闫志华
（太原市妇幼保健院妇产科 山西 太原 030012）
【摘要】 目的：一氧化氮合酶（NOS）是催化、生成NO的关键酶，通过观察无排卵型功血患者子宫内膜诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达，来探讨NO在无排卵型功血发病中所起的作用。方法：选取我院2014年5月至2014年12月无排卵型功血各增生病理类型的存档蜡块70例和正常增生期子宫内膜10例。iNOS及eNOS的表达情况通过免疫组化法检测。结果：eNOS在正常增生期宫内膜中表达较弱，功血组各病理类型 eNOS表达高于正常增生期宫内膜，并且eNOS的表达程度按照增生期到单纯型、复杂型、不典型增生顺序呈渐行性增强。iNOS在正常增生期子宫内膜中几乎不表达，功血组各病理类型中iNOS表达均高于正常增生期内膜，iNOS的染色强度从增生期到单纯型、复杂型增生呈渐行性减弱，而从复杂型到不典型增生染色强度增强，不典型增生的强度稍高于增生期。结论：eNOS可以表达于正常增生期子宫内膜，而iNOS 在增生期内膜几乎不表达；iNOS及eNOS在功血各病理类型中，表达均高于正常，由此所导致的NO水平的增高，很可能在无排卵型功血的发生发展中起到了重要的作用。
【关键词】 无排卵型功血；功血；一氧化氮；一氧化氮合酶
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）24-0184-02
功能失调性子宫出血（简称功血）中，无排卵型功血约占85%，到目前为止，其出血机制尚未完全阐明[1]。近年来，继垂体-性腺轴紊乱与子宫内膜表达及功能异常的ER、PR作用引发功血的学说之后，NO在子宫内膜中过度合成，可能是功血发生的又一重要局部调控机制[2]。
研究提示NO通过月经期子宫内膜破裂信号的传导，抑制Bcl-2基因表达，介导子宫内膜凋亡[3]；诱导产生和分泌基质金属蛋白酶（MMPs），促进胶原溶解、细胞外基质破坏[4]；血管扩张、子宫平滑肌松弛、抑制血小板等[5]，参与月经的形成、来潮与维持。一氧化氮合酶（NOS）是催化、生成NO的关键酶，包括内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）,eNOS在正常生理情况下就处于转录、翻译和催化NO合成的状态，作用迅速而短暂，产生少量NO。iNOS主要产生于巨噬细胞、炎性中性粒细胞、组织中的免疫细胞等，这些细胞在致炎因子激活下转录iNOS的mRNA，翻译iNOS，缓慢而持久的产生大量NO。组织中NO的浓度与NOS的表达水平直接相关。因而我们可以根据NOS活性的测定，来反映NO的生成量和生物学效应。Zeroros[6]等发现有排卵型功血、月经过多的患者子宫内膜NO的产量于整个月经周期均高于正常子宫内膜。很多研究推测iNOS可能与月经及子宫内膜某些病理状态相关联。本文旨在通过观察NOS在无排卵型功血患者子宫内膜的表达水平，进一步探讨NOS和NO在无排卵型功血发生及发展中所起的作用。
1.材料与方法
1.1资料来源
实验组：选取我院病理科2014年5月 至2014年12月无排卵型功血存档蜡块70例。包括增生期内膜20例，单纯型增生过长内膜24例，复杂型增生过长内膜12例，不典型增生14例。患者平均年龄35岁。
对照组：选取同期因子宫肌瘤行子宫切除的患者，内膜病理诊断为正常增生期9例,平均年龄33.80岁。
两组均在术前3个月内未用过激素类药物，一年内未放置节育环（IUD）.
1.2方法与结果
判定（1）采用免疫组化染色法检测eNOS和iNOS表达。
（2）结果判断标准：两位医师采用双盲法,细胞胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性。根据细胞浆的染色强度及染色细胞百分率进行评分。
1.3 统计学处理
采用SAS软件包，各组之间率的比较用χ?检验， P<0.05为差异有显著性。
2.结果
2.1 eNOS表达于子宫内膜腺上皮及血管内皮细胞胞浆， eNOS在正常增生期宫内膜中表达较弱，无排卵型功血组各病理类型eNOS表达高于正常增生期宫内膜，差异有统计学意义（P=0.0174，见表1），并且eNOS的表达强度按照增生期、单纯型、复杂型、不典型增生顺序呈增强趋势，但是无明显统计学意义，仅不典型增生与无排卵功血增生期组、单纯型增生组eNOS的表达差异显著（P分别为0.0018,0.0072 见表2）。
2.1 iNOS表达于子宫内膜腺上皮胞浆中，iNOS在正常增生期宫内膜中几乎不表达，无排卵型功血组iNOS表达高于正常增生期宫内膜，差异有统计学意义（P=0.0006，见表3），表4中显示，iNOS的表达强度从增生期到单纯型、复杂型增生呈减弱趋势（P>0.05），且增生期iNOS的表达强度较单纯型、复杂型增生强度有统计学意义（P分别为0.0288，0,0105）从复杂型到不典型增生染色程度增强，差异显著（P=0.0186），不典型增生iNOS的表达强度稍高于功血增生期，但无统计学意义（P=0.9538）。
表1 无排卵型功血组与对照组eNOS表达率的比较
3.讨论
本研究发现eNOS在无排卵型功血组阳性表达率明显高于正常宫内膜组（P<0.05）。并且子宫内膜增生程度从轻到重阳性表达率有逐渐升高的趋势，实验的结果可以推测：由eNOS催化宫内膜局部环境中产生NO参与了无排卵型功血的发生、发展有关，而eNOS本身似乎不参与这一过程。出现这样的结论有两种可能：一为eNOS本身就不参与这一过程；二可能与我们实验例数不多有关。局部浓度增加的NO作为一种血管扩张剂和介质促进新生血管的形成，供给细胞氧和营养，使细胞繁殖。
本研究发现iNOS在正常增生期宫内膜中几乎不表达，与Tschugguel[7]的报道相似。无排卵型功血组iNOS表达高于正常增生期宫内膜（P<0.05），iNOS的染色程度在增生期较单纯型、复杂性增生增强（P均<0.05）；在无排卵型功血发生、发展过程中，由于子宫内膜流血时间长，局部持续的刺激，组织伴随着慢性炎症的改变，炎性细胞组织因子，如IL-1、TNF等启动iNOS的表达，诱导大量NO生成[8]，NO则成为抗微生物（包括寄生虫、细菌、病毒等）入侵的第一线因素。同时，大量NO也介导细胞毒性作用，抑制靶细胞线粒体的功能，从而抑制和杀伤靶细胞。NO也能增加细胞对氧自由基损伤的敏感性。NO亦能与氧自由基作用生成氧化性更强和半衰期更长的超氧亚硝酸阴离子（ONOO-）因此具有更强的细胞毒性。NO的组织损伤机理可能是：NO可能直接抑制了DNA合成中的关键酶的活性，从而使相应的细胞凋亡。NO也可能直接抑制了细胞呼吸中关键酶或抗氧化酶活性或者灭活GPx，使组织细胞内氧及过氧化物增多，引起组织细胞损伤。而炎症后期，由iNOS诱导合成的高水平NO又可参与炎症反应，具细胞毒性。长期存在的高水平内源性NO可参与肿瘤细胞信号传导，损伤DNA并导致基因突变，抑制免疫系统；并且它的代谢产物能引起细胞死亡及DNA损害，抑制了DNA修复酶的修复作用，引起基因的突变，诱导癌基因活性和抑癌基因失活，在肿瘤的发生中起到重要的作用。这些也解释了本研究的另一结果，即：从复杂性到不典型增生染色强度增强（P<0.05）。提示局部较高浓度的NO参与了子宫内膜从复杂性增生到不典型增生这一转变过程。
总之，NO在不同时期、不同类型子宫内膜行驶着不同的功能，NOS在子宫内膜表达的阐明，不仅对于我们认识了解子宫内膜的病理生理有帮助，而且对于我们通过对子宫内膜局部NO产量的精确调控，来干预生殖和避孕、干预妊娠期母儿血液循环、减少经期月经血量、辅助治疗功血及子宫内膜癌等方面都有重要意义。
【参考文献】
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[8]杨慧，何荣霞，别雅春，血管生成素在功能失调性子宫出血中的作用机制[J]中国优生优育，2012；（814）
表2 无排卵型功血组eNOS表达率的两两比较
论文作者:闫志华
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第24期供稿
论文发表时间:2015/10/22
标签：子宫内膜论文; 功血论文; 细胞论文; 氧化氮论文; 宫内论文; 高于论文; 强度论文; 《医药前沿》2015年第24期供稿论文;