四川大学望江医院五官科 四川成都 610000
摘要；目的：通过动物实验从基因水平上研究中药复方对脾虚型AR的治疗机制。方法：将健康SD大鼠随机分为7组。建立变应性鼻炎模型，用药七天后，检测大鼠IL-2 mRNA，β1-Defensin mRNA等变化。结果：用药七天后各治疗组的鼻部评分与模型组相比有差异（p<0.05）。IL-2 mRNA，β1-Defensin mRNA表达：脾虚AR组和AR组与空白组相比有显著性差异（p<0.01）。脾虚AR组与AR组相比有统计学差异（p<0.05）；各治疗组与AR组相比有显著性差异（p<0.01）。结论：中药能明显改善鼻粘膜病理反应；并通过多层次，多角度对细胞因子mRNA表达的调节，能起到很好的防治作用。
关键词：脾气虚；变应性鼻炎；β1-Defensin；IL-2
变应性鼻炎（Allergic Rhinitis AR）即过敏性鼻炎，在我国占全部鼻病的40.5%，且病程反复，难以治愈，是中西医工作者都感颇为棘手的问题[1]。对于鼻鼽的病理机制，导师熊大经教授通过多年的临床实践，发现本病虽有先天察赋差异，更有后天生化医乏同时由于现代人生活节奏较快，工作思想压力大，不健康饮食生活习惯等，更损脾胃，脾气更弱，以致土不生金，肺虚益重。故应治从中焦脾土，培土生金，强健后天生化之源，既能兼行助肾以纠正先天察赋之差异，又可助肺以御邪。方能取得逐渐消除症状、防止复发的功效。根据上述处方原则，导师拟定出从脾论治鼻鼽的经验处方。本课题拟以建立实验性脾气虚变应性鼻炎大鼠模型，试图探讨中药对脾气虚变应性鼻炎在生物化学方面的可能治疗机制。
1.实验材料
1.1实验动物SD大鼠70只，SPF级，由四川省医学科学院实验动物研究所提供。
1.2试剂及药品：中药复方由成都中医药大学附属医院制剂室提供，卵白蛋白由美国SIGMA公司生产，TaKaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver.3.0试剂盒PCR引物由宝生物工程（大连）有限公司生产。
1.3重要器械：低温高速离心机：德国Pico.Heraeus公司生产；梯度PCR仪（英国Thermo Hybrid公司生产。
2.实验方法
2.1造模及分组方法SD大鼠70只，自由喂养一周后，将大鼠随机分为7组。每组10只。即①空白组②脾气虚AR组③脾气虚AR中药组④脾气虚AR西药组⑤ AR组⑥AR中药组⑦AR西药组。脾气虚模型：采用饮食不节加游泳疲劳过度综合因素伤脾的方法。变应性鼻炎模型：按照安云芳报道的方法造模[2]。实验组动物以卵白蛋白0. 30mg作抗原，氢氧化铝粉末30mg作佐剂，加生理盐水lml形成混悬液，腹腔内注射，隔日1次，共7次。腹腔注射免疫完成后，每侧鼻腔均以5%卵白蛋白的生理盐水溶液20u1局部免疫，每日1次，共7次。空白组动物不予任何处理。药物干预：除空白组、脾气虚AR组、AR组外，其余各组在局部激发的同时，每日分别予以相应的药物干预，给药1小时后再予以5%的卵白蛋白溶液局部半量激发，即5%的卵白蛋白溶液20ul，每侧10ul滴入大鼠双侧前鼻孔。
2.2给药方法：造模结束后，即第22天后开始给药，根据实验动物与人用药量的换算方法计算出用药剂量[3]。给药时间为7天。脾虚AR中药组：每日以成人临床剂量8倍的中药灌胃，每日一次。脾虚AR西药组：每日以成人临床剂量8倍氯雷他定灌胃，每日一次。AR中药组：每日以成人临床剂量8倍的中药灌胃，每日一次。AR西药组：每日以成人临床剂量8倍的氯雷他定灌胃，每日一次。空白组、AR模型组、脾虚AR模型组：正常喂养，并用相同量的生理盐水灌胃。
3.观察指标及检测方法
3.1一般情况观察及鼻部症状评分 从造模第一天开始，观察动物行为、状态、体征、摄食、饮水、大小便性状等情况，着重于鼻部症状观察，即鼻痒、喷嚏、鼻分泌物等情况并在末次激发后对鼻部症状进行评分。记分标准：1分，喷嚏1-3个、清涕流至前鼻孔、单前肢偶有挠鼻。2分，喷嚏4-10个、清涕超过前鼻孔、双前肢挠鼻。3分，喷嚏10个以上、清涕流至面部、不停到处擦鼻。3个症状叠加量化记分。5分或5分以上为造模成功。观察时间：局部滴入5%的卵白蛋白溶液后30分钟内。
3.2鼻黏膜组织IL-2 mRNA，β-1Defensin mRNA的表达RT-PCR检测：处死大鼠后，在超净工作台上取鼻黏膜用逆转录聚合酶链反应法，进行白细胞介素-4mRNA水平表达的检测，β1-Defensin mRNA的表达RT-PCR检测
3.3统计学分析 数据用SPSS13.0软件包进行分析处理，计量资料采用均数±标准差（）表示。
4实验结果及分析
4.1末次激发后鼻部症状评分
上表示：脾虚AR组和AR组与空白组相比有显著性差异（p<0.01）。脾虚AR组与AR组相比有统计学差异（p<0.05），脾虚AR中药组和脾虚AR西药组R中药组和AR西药组与AR组相比有显著性差异（p<0.01）。
5讨论
IL-2在维持介导机体的免疫预防、免疫稳定和免疫监视中起重要作用。本试验提示：中药和西药均能恢复AR大鼠及脾气虚变应性鼻炎大鼠鼻粘膜IL-2 mRNA表达。我们根据大量文献得知，许多中药对IL-2具有调控作用。如钱玉昆报道枸杞子提取物，对丝裂原诱导的T，B淋巴细胞增殖反应及IL-2的产生有明显促进作用，当浓度为下降时时则呈不同程度的抑制效应[4]。我们推测在可能是中药复方中诸药尤其黄芪、山药、大枣等健脾益气药能在细胞Tho期时，通过细胞因子、激素等多方面调节作用，可使Thl上调，Th2下调，纠正过敏时Th2亢进，Thl受抑制，重建Th1/Th2平衡，从而发挥对变应性鼻炎的治疗作用。防御素被称为抗菌肽内源性抗生素，是近10多年来在天然免疫分子机制研究方而所获得的重要进展之一[5]。β-1 Defensin是机体免疫反应的重要组成部分。人类鼻黏膜分布着大量的β-1 Defensin，参与鼻黏膜正常防御功能。β-1 Defensin能通过与人趋化因子受体 6结合趋化树突状细胞、T细胞、巨噬细胞等细胞，而这此细胞分别启动原始兔疫和记忆性兔疫反应 [6]。本实验发现中药和西药均能恢复AR大鼠及脾气虚变应性鼻炎大鼠鼻粘膜β-1Defensin mRNA表达。中药复方能提高β-1的表达，说明中药复方能增强内源性防御素的表达，诱导先天性免疫分子，调控特异性免疫，从而全面提高机体免疫功能。
参考文献：
1李 冶，顾美珍等变应性鼻炎治疗进展中华现代眼耳鼻喉科杂志 2007年第4卷第
2.安云芳，赵长青，朱庆义，等.变应性鼻炎鼻粘膜P物质受体的研究.中华耳鼻咽喉科杂志.1998.33（3）：139～14
3.陈奇主编。中药药理研究方法学。人们卫生出版社，1993.33～34
4.钱玉昆.中药（苦参及构祀子）对免疫细胞和免疫因子的实验调节[J].中华微生物学和免疫学杂志.1989，（8）：312.
5.刘媛媛，赵宝华. 防御素的研究进展和应用前景[J].中国医药生物技术2009，4（4）：
6.王成硕，董震. 防御素与鼻黏膜免疫[J]．中华耳鼻喉科学杂志2003，38（2）
作者简介：
卜献策、单位：四川大学望江医院五官科、出生年月：1983.03.02、籍贯：云南陆良、学历：硕士研究生，目前职称：医师（初级）、主要从事工作：五官科（眼、耳鼻喉）临床。
论文作者:卜献策
论文发表刊物:《健康世界》2017年第6期
论文发表时间:2017/6/6
标签：中药论文; 鼻炎论文; 免疫论文; 卵白论文; 大鼠论文; 脾气论文; 西药论文; 《健康世界》2017年第6期论文;