测定对虾血清酚氧化酶活力。试验全过程是将微生态制剂直接加入养殖水体,由于以往的类似研究多通过口服或注射途径进行,采用直接加入水体方法进行研究是一种有意义的尝试。发现这种方法可以取得与注射或口服相似的结果,并且操作简便,值得推广。

吴定心[2]2016年在《微生物制剂对南美白对虾养殖体系微生态的影响及其与藻类关系的研究》文中认为南美白对虾是目前世界上产值居首位的水产品,中国是全球最大养殖生产国。2014年,中国南美白对虾产量157.69万吨,价值过千亿。南美白对虾自1988年引入中国以来,养殖已有27年。随着育苗技术和养殖技术的不断进步,养殖密度越来越大,水环境问题也越来越严重。为了有效改善水环境,防控病害,微生态制剂作为一项生物控制技术最早引入南美白对虾养殖过程中,并在十余年内得到迅速推广应用。由于传统可培养微生物分析技术的局限,早期的研究很难从微生态角度揭示微生态制剂的作用机理及其引起的菌群结构变化,而基础研究数据的缺乏反过来又制约了微生态制剂的发展和应用。本文选取实验室分离培养的枯草芽孢杆菌FY99-01(Bacillus subtilis FY99-01)粉状菌剂和硝化杆菌Y3-2(Nitrobacter winogradskyi Y3-2)液体菌剂,在广西北海进行了南美白对虾野外全程应用试验,在养殖的前、中、后期对水体和虾肠道取样,采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)和高通量测序技术,对上述菌剂在不同养殖时期使用所造成的养殖水体和虾肠道总细菌和弧菌群落结构的变化进行了系统分析,以揭示其对养殖水环境和虾肠道微生态的影响。藻类是水产养殖的关键生态要素,藻类与细菌之间存在复杂的相互作用关系,可能影响微生态制剂作用的发挥。藻类和硝化细菌竞争共同底物,尤其是它们决定了氮素的存在形态和去向,但两者关系缺乏系统研究,本文建立了藻-菌相互作用模型,以阐明藻类对硝化细菌在养殖水体中发挥作用的影响。本文主要研究结论如下:(1)枯草芽孢杆菌FY99-01在虾池的使用可以明显改善虾池水质,在养殖前期(0~30天)显着降低水体pH,中后期(30~84天)降低水体SOP(可溶性正磷酸盐)浓度,后期(60~84天)降低水体亚硝酸浓度;其对对虾生长速度、对虾产量、饲料系数方面也表现出一定促进作用。硝化杆菌Y3-2的作用明显弱于枯草芽孢杆菌FY99-01,对水质和对虾生长促进作用改善不大,尤其是没有表现出降低和控制亚硝酸盐的作用。(2)对虾养殖水体不同时期的优势菌群不同。养殖前期,优势菌群为β-proteobacteria和Verrucomicrobiae;养殖中期,为α-proteobacteria、Actinobacteria、Verrucomicrobiae、Cyanobacteria及Bacilli;养殖后期,为α-proteobacteria(30.46±7.70%)、γ-proteobacteria(12.72±4.11%)、chloraplast(7.16±3.22%)、actinobacteria(7.10±3.55%)、flavobacteria(6.32±2.34%)、cyanobacteria(5.52±8.87%)、β-proteobacteria(4.30±1.42%)、sphingobacteria(4.03±1.39%)、planctomycetacia(3.30±0.46%)、δ-proteobacteria(2.57±0.60%)以及verrucomicrobiae(1.55±0.74%)等。(3)南美白对虾肠道细菌优势菌群为γ-proteobacteria(60.77±16.51%)、α-proteobacteria(15.45±8.98%)、sphingobacteria(4.01±2.16%)、actinobacteria(3.83±3.75%)、flavobacteria(3.80±0.69%)及planctomycetacia(1.00±0.60%)等。弧菌是对虾肠道菌群最常见种群之一,其主要种类为vibrioshilonii、v.hepatarius和一种不可培养弧菌(unculturedvibriosp.,ay374396.1);值得注意的是,本研究发现浮霉菌纲planctomycetacia也是虾肠道的优势种群,值得关注,因为目前认为厌氧氨氧化菌(anammox)主要来自该菌群,它们在地球氮循环中有重要生态意义。(4)投加枯草芽孢杆菌fy99-01和硝化杆菌y3-2均对水体总细菌微生态产生影响,芽孢杆菌的影响大于硝化杆菌。基于dgge的聚类结果表明:芽孢杆菌在前期和中期的影响大于其后期的影响。dgge切胶测序结果显示:前期,投加芽孢杆菌使一种人类病原菌wp01(klebsiellapneumoniaemp3_1a,jn644624.1)和一种不可培养细菌wp03(unculturedorganismsbxy_796,jn429468.1)比例降低,使芽孢杆菌wp02(km083138)比例明显增加,投加硝化细菌同样使wp01比例降低;中期,投加芽孢杆菌使一种放线菌纲细菌wm08(cryobacteriumpsychrotolerans,jn626519.1)、一种蓝细菌wm09(leptolyngbyafragilis,ef420112.1)和一种疣微菌纲细菌wm11(unculturedverrucomicrobialesbacterium,fj516959.1)在水体中出现,使一种人类病原菌wm10(acinetobacterradioresistenssma4,jq618289.1)消亡,投加硝化细菌也使wm08和wm09出现,使wm10比例降低;后期,投加芽孢杆菌使不可培养疣微菌纲细菌wa01、wa03和wa07比例降低或消亡,使一种芽孢杆菌wa12比例增加;投加硝化细菌使疣微菌纲细菌wa03、wa11和一种芽孢杆菌纲反硝化细菌wa04比例降低;后期,高通量测序结果同样显示,投加枯草芽孢杆菌fy99-01会使水体中α-proteobacteria细菌比例明显降低(p<0.05),而flavobacteria、cyanobacteria、bacilli以及绿藻比例明显上升,属水平上使bacillusspp.比例显着上升(p<0.05);而投加硝化杆菌y3-2影响较小,优势种群中仅发现绿藻含量有大幅上升。整体上,投加微生态制剂优化了养殖水环境的微生态结构。(5)在水体中使用微生态制剂会影响虾肠道的微生物群落结构,枯草芽孢杆菌FY99-01和硝化杆菌Y3-2均明显提高了虾肠道总细菌的多样性。枯草芽孢杆菌FY99-01的使用导致虾肠道内Vibrio spp.(特别是潜在病原菌V.parahaemolyticus)、Rhodobacter spp.比例明显减少,Pseudomonas spp.、Corynebacterium spp.比例明显增多。硝化杆菌Y3-2的使用同样导致Vibrio spp.减少,Pseudomonas spp.以及Chitinophaga spp.比例明显增加。这从微生态角度说明了使用本文的微生态制剂对对虾健康的改善潜力和其安全性。(6)藻类的生长会明显抑制硝化细菌的硝化作用,光线同样抑制其硝化作用,藻和光的共同作用会使抑制作用增强。藻主要抑制硝化细菌生长,而光主要抑制硝化细菌活性。硝化细菌制剂在养殖水体中应用效果不佳的主要原因是藻类生长和光照的联合抑制作用。(7)铜绿微囊藻FACHB-915通过氨氮利用的优势抑制硝化细菌的生长和活性;微囊藻毒素MC-LR对硝化细菌的生长和活性没有影响,微囊藻毒素不是微囊藻抑制硝化细菌的原因。

陈亚坤[3]2011年在《Vc对拥挤胁迫下南美白对虾免疫机能的影响》文中研究说明本论文分为叁个阶段:第一阶段研究了不同密度养殖条件下南美白对虾生长,水质因子的变化情况,对于指导对虾工厂化养殖具有重要意义。第二阶段,研究了高密度养殖造成的拥挤胁迫,对南美白对虾免疫系统的影响。第叁阶段,在前人研究的基础上研究了饲料中添加维生素C对拥挤胁迫下南美白对虾免疫系统的影响。研究结果总结如下:(1)本文研究不同密度养殖条件下南美白对虾生长,水质因子的变化情况。实验设置4个养殖密度(200,400,600,800尾/m~3)梯度,随机选取平均体长(1.5±0.1)cm的虾苗在玻璃水箱中养殖(40cm×50cm×60cm)。实验进行8周,第7周开始取样研究。结果显示:体重增加率、存活率、特定生长率(SGR)、脂肪含量、蛋白质含量均受养殖密度的显着影响(P<0.05),表现为各项指标随养殖密度的增加而降低。水质指标pH值受养殖密度的显着影响(P<0.05),随着养殖密度的增加,养殖时间的增加而降低;各组氨氮含量均随着养殖密度和养殖时间的增加而增加。200尾/m~3,400尾/ m~3,600尾/ m~3密度组的氨氮含量均与高密度组(800尾/m~3)差异显着(P<0.05)。(2)本文研究高密度养殖造成的拥挤胁迫对南美白对虾免疫系统的影响。实验设置4个养殖密度(200,400,600,800尾/m~3)梯度,将平均体重(3.0±0.5)g的对虾随机分到16个水族箱(40cm×50cm×60cm)进行养殖实验,分别在第1天、3天、5天、7天、10天取样,研究南美白对虾非特异免疫系统中,溶菌酶、酚氧化物酶、碱性磷酸酶、超氧阴离子(O_2~-)的活性。结果显示:随着养殖密度的增加,溶菌酶、碱性磷酸酶(ALP/AKP)、酚氧化酶的酶活性与超氧阴离子体内积累量均出现升高再降低的变化过程,尤其是高密度组变化越明显。且相同密度随着处理时间的不同,免疫指标受密度胁迫的影响显着(P<0.05);相同时间随着不同的密度,免疫指标受密度胁迫的影响显着(P<0.05)。(3)本文研究饲料中添加维生素C对拥挤胁迫下南美白对虾免疫系统的影响。实验设置4个养殖密度(200,400,600,800com~3)梯度,选取体长在(3.5±0.5)cm的对虾随机分到16个水族箱(40cm×50cm×60cm),分别在第1天、5天、10天测各项免疫指标(溶菌酶,碱性磷酸酶,超氧阴离子,酚氧化物酶)。试验第11起开始喂Vc的添加量为2000mg/kg(2%Vc)的饲料。每隔3天取样研究各项免疫指标。研究结果显示:投喂Vc可以显着提高拥挤胁迫下南美白对虾免疫酶活性。低密度组200尾/m~3和400尾/m~3南美白对虾溶菌酶、碱性磷酸酶(ALP/AKP)、酚氧化酶的酶活性有明显的提高,实验结束可以恢复到南美白对虾免疫系统稳定时酶活性。高密度组600尾/m~3和800尾/m~3南美白对虾溶菌酶、碱性磷酸酶(ALP/AKP)、酚氧化酶的酶活性有明显的提高但是均显着低于南美白对虾免疫系统稳定时酶活性。

王国霞, 黄燕华, 黄文庆, 周晔, 严琴[4]2010年在《乳酸菌对南美白对虾生长、饲料利用和体组成的影响》文中研究表明挑选450尾初始体重(1.42±0.05)g、健康的对虾平均分配到15个水族箱中,设5个处理,每个处理3个重复,分别饲喂在基础日粮中添加0%、0.5%、5%、10%和15%液体乳酸菌的日粮,试验期为8周,研究乳酸菌对南美白对虾生长、饲料利用和体组成的影响。结果表明:添加10%的乳酸菌组效果最好,对虾的成活率、增重率、特定生长率分别较空白组提高了2.53%、7.13%、4.23%,饵料系数较空白组降低了8.38%(P=0.136),各处理组间差异不显着(P>0.05);添加乳酸菌除可显着提高对虾饲料磷的消化率外(P<0.05),对粗蛋白质、脂肪、灰分和钙的消化率无显着影响(P>0.05);乳酸菌对对虾体蛋白、脂肪、灰分、钙和磷含量无显着影响(P>0.05),但除添加10%乳酸菌组外,其他试验组对虾体蛋白含量较对照组的增加,体脂肪含量降低。

朱林, 车轩[5]2013年在《有益微生物在南美白对虾养殖中的应用研究》文中研究说明目前,应用于南美白对虾养殖的有益微生物主要有微生态制剂、芽孢杆菌、光合细菌、硝化细菌和微藻。概述了5种有益微生物的定义、主要作用机理及应用,同时对有益微生物在南美白对虾养殖中的应用前景提出展望。

李文芬, 杨思毅, 齐延林, 林庆聪, 何思齐[6]2016年在《益生菌对南美白对虾生长和免疫力的影响》文中研究表明为了研究益生菌对南美白对虾生长和免疫力的影响,采用含不同嗜酸乳酸杆菌浓度的饵料对南美白对虾(Litopenaeus vannamei)同时饲养进行试验,分成4组(对照组,浓度为0.5%、1.0%、1.5%的试验1组、试验2组、试验3组)。结果表明,随着饵料中嗜酸乳酸杆菌浓度增加,增重率和特定生长率也增加,试验2组、试验3组均显着高于对照组和试验1组(P<0.05),试验组的饵料系数显着降低(P<0.05),而成活率显着升高(P<0.05)。免疫指标也呈现类似变化,试验2组、试验3组的AKP、ACP、PO活性都显着高于试验1组和对照组(P<0.05),POD活性各试验组间则差异不显着(P>0.05),但都显着高于对照组(P<0.05)。因此,添加一定浓度嗜酸乳酸杆菌能有效提高南美白对虾的生长指标和免疫指标。

李举鹏, 史健, 胡小弘, 周影, 王彩蕴[7]2019年在《南美白对虾品系、密度、放苗时间与养殖效益的统计学分析》文中认为通过对南美白对虾的不同品系、放养密度、放苗时间以及养殖效益的统计分析发现:同一品系虾苗在不同区域养殖,虾苗的发病时间和养殖效益存在统计学差异;不同品系虾苗在同一区域养殖,虾苗的发病时间和养殖效益没有统计学差异。随着养殖密度的增大,发病虾池所占的比例增加;同时,同一品系的虾苗在不同的时间放苗,病害发生的比例和养殖效益是不同的。

参考文献:

[1]. 微生态制剂对南美白对虾生长和非特异性免疫因子影响的研究[D]. 隋大鹏. 中国海洋大学. 2003

[2]. 微生物制剂对南美白对虾养殖体系微生态的影响及其与藻类关系的研究[D]. 吴定心. 华中农业大学. 2016

[3]. Vc对拥挤胁迫下南美白对虾免疫机能的影响[D]. 陈亚坤. 河北农业大学. 2011

[4]. 乳酸菌对南美白对虾生长、饲料利用和体组成的影响[J]. 王国霞, 黄燕华, 黄文庆, 周晔, 严琴. 中国饲料. 2010

[5]. 有益微生物在南美白对虾养殖中的应用研究[J]. 朱林, 车轩. 山西农业科学. 2013

[6]. 益生菌对南美白对虾生长和免疫力的影响[J]. 李文芬, 杨思毅, 齐延林, 林庆聪, 何思齐. 湖北农业科学. 2016

[7]. 南美白对虾品系、密度、放苗时间与养殖效益的统计学分析[J]. 李举鹏, 史健, 胡小弘, 周影, 王彩蕴. 水产养殖. 2019

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微生态制剂对南美白对虾生长和非特异性免疫因子影响的研究
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