耒阳市人民医院 湖南衡阳 421800
摘要：目的 研究树舌灵芝粗提物体外抗肿瘤的效果。方法 从树舌灵芝中以溶剂提取法得到有机化合物，于分离、纯化后应用MTT比色法进行分析，了解氯仿提取物、乙醚以及醋酸乙酯提取物等对人乳癌细胞（MCF-7）的活性抑制作用。结果 在浓度为1：10、1：100以及1：200时，氯仿提取物对MCF-7的活性抑制率较阳性对照组更高，差异具统计学意义（P<0.05）。表明氯仿提取物能够有效抑制MCF-7的增殖，而其它样品对MCF-7的抑制作用不明显。结论 树舌灵芝中的氯仿提取物能够发挥肿瘤抑制作用。
关键词：树舌灵芝；粗提物体；抗肿瘤
树舌灵芝中富含多糖、蛋白质、生物碱等成分，多用于肝病、结核病治疗中。当前通过提取树舌灵芝深部的有效成分，并制成深层次产品的报道较少[1]。同时对树舌灵芝中化学成分的应用主要为多糖、蛋白质等，还缺乏对其它化学成分的研究报道。本文应用多种先进仪器设备，在从树舌灵芝中得到小分子有机物后进行分离纯化，并且初步研究了树舌灵芝粗提取物的体外抗癌作用，以此为深入研究树舌灵芝的药理机制提供参考。
1.资料与方法
1.1材料与仪器
选购树舌灵芝10株，均经过菌类研究专家鉴定，剔除近缘种。将这些灵芝切成小块，于30摄氏度的烘烤箱中烘干后，放入电动粉碎机中进行粉碎，并筛选后备用。实验仪器包括旋转蒸发仪、离心机、96孔培养板、显微镜、紫外仪等。实验试剂有经过纯化的石油醚、乙醇、正丁醇等，也有RPMI 1640培养液。
1.2研究方法
1.2.1提取纯化方法
应用溶剂提取法将树舌灵芝中的小分子有机化合物提取出来，去除多糖、蛋白质等生物大分子。将备用灵芝放置于装有石油醚的不锈钢桶中，并于室温下浸泡一天，期间不断搅拌并将上清液吸出，得到下层沉淀，后使用石油醚反复提取四至五次。将所有提取液放置于旋转蒸发仪中，于40摄氏度下减压浓缩获得石油醚浸膏。使用乙醇浸泡浓缩残渣得到乙醇浸膏，然后浸泡于蒸馏水中，于室温下充分溶解后，从中萃取出氯仿、乙醚以及醋酸乙酯等提取物。测定上述所有样本的理化性质，并且进一步分离、纯化。
1.2.2肿瘤细胞培养
从液氮罐取出MCF-7，立即置入40摄氏度的温水中水浴，然后将800ml培养液加入离心管中，应用离心管对MCF-7进行离心。十分钟后取出并放置于培养皿中，加入牛血清蛋白溶液，并置于培养箱中培养，设置温度为37摄氏度。
1.3实验方法
将5-Fu这种化疗敏感药物作为实验中的阳性对照试剂，将1640培养液作为阴性对照，将氯仿、乙醚以及醋酸乙酯等提取物作为受试药物。实验过程中设定肿瘤细胞对照组、药物试验组。选择处于生长对数期的MCF-7，并调节浓度为每毫升1×105个。吸取肿瘤细胞培养皿中的上层悬浮液，然后接种于多孔培养板上，每孔加入100μL化学提取物。设定培养温度为36摄氏度，二氧化碳饱和度为5%。培养48小时后离心，选择下层沉淀，并将20μLMTT加入每个培养孔中。继续培养5小时，然后加入二甲基亚矾100μL，于振荡器中振荡五分钟，使用酶标仪对每个孔的吸光度进行测定，设定测定波长为550纳米，统计各组的光密度值（OD值）。抑制率=（1-用药组/对照组）×100%。
1.3统计学分析
对所得到的数据进行分析处理，采用单因素方差检验，各组所得数据应用（x±s）表示，组间对比采用 t 检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
由上述统计数据可知，在浓度为1：10、1：100以及1：200时，氯仿提取物对MCF-7的活性抑制率较阳性对照组更高，而浓度为1：500、1：800以及1：1600时，其活性抑制率较阳性对照组更低，差异具统计学意义（P<0.05）。而乙醚提取物、醋酸乙酯提取物等在不同浓度的抑制率较阳性对照组均偏低，差异具统计学意义（P<0.05）。表明氯仿提取物能够有效抑制MCF-7的增殖，而其它样品对MCF-7的抑制作用不明显。
3.讨论
树舌灵芝也称作扁灵芝，属于真菌类，有柄灵芝为其近缘种[2]。树舌灵芝的药用价值高，性平、微苦，具有消炎止痛、清热解毒的作用[3]。树舌灵芝具有杀菌、提高免疫力等多种药理学特性，并且在很多疾病中均有应用[4]。我国一些制药企业从树舌灵芝中得到粗提取物，并制成多种复方制剂，如复方树舌片、树舌多糖胶囊等。当前主要是应用传统中药方法对树舌灵芝中的化学成分进行提取，但这样的方法耗时费力，且工序繁琐，很难进行工业化生产。肿瘤实质上是由于细胞分化异常或恶性增殖所致的疾病，临床治疗的关键就是抑制肿瘤细胞的活性[5]。
本次研究中，采用有机溶剂分离、萃取等常规化学方法，并应用先进仪器设备分理出树舌灵芝中的有机化学成分。经过对浓缩液多次分离、萃取后，对提取物应用结晶法进行多次分离纯化，以提高提取物的纯度。然后应用薄层层析法与硅胶吸附法，对树舌灵芝提取物进行成分测定。采用不同的流体相系统以及硅胶柱进行分离纯化后，应用HPLC法分离制备单体化合物。之后应用MTT法研究氯仿提取物、乙醚以及醋酸乙酯提取物等对MCF-7的增殖的影响。结果表明在浓度为1：10、1：100以及1：200时，氯仿提取物对MCF-7的活性抑制率较阳性对照组更高，分别为89.7%、46.9%以及35.7%。而乙醚、醋酸乙酯提取物在不同浓度时对MCF-7的活性抑制率均偏低。这就表明树舌灵芝中的氯仿提取物对MCF-7具有抑制作用，而其它样品对MCF-7的抑制作用较小。
综上所述，氯仿提取物为树舌灵芝中发挥肿瘤抑制作用的有效成分，对于深入研究树舌灵芝的化学成分并预防与临床治疗肿瘤有一定的参考价值。
参考文献：
[1]梁欣娜，张兴燊，滕红丽.中药及其有效成分抗肿瘤作用研究[J].时珍国医国药，2013，24（01）：119-122.
[2]郭元日.浅谈灵芝提取物抗肿瘤作用的研究[J].中国医药指南，2011，9（09）：183-184.
[3]林倩倩，赵淑杰，朱鹤.树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺研究[J].安徽农业科学，2012，40（18）：9669-9671.
[4]梁欣娜，张兴燊，滕红丽.中药及其有效成分抗肿瘤作用研究[J].时珍国医国药.2013，24（01）：119-122.
[5]陆慧，贾小斌，陈彦，等.灵芝甾醇类活性成分及其抗肿瘤作用机制的研究进展[J].中华中医药杂志.2011，26（02）：325-329.
论文作者:肖金莲
论文发表刊物:《健康世界》2015年26期供稿
论文发表时间:2016/4/12
标签：灵芝论文; 提取物论文; 氯仿论文; 抑制论文; 作用论文; 乙醚论文; 活性论文; 《健康世界》2015年26期供稿论文;