王良梅 李丽霞 秦峰 南京医科大学大学第二附属医院检验科 江苏 南京 ２１００１１
【摘要】 目的通过比较四种梅毒检测方法的敏感性和特异性,选择高效、简便、特异梅毒感染诊断方法.方法 通过回顾性研究,采用甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)、梅毒螺旋体特异性抗体酶联免疫吸附试验(TP—ELIsA)、梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)、TP－胶体金试条４种方法对梅毒患者血清进行检测．结果 TRUST、TP－ELISA、TP－胶体金试条、TPPA 敏感性分别为６５％、９６．７％、９３．３％和９８．３％,特异性分别为８６．７％、９５％、９８、３％和１００％．结论 TRUST法敏感性及特异性相对较差;TP纸条敏感性不如TP－ELISA 及TPPA,但高于TRUST;TPPA 在敏感性及特异性方面均高于其他三种方法,是目前公认的梅毒确证实验． 【关键词】 梅毒螺旋体抗体 TRUST TP—ELIsA TPPA TP－胶体金【中图分类号】R４４６．１【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１０－０５６３－０１
梅毒(syphil)是由梅毒螺旋体(Treponemapallidum,TP)感染引起的一种慢性全身性性传播疾病,该病病程长,危害大,临床表现复杂,呈多样性,几乎可以累及全身各个器官[１].近年来,我国梅毒的发病人数呈急剧上升趋势,严重危害了人类和社会的健康[２].梅毒的诊断需依据病史、临床表现、血清学检测和损伤部位的鉴定.血清学检测是临床最为常用的检测方法,寻求简单、可靠、经济的检测方法一直是研究者们努力的目标.本文通过回顾性研究,应用TRUST、TP－ELISA、TPPA、TP抗体胶体金试条四种方法对患者和正常对照者血清检测,比较得出实验室评价,现将方法结果报告如下.
１ 材料与方法
１．１ 血清标本６０５例病例组均来自本院２０１４年７月一２０１５年月本院皮肤科门诊及住院手术前病人中确诊梅毒患者,６０例正常对照血清标本取自体检部健康体检人群.
１．２ 试剂TRUST 试剂盒为上海荣盛生物技术有限公司生产;TP 抗体一ELISA 诊断试剂盒(双抗原夹心法)为厦门英科新创生物科技有限公司生产;TPPA 为日本富士株式会社生产;TP抗体胶体金试验条(TP试条)由_______杭州艾康生物有限公司生产. １．３ 主要仪器奥斯邦全自动酶免分析仪MicroLabStar(Hamihon公司德国)WALLAC多用震荡器离心机１．４ 方法１．４．１TRUST 取血清５０ul和经生理盐水倍比稀释的血清５０ul(常规血清标本用无菌生理盐水作倍比稀释至１:１６,滴度高者需继续稀释),加抗原悬液５０ul,在梅毒旋转仪上以１００r/min振荡８min,室温＜１５℃可延长２－３min,肉眼观察结果,有凝集者为阳性,反之为阴性,阳性滴度即是出现凝集的最高稀释度.１．４．２TP－ELISA 按照说明书在奥斯邦全自动酶免分析系统编制运行程序进行检测.１．４．３TP抗体胶体金(TP试条)加一滴血清(约２５ul)于试条内,加缓冲液两滴(约５０ul),１５min观察结果.１．４．４TPPA 室温条件下,在U 型板上用稀释液将血清依次稀释,然后分别加入致敏和未致敏的明胶颗粒,振荡数秒,静置２h,观察结果.
２ 结果
２．１ 梅毒病人测定结果四种方法检测１２０例血清标本结果见表１.敏感度＝梅毒患者中阳性例数/梅毒患者总例数;特异性＝非梅毒患者中阴性例数/非梅毒患者总例数;阳性预测值:梅毒患者中阳性例数/阳性结果总例数;阴性预测值:非梅毒患者中阴性例数/阴性结果总例数
３ 讨论
在梅毒的诊断中,血清学试验具有重要意义.当人体感染梅毒螺旋体后４~１０ 周左右,血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体(主要是IgM 和IgG)和抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体(主要是IgG、IgM).血清学试验主要包括两种:非特异性试验如RPR、TRUST;特异性试验如TPHA、TPPA、FTA－ABS等,随着科学技术的进步,现除过筛试验外,还建立了多种TP抗体的确证试验,所用抗原有的是纯化的TP抗原,有的是重组的TP抗原,这些抗原均为TP特异抗原,因而所测定的抗体均为TP特异性抗体. 本次实验采用四种方法对６０例梅毒患者及６０例对照组测试结果表明,TRUST、TP－ELISA、TP－胶体金试条、TPPA 敏感性分别为６５％、９６．７％、９３．３％和９８．３％,特异性分别为８６．７％、９５％、９８、３％和１００％．TRUST法敏感性及特异性相对较差,考虑其原因主要是,TRUST试验是测定血清中反应素的非特异性试验,采用非特异性类脂质抗原(心磷脂)检测抗心磷脂抗体,此类抗原的大部分可以与其他非特异性抗体有交叉反应,易受某些传染病及自身免疫性疾病等因素的影响,从而出现生物学假阳性,但因其成本低廉、检测快速、直观,作为梅毒的初筛试验及在观察疗效方面有着重要意义.TP纸条在四种方法中最为简便,快速,敏感性不如TP－ELISA及TPPA,但高于TRUST,适用于用于健康人群的体检筛查.TP－ELISA法利用基因重组梅毒螺旋体的特异性抗原TP４７ (TmpA)和TP１７包被酶标板孔,采用双抗原夹心法检测梅毒螺旋体特异性IgM 和IgG抗体[３．４].此方法可应用于自动化检测系统,可以进行大批量的检测,是目前筛查和检测梅毒的一种良好方法.实验中亦发现TP－ELISA 灰区阳性的非梅毒患者经TPPA确证为阴性,与徐龙珍等报道相一致[５].TPPA在敏感性及特异性方面均高于其他三种方法,是目前公认的梅毒确证实验,但其操作复杂,费时长,难以做到自动化,限制了其大规模筛查[６]综上所述笔者认为,在梅毒检测中可以应用TP－ELISA 和TRUST、TP纸条、TPPA联合检测的方法,TP－ELISA 阳性的标本可用TP试条复查,兼做TRUST试验以观察滴度及疗效,TP－ELISA 灰区的病例应加做TPPA 试验加以验证,从而为临床梅毒的诊治提供更可靠准确的实验室参考.目前梅毒抗体定量检测已在本实验室开展,方法学评价文献也有过报道[７８９],本实验室也已开展,笔者会在后续工作中进行方法学比对,得出最理想的梅毒抗体检测方案.
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论文作者:王良梅 李丽霞 秦峰
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年9月供稿
论文发表时间:2016/2/26
标签：梅毒论文; 抗体论文; 特异性论文; 血清论文; 抗原论文; 螺旋体论文; 例数论文; 《中国综合临床》2015年9月供稿论文;