陕西省咸阳中学 712000
摘 要：多年来，在高中生物教学中，“叶绿体中色素的提取和分离”是实验的重点和难点。但按照高中《生物学》教材中“叶绿体中色素的提取和分离”实验的方法和步骤操作，实验效果不是很理想，还存在许多问题。
关键词：叶绿体 色素 提取
一、 材料及仪器选择
1.材料。新鲜绿色菠菜叶、刺桐叶、栀子花叶、大叶黄杨叶、黄桷树叶；丙酮、无水乙醇、80%丙酮：95%乙醇=1∶1（V/V）；丙酮∶石油醚∶苯=20∶2∶1（V/V）；丙酮∶石油醚∶苯=10∶2∶1（V/V）；CCl4；SiO2,CaCO3；干燥的定性滤纸，电子天平，带胶塞的大试管（50ml），研钵，玻璃漏斗，剪刀，小试管(10ml)，棕色广口瓶(50ml)，烧杯(250ml、50ml)，药匙，量筒（10ml），移液管(1ml)，洗耳球，脱脂棉,硬纸板。2.仪器。紫外分光光度计、恒温水浴箱。
二、实验方法
1.新鲜叶片的选择。将新鲜的菠菜叶、刺桐叶、栀子花叶、大叶黄杨叶、黄桷树叶分别用剪刀剪碎，各称取1g,再分别装入50ml棕色广口瓶里。将10ml无水乙醇分别加入广口瓶中,塞上棉塞。然后将所有广口瓶放在70℃恒温水浴里，萃取十分钟。分别用漏斗过滤，留下滤液，测出提取液体积。最后将萃取好的色素用分光光度计测分光光度值，记录下试验数值。通过公式再计算出各植物叶片中叶绿体色素的含量。
2.萃取液的选择。准备3个已编好号的50ml广口瓶，将新鲜的刺桐叶剪碎后，用电子天平各称取1g,再分别装入广口瓶里。分别在1号瓶中加入10ml无水乙醇，2号瓶中加入10ml丙酮，3号瓶中加入10ml80%丙酮∶95%乙醇=1∶1（V/V）的混合液。将所有广口瓶放入70℃恒温水浴中加热十分钟，分别用漏斗过滤，留下滤液，测出提取液的体积。最后分别将提取的色素用分光光度计测其分光光度值。通过公式再计算出各植物叶片中叶绿体色素的含量。
3.萃取的方法选择。将新鲜的刺桐叶剪碎后，用电子天平各称取1g,分别放入已编号的广口瓶里和研钵中。将研钵中的叶片迅速研磨，研碎后立即加入5ml无水乙醇，再迅速充分研磨，然后过滤，再将5ml无水乙醇倒入研钵，清洗研钵里的色素，一起倒入漏斗过滤，记录滤液的体积。而另一组进行正交实验：根据水浴法，用不同的加热温度50℃、60℃、70℃和不同的加热时间5min、10min，进行正交实验。将10ml无水乙醇分别加入已编号的棕色瓶中，用水浴法加热，最后将得到的提取液过滤，用分光光度计测在665nm处的OD值。重复实验三次，取其平均值。
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4.滤纸条的选择。首先选择干燥的滤纸，将其剪成长10cm、宽2cm的长方形滤纸条。其次，在滤纸条的一端上剪去两个角，以宽为底边，长为高，剪一个三角形（三角形的底边长为2mm，高为10mm），减去的有个角约79度。以同样的方法剪其他滤纸条，三角形的底边分别为4mm（约68度）、6mm（约59度）、8mm（约51度）、10mm（45度），高都为10mm。每个对照组分别剪三条滤纸条。最后在离底边1.5cm处用铅笔画细线。将滤纸条在画线处折叠，在折线处蘸取已提取好的绿叶色素。蘸取时，先用滴管取出一些色素，然后滴一滴在载玻片上，轻轻晃动载玻片，使提取液摊平，再将折叠好的滤纸条沿画线处轻轻蘸取，注意要保证蘸取的色素呈均匀的细线。等滤纸条的色素干后，再重复以上操作2次。最后在混合液（20∶2∶1）里分离色素，将观察到的结果用手机照下来。
5.层析液的选择。将1g剪碎的刺桐叶片放入广口瓶，加入10ml无水乙醇，用温水浴加热十分钟。过滤，留下滤液。准备三组滤纸条，每组三条。将滤纸条的一端上两角剪去45度角的直角三角形，并画好细线。用折叠蘸取法，蘸取色素。同时，分别用CCl4和石油醚∶丙酮∶苯=(20∶2∶1)（V/V）还有石油醚∶丙酮∶苯=(10∶2∶1)（V/V）三种层析液分离色素，观察并用手机照下来。
6.层析装置的选择。试管装置：准备一根干燥的大试管(50ml)，用一根长的胶头滴管小心加入2ml层析液石油醚∶丙酮∶苯=(20∶2∶1)（V/V），注意滴管不能打湿试管壁。将已经蘸取了色素的滤纸条放进试管中，并将滤纸条固定在橡胶塞上，注意不要让层析液没过细线。塞好橡胶塞，观察色素分离情况。烧杯装置：准备一个250ml的烧杯，用胶头滴管小心加入10ml层析液石油醚∶丙酮∶苯=(20∶2∶1)（V/V），注意不要打湿烧杯壁。再准备一个大小比烧杯口径稍大的硬纸板，在硬纸板上用刀刻几条和滤纸条差不多宽的小口子，方便滤纸条插入。将已经蘸取色素的滤纸条从纸板上的小口子慢慢插入，留一部分滤纸条在外面，将其折叠，按压在纸板上，即可固定滤纸条。可以插入多条滤纸条，然后盖好硬纸板，注意滤纸条的细线不能没入层析液中。最后进行观察，等待色素分离。
7.最终方案确定。选择深绿色刺桐叶子，将其洗净擦干，去掉主脉，称1g，剪碎，装入50ml棕色广口瓶里。加入10ml无水乙醇，塞上棉塞。70℃恒温水浴加热十分钟，过滤，等漏斗里无色素提取液流出即可，用橡胶塞塞住小试管。同时，将干燥的滤纸剪成长10cm、宽2cm的纸条，将滤纸条的一端剪去两角，剪出的三角形是等腰直角三角形，直角边是1cm，在离尖端1.5cm处用铅笔画一条细线。用折叠蘸取法蘸取色素，使色素均匀地分布在细线上。此时，将体积比石油醚∶丙酮∶苯=20∶2∶1的混合液用胶头滴管取10ml在250ml的烧杯中，注意不要碰到烧杯壁。将滤纸条插入硬纸板上的小缝，并固定住滤纸条，盖上硬纸板，注意不要让细线没入，同时观察色素的分离。
论文作者:张翼升
论文发表刊物:《教育学》2017年8月总第125期
论文发表时间:2017/11/8
标签：滤纸论文; 色素论文; 层析论文; 丙酮论文; 刺桐论文; 乙醇论文; 叶绿体论文; 《教育学》2017年8月总第125期论文;